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THESE
par
WIDMANN Sandra
Née le18 juillet 1983
à Nice
ECOLE NATIONALE VETERINAIRE DE LYON
Année 2008 - Thèse n°
THESE
par
WIDMANN Sandra
Née le18 juillet 1983
à Nice
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REMERCIEMENTS
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A mes parents,
Pour votre soutien durant toutes ses années, pour m’avoir permis de réaliser mon rêve de
petite fille, celui de devenir un jour vétérinaire et aussi pour vous remercier de ce que je suis
aujourd’hui, un peu grâce à moi et beaucoup grâce à vous.
Merci de m’avoir toujours soutenue dans les moments heureux mais surtout dans les moments
plus difficiles et d’avoir toujours cru en moi. Je vous aime tendrement.
A ma sœur Violaine,
Parce que tu es la petite sœur parfaite qui a toujours rempli son rôle. Au temps passé à
m’écouter, à me comprendre et me soutenir. Nos liens sont uniques et inaltérables.
Aujourd’hui je te souhaite plein de bonheur dans ta vie d’adulte, tu es peut être devenue une
femme mais tu resteras toujours ma « ptite sœur ».
A la famille Widmann-Bouyssou,
Pour votre soutien et votre joie de vivre. Evelyne garde cette gaieté qui te caractérise, Caro et
Micka croyez fort en vos rêves, vous y parviendrez. Je serai toujours là pour vous.
A ma grand-mère Marcelle,
Parce que c’est chez toi que j’ai découvert les vaches et autres animaux qui m’ont donné
envie de devenir vétérinaire. La distance fait qu’on ne se voit pas assez souvent mais je pense
souvent à toi.
A ma grand-mère Marie,
Ma «mémé » qui aurait été si fière de voir que j’ai réalisé mon rêve. Ta disparition a laissé un
grand vide dans ma vie mais ton souvenir restera à jamais gravé dans mon cœur.
A Alice, Elsa et Marjo, à nos virées et nos soirées entres filles, que nos liens restent les
mêmes …….prochaines vacances dans le sud-est !!!!
A Greg, Marie, Marc, Che, Plane, Spartou et Ptichou, pour ce fabuleux groupe de clinique. Je
ne vous oublierai pas.
A tous les autres amis et connaissances que je n’ai pas nommés mais qui m’ont tous apporté
leur amitié, leur soutien et leur patience.
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Table des matières
9
1. Activité anti-bactérienne...................................................................................................... 48
a.
Spectre d’activité ............................................................................................................. 48
b.
Concentrations minimales inhibitrices ............................................................................ 49
c.
Bactéricidie...................................................................................................................... 49
2. Mécanisme d’action ............................................................................................................. 49
3. Résistances (Maure D, 1986) ............................................................................................... 50
4. Interactions avec les endotoxines bactériennes.................................................................... 51
C. Etude pharmacocinétique...................................................................................................... 52
1. Résorption ............................................................................................................................ 52
2. Distribution .......................................................................................................................... 53
a. Dans le tube digestif ........................................................................................................ 53
b. Concentrations plasmatiques, cinétiques ......................................................................... 53
c. Fixation aux protéines ..................................................................................................... 55
d. Distribution tissulaire ...................................................................................................... 55
e. Diffusion dans les liquides biologiques........................................................................... 57
3. Biotransformations............................................................................................................... 57
4. Elimination........................................................................................................................... 57
D. Etude toxicologique ................................................................................................................ 58
1. Blocage neuro-musculaire.................................................................................................... 58
2. Néphrotoxicité...................................................................................................................... 59
3. Action sur la gestation.......................................................................................................... 59
4. Autres manifestations........................................................................................................... 59
III. Etude pharmacologique et toxicologique de la bromhexine............................................... 60
A. Propriétés physico-chimiques................................................................................................ 60
1. Structure chimique ............................................................................................................... 60
2. Propriétés physiques ............................................................................................................ 61
B. Etude pharmacocinétique...................................................................................................... 61
1. Résorption ............................................................................................................................ 61
2. Distribution .......................................................................................................................... 62
3. Biotransformation ................................................................................................................ 62
4. Elimination........................................................................................................................... 63
C. Etude pharmacodynamique .................................................................................................. 64
1. Synthèse des sécrétions bronchiques ................................................................................... 64
2. Composition des sécrétions bronchiques ............................................................................. 65
3. Mode d’action de la bromhexine ......................................................................................... 67
4. Propriétés pharmacologiques ............................................................................................... 68
a. Action sur les cellules bronchiques ................................................................................. 68
b. Action anti-inflammatoire ............................................................................................... 69
c. Action anti-oxydante ....................................................................................................... 69
d. Autres propriétés.............................................................................................................. 70
