US THB/Fa culté de chimie 2021/2022

TAC1 (IMPCA)/S1 2 ème Année SM

Série 3: Chromatographie (Analyse qualitative)

Exercice 1:
Trois composés A, B et C sont séparés par chromatographie sur une colonne d'une longueur
de 5 cm. La vitesse linéaire moyenne de la phase mobile est de 0,16 cm.s -1. Les temps de
rétention et les largeurs à la base des pics sont donnés par le tableau suivant :

1) En quelle unité exprime-t-on w ? A quoi correspond w ?

w représente la largeur à la base d’un pic chromatographique et s’exprime généralement en
min.
2) Quel est le composé le plus retenu ?
Le composé le plus retenu est le composé C car c’est celui qui sort de la colonne avec le
temps de rétention le plus grand.
3) Calculer le temps mort tm.

4) Calculez pour chaque composé :

• le facteur de rétention k' ;

Seule la valeur de k’A est acceptable, les deux autres valeurs sont beaucoup trop élevées, en
effet, des valeurs idéales pour k’ sont des valeurs comprises entre 1 et 5.

• le nombre de plateaux théoriques N (les pics sont supposés gaussiens).

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5) Calculez pour chaque couple :
• le facteur de sélectivité α ;

• la résolution Rs.

6) Conclure sur la séparation des composés étudiés.

Rs > 1,5 : tous les composés sont bien séparés. mais les valeurs de Rs sont trop grande. On
pourrait optimiser la méthode de séparation pour diminuer la durée d’analyse qui est
inutilement trop grande.

Exercice 2 : Identification par l’indice de Kovats

On injecte une série homologue de n-alcanes et on relève les temps de rétention absolus de
chaque alcane sur le chromatogramme obtenu :

n 1 5 6 8 9 10 11 12
Tr (min) 0,45 0,78 1,13 3,48 6,81 13,79 28,47 59,27

1) Tracer la courbe log t’r = f(n), n étant le nombre d’atomes de carbone des alcanes considérés.
Vérifier la linéarité de la courbe et calculer les paramètres a et b.
Tr du méthane (qui n’est pas retenu par les phases stationnaires liquides) est le temps mort.
Donc Tm = 0,45 min.
n 1 5 6 8 9 10 11 12
Tr (min) 0,45 0,78 1,13 3,48 6,81 13,79 28,47 59,27
T'r (min) 0 0.33 0.68 3.03 6.36 13.34 28.02 58.82

2
y = 0.322x - 2.0953
1.5 R² = 1
1

0.5

0
0 2 4 6 8 10 12 14
-
0.5

-1
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La courbe est linéaire. a= 0,322 et b= -2,09.

2) En déduire le temps de rétention corrigé t’r de l’heptane ainsi que son indice de rétention IR.

- par méthode graphique (par projection sur la droite) avec n=7.

- en utilisant l Ȏquation de la droite.
On aura : logT’r(heptane)= 0,159. T’r(heptane) = 1,44 min.
IR(heptane) = 700.
3) Le temps de rétention absolus de différents solutés, injectés dans les mêmes conditions que
les alcanes, sont donnés ci-dessous :

Soluté pentanol heptanal octanone

Tr(min) 2,21 5,08 8,62
Déterminer graphiquement leurs indices de rétention. On prendra comme tm, le temps mort
utilisé pour la série des alcanes. Calculer ces indices par la formule de Kovat’s. (vu en cours).

Exercice 3

Les deux chromatogrammes ci-dessous ont été obtenus en utilisant deux phases stationnaires
différentes :
a) phase stationnaire de siloxane de méthyle (95%) phényle (5%) (ZB-5) qui est une phase non
polaire.
b) phase stationnaire de poly (éthylène glycol) "Carbowax" (ZB- WAX) qui est une phase polaire.

1) les colonnes utilisées sont-elles remplies ou capillaires ? justifier

Colonnes capillaires. Justification : d’après les donnée : DI= 0,32 mm et le diamètre interne
d’une colonne capillaire est DI=0,1-0,52 mm.
2) Quel effet aura le changement de la polarité de la phase stationnaire sur:
a) le facteur de rétention k
k change - la valeur de k dépend de la structure chimique de la phase stationnaire et, si la polarité
de la phase stationnaire a changé, cela signifie que la structure chimique a changé.
b) l’aire du pic
Pas de changement – l’aire du pic dépend de la concentration de l'analyte.
c) la HEPT
la HEPT change. Elle dépend de la structure chimique de la phase stationnaire.
d) la sélectivité α
α Change - la valeur de α dépend de la structure chimique de la phase stationnaire.
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3) Le mélange d'hydrocarbures utilisé est constitué de deux groupes de composés; les alcanes
et les aromatiques. Quel est le groupe le plus affecté par le passage à une phase stationnaire
plus polaire? Pourquoi?
Le groupe le plus affecté est : Les composés aromatiques.
Explication :
Les alcanes sont non polaires et les seules forces intermoléculaires dans lesquelles ils
sont impliqués sont les forces de dispersion (forces de London).
D'autre part, les aromatiques ont les électrons délocalisés, ce qui peut donner aux
molécules une très faible polarité.

