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République Algérienne Démocratique et Populaire

Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique


École Nationale Supérieure de Biotechnologie, Constantine

Génie Enzymatique
TD n°2

Exercice 1

On veut séparer trois acides aminés :


L’acide L-lysine, l’acide L-glutamique et l’acide L-leucine sur une résine polystyrénique
substituée par des groupements sulfonate (-SO3).
Les pH isoélectrique des trois acides aminés sont respectivement : 9,74 ; 3,22 et 5,98 à 25°C.
On dépose ces trois acides aminés sur colonne à pH 2, puis on élue en ramenant
progressivement le pH à 7.

- En considérant les interactions entre les acides aminés et la résine uniquement d’ordre
électrostatiques, quels acides aminés sont élués et dans quel ordre ?

Exercice 2

Un mélange d’immunoglobuline G (MM=160000 Da) et d’albumine sérique bovine (MM=


67000 Da) est déposé sur colonne de Sephadex (G-100) (limite d’exclusion = 100000 Da).

- Tracez un diagramme d’élution vraisemblable (DO en fonction de Ve) en indiquant le


volume mort.

Exercice 3

- Rappelez le principe de l’électrophorèse des protéines en conditions dénaturantes.


- À partir du profil électrophorétique ci-dessous, calculez la masse molaire de la
protéine inconnue.

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Exercice 4

Le coefficient de partage de (I2) entre deux solvants non miscibles : le tétrachlorométhane et


l’eau est égal à 100 à 25°C, à 10ml de solution aqueuse d’iode à 10g/l on ajoute 10ml de
tétrachlorométhane. (I2 est plus soluble dans le tétrachlorométhane que dans l’eau).

- Déterminez la concentration de I2 dans le tétrachlorométhane et dans l’eau après


agitation et décantation.

Exercice 5

Une enzyme a été purifiée en trois étapes en partant de 1000g d’un extrait brut contenant au
total 20000 unités de cette enzyme.

- Complétez le tableau ci-dessous :

Protéine (g) Activité (UE) Taux de purification Rendement


Extrait brut 1000 20000
Chromato d’exclusion 200 14000
Chromato d’échange d’ions 15 4500
Chromato d’affinité 0,5 3500

Exercice 6

L'activité d'une enzyme est testée après deux étapes de purification successives :
- Étape 1 : 1,2g de protéine sont récupérés dans 50ml (extrait 1).
- Étape 2 : 0,36g de protéine sont récupérés dans 12ml (extrait 2).

La dilution de 20 microl de chaque extrait dans 1ml de milieu réactionnel se traduit par la
formation de 1,6 micromole (extrait 1) et 5,9 micromoles (extrait 2) de produit par minute.

- Quel est le rendement de la purification ?

L'activité de l'enzyme est testée sur les mêmes extraits obtenus après purification:

- Quel est l'enrichissement (=degré de purification) de l'enzyme au cours de la


purification ?

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