5. Modalité d’administration et usage thérapeutique ............................................................... 71
6. Effets indésirables............................................................................................................ 71
Deuxième partie: Associations médicamenteuses dans le traitement des maladies respiratoires
bactériennes des volailles. ..................................................................................................................... 73
I. Les infections respiratoires des volailles................................................................................... 75
A. Les infections à Escherichia coli............................................................................................ 75
1. Etiologie............................................................................................................................... 75
a. Les principaux sérotypes ................................................................................................. 75
b. Les facteurs de virulences................................................................................................ 76
1. Les fimbriae ..................................................................................................................... 76
α) Fimbriae de type 1....................................................................................................... 76
β) Fimbriae de type P....................................................................................................... 76
2. La résistance au sérum ..................................................................................................... 77
3. Le système de captation du fer......................................................................................... 77
(1) Hémagglutination.................................................................................................. 77
10
c.Epidémiologie et facteurs environnementaux.................................................................. 78
2. Etude clinique et lésionnelle ................................................................................................ 79
a. Mortalité embryonnaire et du jeune poussin.................................................................... 79
b. Maladie respiratoire chronique et septicémie .................................................................. 79
c. Le syndrome infectieux de la grosse tête......................................................................... 80
d. Autres manifestations cliniques....................................................................................... 80
B. La mycoplasmose.................................................................................................................... 80
1. Etiologie............................................................................................................................... 80
2. Epidémiologie.................................................................................................................. 81
3. Etude spécifique................................................................................................................... 81
a. Mycoplasma gallisepticum .............................................................................................. 81
b. Mycoplasma méleagridis ................................................................................................. 81
c. Mycoplasma synoviae...................................................................................................... 82
C. La pasteurellose ...................................................................................................................... 82
1. Etiologie............................................................................................................................... 82
2. Epidémiologie ...................................................................................................................... 82
3. Pathogénie et clinique .......................................................................................................... 82
D. Le coryza infectieux................................................................................................................ 83
II. Associations médicamenteuses impliquant l’enrofloxacine : intérêts dans le traitement
des pathologies respiratoires des volailles ......................................................................................... 84
A. Les principes généraux des associations antibiotiques et définitions des différents types
d’interactions................................................................................................................................... 84
1. Définitions des différents types d’interactions..................................................................... 84
2. Principes généraux des associations .................................................................................... 85
B. L’association enrofloxacine/colistine .................................................................................... 87
1. Principaux avantages d’une association antibiotique appliquée à l’association
enrofloxacine/colistine.................................................................................................................. 87
a. Elargissement du spectre antibactérien............................................................................ 87
b. Prévention de l’émergence de mutants résistants ............................................................ 88
c. Obtention d’un effet synergique ...................................................................................... 88
d. Diminution du risque toxique .......................................................................................... 89
2. L’association est-elle envisageable ? ................................................................................... 90
a. Propriétés physico-chimiques.......................................................................................... 90
b. Propriétés pharmacocinétiques ........................................................................................ 90
1. Résorption :...................................................................................................................... 90
2. Distribution ...................................................................................................................... 91
3. Biotransformations........................................................................................................... 91
4. Elimination....................................................................................................................... 91
C. L’association enrofloxacine/bromhexine.............................................................................. 92
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE ............................................................................................................................ 101
11
Table des illustrations
12
Liste des tableaux :
13
14
INTRODUCTION
15
16
PREMIERE PARTIE :
17
18
I. Etude pharmacologique et toxicologique de l’enrofloxacine
A. Propriétés physico-chimiques
19
Comme toutes les quinolones de troisième génération, l'enrofloxacine présente un
caractère amphotère dû à la présence d’un hétérocycle azoté saturé et d’un groupement
carboxylique (-COOH).
