TD2 Prof. A.

EL MEZIANE

Université Cadi-Ayyad
FST –Marrakech
Département de Biologie

TD 2

1. Un échantillon de chromatine est brièvement traité avec de la nucléase micrococcale qui

dégrade l'ADN double brin.
a. L'analyse par électrophorèse sur gel d'agarose montre que les produits sont des segments
d'ADN double brin d'une longueur d’environ 200 pb. Expliquez ces résultats.
b. Si on laisse la digestion se poursuivre pendant une période de temps prolongée, des ba ndes
d'ADN de 146 pb sont observées sur le gel d'agarose. Expliquer.

2. Les pourcentages d'arginine et de lysine dans les histones de l'ADN de thymus de veau sont
indiqués dans le tableau ci-dessous. Pourquoi les histones ont-elles un grand nombre de résidus
Lys et Arg ?
Histones % Arg % Lys
H1 1 29
H2A 9 11
H2B 6 16
H3 13 10
H4 14 11

3. Les histones H4 des bovins et des petit-pois diffèrent seulement par deux acides aminés sur
102 résidus totaux. On retrouve respectivement à la place de la Val 60 et de la Lys 77 dans la H4
bovine l’Ile et l’Arg dans les petit-pois. Pourquoi se retrouve-t-on avec la même séquence de H4
dans les deux espèces ?

4. L’expérience de Meselson et Stahl ont montré que la réplication du génome est semi -
conservatrice. Dessinez un diagramme qui illustre la composition des molécules filles d'ADN pour
la deuxième, la troisième et la quatrième génération.

5. Les DNA helicases peuvent être considérés comme des moteurs moléculaires qui convertissent
l'énergie chimique de l'hydrolyse des NTP en énergie mécanique pour séparer les brins d'ADN.
Le génome du bactériophage T7 code pour une protéine qui s'assemble en un anneau hexamérique
avec une activité hélicase.
a. Afin d’ouvrir la double hélice d’ADN, l'hélicase nécessite deux ADN simple brin au niveau
d’une extrémité d'ADN. Cependant, l'hélicase semble encercler seulement l’un des deux
brins. Est-ce cohérent avec sa capacité d’ouvrir un ADN double brin ?
b. Les mesures cinétiques indiquent que l'hélicase T7 se déplace le long de l'ADN à une
vitesse de 132 bases par seconde et hydrolyse 49 dTTP par seconde. Quelle est la relation
entre l'hydrolyse du dTTP et l’ouverture de la double hélice d’ADN ?
c. Que suggère la structure de l'hélicase T7 sur sa « processivity »?

6. Classez les ADN polymérases humaines α, δ et e selon leur « processivity ».

7. La RNase H supprime l'amorce d'ARN à l'extrémité 5' d'un fragment d'Okazaki. Comment
l'enzyme peut-elle faire la distinction entre l'ARN et l'ADN adjacent ?
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8. Un mélange réactionnel contient de l'ADN polymérase purifiée, les quatre dNTP et l'une des
molécules d'ADN dont les structures sont représentées ci-dessous. Lequel produit du
pyrophosphate ?

9. Donner le nom de l'enzyme qui catalyse chacune des réactions ci-dessous au cours de la
réplication.
a. Synthèse d’un brin d'ADN à partir d'une matrice d'ADN.
b. Synthèse d’un brin d'ADN à partir d'une matrice d'ARN.
c. Synthèse d’un brin d'ARN à partir d'une matrice d'ADN.

10. On estime que l'ADN polymérase δ humain produit environ une erreur toutes les 22 000
réactions.
a. Si aucune relecture n'est effectuée, combien d'erreurs contiendrait-elle une molécule
fille ?
b. La relecture réduit le taux d'erreur de l'ADN polymérase d’environ 100 fois. Combien
d'erreurs contiendrait-il l'ADN néosynthétisé lors de la relecture ?

11. Quel est le rôle de l'ADN gyrase lors de la réplication de l'ADN bactérien ?

12. Plusieurs molécules ont été utilisées en thérapie pour inhiber les topoisomérases. La
Novobiocine et la ciprofloxacine sont des antibiotiques. Tous les deux inhibent l'ADN gyrase. La
doxorubicine et l'étoposide sont des médicaments anticancéreux qui inhibent les topoisomérases
eucaryotes. Quelles propriétés distinguent-elles les antibiotiques des médicaments
anticancéreux ?

13. L’anticancéreux doxorubicine est appelé poison de la topoisomérase II car il bloque la

catalyse après le clivage de l'ADN et avant qu'il ne soit relié. Cependant, l’anticancéreux
aclarubicine est appelé « inhibiteur catalytique » car il empêche la liaison de la topoisomérase II
à l'ADN. Qu'est-ce qui distingue un inhibiteur d'un poison ?

14. Dans une expérience, le segment AAUCCC de la matrice ARN de la télomérase a été muté.
Cette mutation va-t-elle changer la séquence télomérique ? Expliquer.