Université de Bouira

Institut des Sciences et Techniques Appliquées, ISTA-Bouira

Année universitaire 2020/2021 (S03)

CHAPITRE II

METHODES CHROMATOGRAPHIQUES

Généralités sur la Chromatographie

1. Définitions :

 chromatographie : Techniques de séparation des constituants d’un mélange

homogène qui est basée sur un processus de migration différentielle, où les
analytes se répartissent en 2 phases, l’une mobile par rapport à l’autre stationnaire
(ϕs et ϕm).
 Le chromatogramme est une courbe qui traduit la variation au cours du temps
d’un paramètre relié à la concentration instantanée du soluté en sortie de colonne
(fig. 1.3). Le temps (ou très rarement le volume d’élution) est porté en abscisse et
l’intensité du signal de détection en ordonnée.
 phase stationnaire (ϕs) : phase qui reste en place dans une colonne ou sur une
plaque
 phase mobile (ϕm) = éluant phase qui se déplace sur ou à travers la ϕs elle
entraîne les constituants à analyser
 éluat = solution recueillit à la sortie de la colonne la chromatographique permet
l’identification et le dosage des substances.
 élution= processus au cours duquel on sépare les phases
2. Classification :

 chromato en phase liq : PM=liq et PS=solide (LS) ou PS=liquide (LL)

 chromato en phase gazeuse : PM=gaz et PS =solide (GS) ou PS =liquide
(GL)
 Chromatographie ionique. La phase stationnaire solide comporte en surface des
sites ioniques et la phase mobile est une solution-tampon aqueuse.

1
3. Grandeurs chromatographiques
3.1 Rapport de distribution K du soluté
Les séparations chromatographiques sont basées sur la répartition des solutés dans
deux phases: soluté A (phase mobile) ↔ soluté A (phase stationnaire) La constante
d'équilibre de cette réaction est appelée: rapport de distribution K.
K est égal au rapport des concentrations du soluté A dans les deux phases:
KA = [A]stat / [A]mob
[A]stat = concentration en mol. L-1 du soluté dans la phase stationnaire = [A]S
[A]mob = ...... phase mobile = [A]M

3.2 Temps de rétention du soluté

t0 est le temps du début de l'injection

• Le temps mort (tm) est le temps mis par un composé non retenu par la phase
stationnaire pour traverser la colonne (temps passé dans la phase mobile)
• Le temps de rétention (tr), qui représente le temps écoulé entre l’instant de
l’injection et celui qui correspond sur le chromatogramme au maximum du pic.
• Le temps de rétention réduit (t'r) est le temps passé par un soluté dans la phase
stationnaire, est la différence entre le temps de rétention et le temps mort est désignée
par le temps de rétention réduit du composé t’r.

3.3 Facteur de résolution (R) : La résolution est la grandeur qui caractérise l'aptitude
d'un système chromatographique (colonne, solutés, solvants) à séparer 2 solutés. Le
but de la chromatographie est d'obtenir la meilleure résolution dans le temps le plus
court.
( trB −tr A )
R=2
(W A+ W B )

2
R < 1 : mauvaise résolution
1 < R < 1,4 : résolution acceptable
1,4 < R < 1,6 : résolution optimale
R > 1,6 : résolution trop bonne.

3.4. Facteur de séparation

Le facteur de séparation α permet de préciser les positions relatives de deux pics adjacents 1
et 2 sur un chromatogramme. Il est défini par les relations suivantes

t ' rB
α=
t ' rA

Il ne peut, par définition, être inférieur à 1, toujours supérieur à 1

3.5. Volume d’élution ou volume de rétention VR

Le volume d’élution (de rétention) VR de chaque soluté représente le volume de phase mobile
qui s’est écoulé entre l’instant de l’injection et celui correspondant au maximum du pic. Si le
débit D est stationnaire, VR = tR ·D
3.5.1. Volume de la phase mobile dans la colonne (volume mort VM)
Le volume de la phase mobile dans la colonne (encore appelé volume mort) VM
correspond au volume interstitiel accessible. Il peut être calculé d’après le
chromatogramme, On peut l’exprimer en fonction de tM et du débit D :
VM = tM ·D
3.5.2. Volume de la phase stationnaire
Ce volume désigné par VS n’apparaît pas sur le chromatogramme. Dans les cas
simples on le calcule en retranchant du volume total interne de la colonne vide le
volume de la phase mobile.
3.6. Facteur de rétention K’ :

KA’ = t’r /tm

4. Théorie de base de la chromatographie

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4.1 Théorie des plateaux
 On assimile la colonne chromatographique à une colonne à distiller de longueur L
 Cette colonne est constituée de qlq plateaux fictifs appelés plateaux théoriques
 Une colonne est constituée de N plateaux théoriques (de même hauteur)
 La taille des plateaux, H, est appelée Hauteur équivalente à 1 plateau théorique
(HEPT)
HEPT = L/N (1)

N= 16 ( tr1/w1) 2
N= 16 ( tr2/w2) 2

On calcule N moyen