Les fluoroquinolones présentent aussi des propriétés chélatrices qui participent
notamment à l’activité bactérienne. Ces propriétés ne sont possibles qu’avec certains cations
bivalents comme le magnésium et le cuivre. L’enrofloxacine est donc capable de fixer deux
cations par molécules et ainsi de former des chélates. (Bahri L.E et Blouin A, 1991, Figure 2)
Le tableau I récapitule les relations entre structure et activité. (Barry et al, 2001)
2. Propriétés physiques
20
d’une solution obtenue par dissolution d’un gramme de composé dans 100ml d’eau distillée
est de 6,4.
L’enrofloxacine est un composé amphotère, qui se comporte comme un acide faible au
pH physiologiques. Les quinolones, sous leurs formes non ionisées, sont généralement
insolubles dans l’eau pure mais hydrosolubles dans les solutions acides (pH<6) et basiques
(pH>9) où elles forment des sels stables. La molécule présente par contre une bonne
liposolubilité. (Antras V, 1994)
Les caractéristiques de la solubilité de l’enrofloxacine dans différents milieux sont
présentées dans les tableaux II et III.
L’enrofloxacine présente une légère instabilité à la lumière, ce qui justifie des mesures
de précaution pour sa conservation : les flacons sont teintés pour limiter les phénomènes de
photolyse. (Cordelette, 2000)
Tableau II et Tableau III : Solubilité de l’enrofloxacine en g/100ml à 20°C dans différents milieux.
21
avant ouverture pendant 3 ans. Après une première ponction, la conservation est limitée à 28
jours à température ambiante.
Très récemment (juin 2008) est sorti le XEDEN® (SOGEVAL). Il s’agit d’un
délicament à base d’enrofloxacine à destination des carnivores domestiques. Il existe sous 3
dosages différents : 15, 30 et 75mg par comprimé. Le laboratoire revendique une utilisation
en seconde intention.
B. Etude pharmacologique
1. Activité anti-bactérienne
La CMI, qui représente in vitro l’activité d’un antibiotique que l’on teste vis-à-vis d’un
certain nombre d’espèces bactériennes, s’exprime en mg/l ou en µg/ml. Elle se définit par la
plus petite quantité d’antibiotique, qui, dissout dans 1 ml de culture, est capable d’inhiber la
croissance macroscopique de l’inoculum dans des conditions définies expérimentalement.
