TP: Détermination de la glycémie par la méthode à la glucose oxydase / peroxydase

1.1) Principe
Les réactions impliquées dans le dosage du glucose sont les suivantes :

Glucose oxydase
Glucose + O2 acide gluconique + H2O2

peroxydase
2H2O2 + phénol + amino-4-antipyrine quinonéimine + 4H2O
(rouge)

1.2) Dosage (2 essais)

Réaliser le dosage sur le sérum du patient SA selon le mode opératoire suivant :

Introduire dans une cuve de spectrophotomètre :

- 10 µL de sérum à doser, tube noté SA
- 1 mL de solution de travail : Réactif glucose RTU, tube noté STG

Lire les absorbances à 505 nm contre un témoin réactif, après 10 minutes d’incubation à 37°C.

1.3) Contrôle
Valider les résultats à l’aide de la solution de contrôle C à 10 ± 0,1 mmol.dm-1, tube noté C.

1.4) Etalonnage
préparer 5 solutions étalons qui seront ensuite traitées comme les échantillons à doser.

La technique de pesée sera notée.

1.5) Résultats
- Expliquer la préparation de la gamme étalon.
- Tracer la courbe d’étalonnage sur ordinateur.
- Faire un tableau de la gamme et des résultats expérimentaux.
- Valider le contrôle et les essais.
- Déterminer la glycémie du patient en mmol/L et en g/L.
- Conclure
Données :
Limite de linéarité de la méthode : 2 mmol.L-1 dans l’échantillon
Coefficient de variation de répétabilité = 3%
SR = 0,3
Stabilité de la coloration : 30 minutes
Mglucose = 180 g.mol-1

Valeurs usuelles de la glycémie : 3,9 à 5,8 mmol.L-1

Valeur antérieure du patient : 8,5 mmol.L-1

PREPARATIF ABM TP - MATERIEL

1. Détermination de la glycémie :

1
-Solution de travail = glucose RTU : tube noté STG : 9 mL/élève
-Solution de contrôle = solution de glucose à 10 ± 0,1 mmol.dm-1: tube noté C : 1mL/élève
-glucose pur et anhydre : flacon noté glc : 0,5 g /élève
-Sérum = solution de glucose :
tube SA = 1mL/élève

3. Matériels

-gants, poubelles jaunes

- fiole jaugée de 100 mL et une capsule de pesée
-6 tubes à hémolyse + portoir
-8 microcuves
-1 bain marie à 30°C et 1 à 37°C
-pipettes automatiques + cônes : P1000, P20
-3 bécher
-1 spectro
-parafilm
-1 chrono