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Détermination de la teneur en azote et calcul de la teneur en

protéines brutes _ Méthode Kjeldahl

1- OBJET ET DOMAINE D’APPLICATION :

la présente méthode permet la détermination de la teneur en azote des aliments des animaux,

Selon la méthode Kjeldahl, et une méthode de calcul de la teneur en protéines brutes.

La méthode ne fait pas la distinction entre l’azote protéique et l’azote non protéique.

2- PRINCIPE :

Minéralisation de la matière organique par l’acide sulfurique en présence d’un catalyseur ,

Alcalinisation du minéralisât par une solution de soude (40%), l’ammoniac libéré est entraîné

par distillation et recueilli dans un excès d’acide borique puis titré par l’acide sulfurique 0.1N

Multiplication du résultat par le facteur conventionnel 6.25 afin d’obtenir la teneur en

protéines brutes.

3-REACTIFS :

Catalyseur : Sulfate de potassium  k2O4S M= 174.27 g/mol

Sulfate de cuivre II penta hydraté (CuSO4, 5H2O) M= 249.69 g/mol

Dioxyde de sélénium

Acide sulfurique 95%-98% ; d=1.83 ; M= 98.07 ; 96.4%

Tryptophane ; point de fusion à 282 °C; teneur en azote 137.2g/kg sécher le tryptophane

Avant utilisation une nuit à 80 °C

Solution d’hydroxyde de sodium 40% (m/m)

Acide borique 20% ; 61.83 g/mol

Acide sulfurique 0.1N

Sulfate d’ammonium déshydraté pour analyse ; (contrôle du distillateur )


Indicateur Tashiro (indicateur mixte) :

Dissoudre 2g de rouge méthyle et 1g de bleu de méthylène dans 1000ml d’éthanol à 95%


(v/v)

5-APPAREILLAGE

Balances analytiques : LE 0301 ; LE 0301 


Digesteur : LE1701 ; LE1701.
Distillateur : LE0901 ; LE0902
Broyeur : LE0501 ; LE0601
Matériel courant du laboratoire

5-PREPARATION DE L’ECHANTILLON POUR ESSAI

Préparer l’échantillon pour essai conformément à l’ISO 6498

6-MODE OPERATOIRE

Prise d’essai :

-Peser, à 1mg prés, une masse d’échantillon pour essai choisie en fonction de la teneur

Présumée en azote ,de façon que la teneur en azote,contienne entre 0.005-.2g.

Minéralisation :

-Introduire la prise d’essai dans le godet ayant une capacité convenable (en général 800ml)
ajouter 11g du catalyseur d’un mélange (1g de dioxyde de sélénium,10g de sulfate de
cuivre,100g de sulfate de potassium )

-Ajouter 20ml d’acide sulfurique 95%, mélanger soigneusement de manière à assurer un

Mouillage complet de la prise d’essai.

-Placer les godets dans le minéralisateur réglé à une température de 460°C, laisser pendant

Deux heures (poste 10)

Distillation :

-après refroidissement

-Sur le distillateur, placer le godet avec échantillon minéralisé en pressant le support vers le

bas . Mettre l’erlenmeyer de 250 ml contenant deux gouttes de l’indicateur en dessus de la

sortie du distillat.
-Commencer la distillation après sélection sur le menu distillation puis appuyer sur la touche

-START : Addition automatique de 50ml d’acide borique 2% et sur le minéralisât s’ajoute

50ml d’eau et 80ml de soude 40%, à la fin de la réaction, l’ammoniac distillé est récupéré

dans l’erlenmeyer contenant l’acide borique 2%.

Dosage direct :

Le titrage se fait par l’acide sulfurique 0.05mol/l jusqu'à indication du point final
par le changement de coloration du vert au violet.
NB : le titrage doit être effectuer le plus rapidement possible, une fois la distillation terminée,
en s’assurant que la température du distillat ne dépasse pas 25°C.
Dans ces conditions, on évite les pertes d’ammoniac.

Essai à blanc :
Effectuer un essai à blanc contenant tous les réactifs sauf l’échantillon ( dans le godet, on fait
juste la catalyseur et l’acide )
Essai de contrôle :
1- Le contrôle du minéralisateur se fait par la détermination de la teneur en azote du
tryptophane ( dans une série, 0.15 g du tryptophane par godet)
il convient que la récupération de la teneur en azote soit d’au moins 99%.
2- Le contrôle du distillateur se fait par la détermination de la teneur en azote du sulfate
d’ammonium déshydraté ( dans une série, entre 0.3-0.4 g par godet)

Expression des résultat :

Taux d’azote (%) = (V-V° ) * C1*M


PE
V  : volume de l’acide sulfurique 0.05mol/l utilisé pour l’ échantillon
V° : volume de l’acide sulfurique 0.05mol/l utilisé pour l’essai à blanc
C1 : est la normalité de l’acide sulfurique 0.1N
M : est la masse molaire de l’azote M=14 g/mol
PE : prise d’essai en g

Taux de protéines = Taux d’azote (%)*6.25

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