Plusieurs travaux ont été réalisés sur l’enrofloxacine et ont permis d’établir les CMI
pour de nombreuses bactéries. Les résultats sont récapitulés dans le tableau 5. (Scheer. M,
1987 a)
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Enrofloxacine Tétracycline
Valeurs CMI (µg/ml), valeurs
Germes sensibles CMI (µg/ml)
moyennes moyennes
E.coli <0.01-0.5 0.06 >64
Klebsiella spp. <0.03-0.5 0.06 >64
Salmonella spp. 0.003-0.5 0.03 >16
Proteus spp. 0.03-0.5 0.25 >16
Serratia marcescens 0.01-1.0 0.12
Citrobacter sp. 0.25-0.5 0.25
Yersinia spp. 0.01-0.04 0.01
Campylobacter spp. 0.03-0.25 0.25
Pseudomonas aeruginosa 0.25-2.0 0.75 >16
Brucella canis 0.1-0.25 0.25 0,2
Bordetella bronchiseptica 0.1-4.0 0.5 >16
Moraxella bovis 0.03-0.05 0.03 1
Haemophilus spp. 0.02-0.5 0.02 1,6
Pasteurella multocida <0.001-0.12 0.008 >16
Pasteurella haemolytica 0.008-0.12 0.06 >16
Vibrio parahaemolyticus <0.01-0.4 0.2
Treponema hyodysenteriae 4.0 4.0
Bacillus cereus 0.06-0.5 0.25
Staph. Aureus 0.03-1.0 0.12 >64
Staph. Hycius 0.01-0.4 0.12
Streptococcus spp. 0.06-4.0 0.75 2
Arcanobact. Pyogenes 0.06-4.0 0.75 16
Listeria monocytogenes 1.0-2.0 1.75 1
Erysipelothrix spp. 0.06-0.1 0.06 0,2
Mycoplasma spp. 0.01-1.0 0.25 0,03-33
Actinobacillus spp. 0.01-0.3 0.03 1
Bacteroides spp. 0.8-12.5 1.6 0,2- 25
Clostridium perfringens 0.2-2.0 0.5 40
Tableau IV: CMI de l’enrofloxacine et de la tétracycline pour quelques espèces bactériennes.
De plus grâce au tableau IV, il est facile de voir que les CMI de l’enrofloxacine sont
très nettement inférieures à celles de la tétracycline. La tétracycline a été prise pour
comparaison car il s’agit d’un antibiotique plus ancien. On remarque donc que les CMI de
l’enrofloxacine sont en moyenne presque toutes inférieures à 1 µg/ml alors que c’est loin
d’être le cas pour la tétracycline (avec de fréquentes CMI > 16 µg/ml). Les CMI de nombreux
germes sont donc plus facilement atteintes avec l’enrofloxacine. (Prescott J.F et Baggot J.D,
1993)
Une fois la CMI déterminée pour la bactérie (la CMI dépend du germe impliqué, et
toutes les souches n’ont pas la même sensibilité au sein d’un même espèce bactérienne), on la
compare à la concentration effective de l’antibiotique in vivo, afin d’évaluer si l’antibiotique
est en mesure de lutter in vivo contre une infection provoquée par cette bactérie.
Dans le cadre de l’établissement de l’antibiogramme d’un antibiotique, par un
laboratoire d’analyse médicale, il est admis que la concentration des antibiotiques aux sites
des infections était équivalente à la concentration sérique moyenne humaine obtenue chez un
individu avec des doses moyennes d’antibiotique. Pour plus de rigueur scientifique, il
conviendrait de comparer cette CMI à la concentration tissulaire de l’antibiotique au niveau
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de l’organe infecté, en tenant compte des différentes espèces animales : surtout en ce qui
concerne des antibiotiques comme les fluoroquinolones qui ont une très large diffusion
cellulaire et tissulaire et pour qui, donc, les concentrations tissulaires excèdent souvent les
concentrations sériques.
Ainsi les CMI seules ne fournissent qu’une approche bactériologique de l’efficacité
d’un antibiotique ; c’est leur mise en relation avec les différents paramètres
pharmacodynamiques (variation de concentration in vivo en fonction des paramètres
pharmacocinétiques, étude de la bactéricidie temps ou concentration dépendant…) qui va
permettre d’envisager l’efficacité de l’antibiotique.
Cependant, la méthode classique d’évaluation du spectre d’un antibiotique, passe
actuellement toujours par l’appréciation des différentes valeurs des CMI.
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Bactéries Gram positif aérobies :
Les bactéries à Gram positif sensibles à l’activité de l’enrofloxacine ont, dans
l’ensemble, une sensibilité plus faible à l’enrofloxacine que les Gram négatif. Cependant
l’enrofloxacine présente une bonne activité contre les Staphylocoques même ceux résistants à
la méticilline et à la gentamicine et des staphylocoques multirésistants. (Bahri L.E et Blouin
A, 1991; Boothe D.M, 1994; Brown S.A, 1996; Dalhoff A, 1995)
Actinomyces et Nocardia ne sont généralement pas sensibles aux doses usuelles
d’enrofloxacine.