4) Les points d'ébullition de certains de ces composés sont données dans le tableau suivant:

a) Comparer l’ordre des points d’ébullition et l’ordre d’élution dans le premier

chromatogramme.
L'ordre des points d'ébullition est le même que l'ordre d'élution.

Quelle propriété des composés détermine l’ordre d’élution sur la colonne non polaire et pourquoi le m-xylène et
le p-xylène ne sont pas séparés sur le chromatogramme ?

Les composés vont être séparés en fonction de leur volatilité. Les composés les plus volatiles
(ayant une température d’ébullition plus faible) sortiront en premier. Mais si deux composés
ont une volatilité proche ou identique, les composés ne vont pas être séparés.
La raison pour laquelle les isomères du xylène ne sont pas séparés (voir leurs points
d'ébullition).

b) Qu'est-ce qui fait que l'ordre d'élution change quand le mélange est séparé sur la phase
stationnaire polaire?
Avec la colonne la plus polaire, les composés aromatiques peuvent interagir avec la phase
stationnaire d'une manière par laquelle les alcanes ne peuvent pas.
Entre les deux isomères m-xylène et p-xylène : le p-xylène est apolaire (présence de plan de
symétrie) et le m-xylène (qui ne présente pas de plan de symétrie) est relativement polaire.
C’est la raison pour laquelle, ce dernier (m-xylène) est plus retenu sur la colonne la plus
polaire.

Exercice 4:
Les deux chromatogrammes ci-dessous ont été obtenus en utilisant une phase stationnaire
HPLC non polaire et une phase mobile acétonitrile / eau pour la séparation de trois composés
dans un mélange. L'un des chromatogrammes a été obtenu avec de l'acétonitrile à 12% dans de
l'eau et l'autre avec 6% d’acétonitrile dans l’eau.

1) commenter les deux chromatogrammes obtenus.

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La résolution dans le chromatogramme B est bien meilleure que dans le chromatogramme A -
il n'y a presque pas de séparation évidente dans le chromatogramme A et les trois substances
sont co-éluées.

2) En modifiant le pourcentage d’acétonitrile dans la phase mobile, Comment le facteur de

rétention sera-t-il affecté?

L'acétonitrile est moins polaire que l'eau, le changement du% d'acétonitrile dans la phase mobile
modifie la polarité de la phase mobile. En chromatographie, l'analyte est partagé entre les phases
mobile et stationnaire – le facteur de rétention (k’) décrit cette partition. Changer la polarité de
la phase mobile affectera la solubilité de l'analyte dans celle-ci et donc changera la valeur de
k’, ce qui changera le temps de rétention et la résolution.

3) Quelle phase mobile qui a une force d'élution plus grande (c'est-à-dire conduit à des temps
de rétention plus courts)? Expliquer brièvement.

La force d'élution est plus grande pour les phases mobiles qui sont de même nature que la phase
stationnaire. La phase mobile est constituée de : eau + acétonitrile. L'acétonitrile est moins
polaire que l'eau. La phase mobile avec 12% d’acétonitrile est moins polaire que la phas e mobile
avec 6% d’acétonitrile. Donc la phase mobile à 12% d’acétonitrile aura la force d’élution la plus
élevée et conduira à des temps de rétention plus courts.
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4) Quelle phase mobile a été utilisée pour obtenir le chromatogramme B?

La phase mobile est : 6% acétonirile.

5) Pour augmenter les temps de rétention et la résolution en HPLC phase normale et en utlisant
une phase mobile hexane/éthanol, est-ce qu’on augmente ou on diminue le pourcentage de
l’hexane dans la phase mobile? Expliquer brièvement.

Pour augmenter les temps de rétention, il faut donc diminuer la force d’élution de la phase
mobile (en la rendant moins semblable à la phase stationnaire). En HPLC en phase normale,
cela signifie que la phase stationnaire est polaire donc pour augmenter les temps de rétention
on doit diminuer la polarité de la phase mobile – on doit augmenter donc le pourcentage de
l’hexane dans la phase mobile.