Le point faible de l’enrofloxacine (et de toutes les fluoroquinolones) réside dans le
manque d’efficacité contre les Streptocoques pathogènes. D’autre part, l’activité contre
Listeria spp. est variable et controversée.
Germes intracellulaires :
Les fluoroquinolones grâce à leur importante diffusion cellulaire et à leur diffusion
dans les phagocytes ont un spectre qui englobe de nombreux germes intracellulaires. On
retrouve donc : Brucella spp., Legionella spp., Chlamydia spp., Mycoplasma spp. et
Rickettsiae spp.
Les mycoplasmes sont d’ailleurs très sensibles à l’enrofloxacine et à l’ensemble des
fluoroquinolones.
Des études in vivo ont montré l’efficacité de l’enrofloxacine contre Ehrlichia canis et
contre Rickettsia rickettsii chez le chien. (Boothe D.M, 1994)
Une étude d’activité anti-infectieuse conduite chez des hamsters inoculés avec
Leptospira icterohaemorragiae montre une efficacité au moins égale à celle de
l’oxytétracycline, résultats confirmés par des mesures de CMI sur 5 sérotypes de Leptospira
interrogans dont le sérotype L.interrogans icterohaemorragiae. (Takashima I et al, 1993 ;
Shalit I, 1990)
Toxoplasma spp. et Leishmania spp. ne semblent pas sensibles à l’enrofloxacine.
Les Mycobactéries :
L’activité contre les mycobactéries est variable notamment en fonction des souches.
Mycobacterium tuberculosis semble sensible contrairement à Mycobacterium avium. La
survenu de résistances pendant le traitement n’est pas rare, c’est pourquoi l’association avec
d’autres molécules actives contre les mycobactéries semble être à privilégier.
Concernant notre travail, l’étude la plus intéressante et la plus complète est celle de
Bauditz. Il a réalisé des essais cliniques sur des poulets et des dindes. Le but de cette étude
était de démontrer l’efficacité de l’enrofloxacine (Baytril®) contre E.coli, Mycoplasma spp.,
Haemophillus paragallinarum, Salmonella spp., Pasteurella multocida et Erysipelothrix
rusiopathiae. L’enrofloxacine était utilisée per os, dans l’eau de boisson. Les animaux sont
infectés expérimentalement et le traitement est initié après l’apparition des symptômes. Les
différents paramètres utilisés pour juger de l’efficacité du traitement étaient cliniques
(mortalité, morbité, poids, consommation de nourriture, prise de boisson), bactériologiques
25
(titre en anticorps et isolement de la bactérie) et pathologico-anatomiques (examen
nécropsiques).
Contre Mycoplasma gallisepticum, l’enrofloxacine se révèlent très efficace
(mycoplasmicide dans 100% des cas) et plus efficace que la tiamuline et la tylosine aussi bien
chez les poulets que chez les dindes. L’enrofloxacine est utilisé à la dose de 50ppm pendant 3
jours.
Des infections expérimentales avec E.coli, seule ou en association avec Mycoplasma
gallisepticum, Salmonella typhimurium ou le virus de la bronchite infectieuse ont également
servi pour étudier l’efficacité de l’enrofloxacine chez les poulets. Administrée à 50 ppm par
jour pendant 3 jours ou à 25 ppm par jour pendant 5 jours, les résultats sont excellents.
L’efficacité s’est révélée toute aussi bonne lors de l’utilisation contre Haemophilus
paragallinarum selon le même protocole. Cette efficacité est aussi largement supérieure à la
celle de la tylosine.
L’efficacité contre Pasteurella multocida est testée chez la dinde. Elle se révèle encore
une fois très bonne. (25 ppm pendant 7 jours)
Dans les infections latentes ou cliniques de salmonellose chez le poulet dues a
S.gallinarum ou S. typhymurium, l’enrofloxacine se montre aussi efficace que se soit à 50
ppm pendant 10 jours ou à 100ppm pendant 5 jours. La bactérie n’est pas réisolée 10 jours
après l’arrêt du traitement que ce soit dans les feces ou au niveau des organes.
Contre S.arizonae chez la dinde les résultats sont excellents (guérison à 100%) après
une administration par voie sous-cutanée de l’enrofloxacine à 0,5mg par oiseau.
L’efficacité est un peu moins bonne contre S. pullorum puisqu’on isole la bactérie
dans 20 % des cas 11 jours après l’arrêt d’un traitement de 6 jours à 100ppm. Cependant ces
résultats sont nettement supérieurs aux résultats obtenus avec de la fluméquine (100ppm
pendant 6 jours) ou bien de la furazolidone (100 ppm pendant 6 jours).
Enfin, l’efficacité de l’enrofloxacine a été étudiee chez la dinde contre Erysipelothrix
rhusiopathiae. L’efficacité avec un traitement à 100ppm est supérieure à celui à 50ppm.
On voit donc que les résultats de l’efficacité in vivo confirment les différentes CMI
trouvées. L’enrofloxacine est donc conseillée pour traiter les colisepticémies, les
mycoplasmoses, le coryza contagieux, les infections bactériennes mixtes et secondaires.
26
L’ensemble des résultats est récapitulé dans le tableau VI.
L’efficacité de l’enrofloxacine a aussi été étudiée in vivo chez les bovins notamment le
veau. Espinasse et al ont noté une excellente activité de l’enrofloxacine sur des modèles
expérimentaux de colibacillose et de salmonellose chez le veau. (Espinasse J et al, 1987)
Toujours chez le veau Tonquist et Franklin ont également rapporté une excellente
activité de l’enrofloxacine vis-à-vis de Pasteurellose spontanée ou expérimentale. (Tonquist
M et Franklin A, 1986)
Delannoy a réalisé des essais cliniques sur des taurillons et des veaux (enrofloxacine à
5mg/kg/j pendant 3 jours PO chez les veaux et en IM chez les taurillons). L’efficacité clinique
de l’enrofloxacine est jugée très satisfaisante sur Pasteurella haemolytica. Cette efficacité est
appréciée sur des critères sensibles, spécifiques et globaux (Fréquence respiratoire, toux,
température, refus alimentaire, jetage, comportement, analyse nécropsique et bactériennes).
(Delannoy J, 1988)
Sur le même schéma thérapeutique (5mg/kg/j pendant 3jours PO) Floc’h montre que
l’enrofloxacine est efficace sur les gastro-entérites néonatales du veau. Ses différents critères
sont la consistance, le volume et la fréquence des selles ainsi que la température, la
déshydratation, le refus alimentaire et le comportement général. (Floc’h S, 1997)
Savary réalise des essais cliniques sur l’enrofloxacine administrée en sous-cutané sur
des veaux de boucherie atteints de broncho-pneumonie enzootique (BPIE). Il compare
l’efficacité de l’enrofloxacine à l’efficacité de l’Excenel® (ceftiofur, céphalosporine de
troisième génération). L’utilisation de l’Excenel® est reconnue dans le traitement des BPIE. Il
en résulte que l’efficacité est la même que celle de l’Excenel® c’est à dire très bonne vis-à-vis
des germes responsables des BPIE chez le veau de boucherie. (Savary T, 1997)
Rizet quant à lui a aussi comparé l’efficacité de l’enrofloxacine à celle de l’Excenel®
mais sur la pasteurellose chez le veau. L’enrofloxacine à 5mg/kg PO pendant 5 jours est aussi
efficace que le ceftiofur sur les pasteurelloses bovines. (Rizet C, 1994)
Catella a testé l’efficacité in vivo de l’enrofloxacine sur Mycoplasma bovis selon un
modèle expérimental. L’enrofloxacine est efficace contre Mycoplasma bovis à la posologie
habituelle de 5mg/kg pendant 5 jours en sous-cutané. (Catella S, 2003)
Causse démontre expérimentalement que l’enrofloxacine PO est efficace contre
Escherichia coli chez le veau (modèle expérimental de colibacillose chez le veau). (Causse F,
1987)
27
Dubois montre que l’administration de 5mg/kg/j PO chez les dindes permet non
seulement de lutter contre la mycoplamose de l’adulte mais qu’elle empêche aussi le
développement de Mycoplasma iowae dans les œufs. En effet les concentrations obtenues
dans le blanc et dans le jaune de l’œuf après un traitement oral des dindes sont supérieures
aux CMI de M.iowae et inhibent ainsi leur croissance en protégeant le poussin. (Dubois A.M,
1996)
d. Etude de la bactéricidie
♦ Antibiotiques concentration-dépendants
Leur vitesse de bactéricidie croit avec la concentration. Leur vitesse de bactéricidie est
généralement élevée. Le facteur principal d’activité sera alors le pic plasmatique, si bien que
l’intérêt thérapeutique résidera dans l’administration d’une dose la plus élevée possible, pour
une fréquence d’administration réduite, la limitation la plus importante étant d’ordre
toxicologique. Par conséquent, afin de prévoir l’activité anti-bactérienne in vivo, le paramètre
fondamentale à envisager, pour un antibiotique concentration-dépendant, est la concentration
maximale (Cmax) et plus précisément le rapport Cmax/CMI dans le tissu qui sera le lieu de
l’infection.
♦ Antibiotiques temps-dépendants
Dans ce cas, l’effet bactéricide atteint, dès la CMI, un maximum d’intensité. L’activité
bactéricide est alors directement liée à la durée d’exposition. La vitesse de bactéricidie est
généralement plus faible que pour les précédents. L’application thérapeutique qui en découle
est le maintien d’une durée pendant laquelle les concentrations plasmatiques seront
supérieures à la CMI du germe considéré, ce qui implique la réadministration de l’antibiotique
dès que les concentrations plasmatiques sont inférieures à la CMI (en pratique cela revient à
diminuer les doses, tout en augmentant la fréquence d’administration). Dans ce cas pour
prévoir l’efficacité de l’antibiotique in vivo, le paramètre principal à envisager est la durée
pendant laquelle la concentration tissulaire se maintient au dessus de la CMI du germe à
combattre. (Puyt J-D, 2004 ; Cordelette R, 2000)
28
notions ne sont valables que pour un antibiotique et un germe donné (notion de couple). Il est
communément admis en médecine vétérinaire que les fluoroquinolones sont considérées
comme des antibiotiques temps-dépendants vis-à-vis des germes Gram positifs et
concentration-dépendants vis-à-vis des Gram négatifs. (Keck G et Born P.M, 1995)
e. Effet post-antibiotique
Certains antibiotiques qui se fixent sur les bactéries ou sur leur structure intra-
cellulaire, comme c’est le cas pour l’enrofloxacine, continuent d’inhiber le développement
bactérien, alors que les taux sériques sont inférieurs à la CMI. Ainsi, l’effet post-antibiotique,
retrouvé chez de nombreuses bactéries (dont Escherichia coli et Pseudomonas aeruginosa) se
définit comme la période de temps nécessaire à des bactéries, ayant survécu à l’exposition à
un antibiotique, pour reprendre une croissance logarythmique. (Giguère S et al, 2006). Pour
les antibiotiques concentration-dépendants, les administrations à dose élevée et en prise
unique potentialisent la durée de l’effet post-antibiotique ; en revanche pour les antibiotiques
temps-dépendants c’est l’augmentation de la durée de contact qui augmente l’effet post-
antibiotique.
Les fluoroquinolones possèdent un effet inhibiteur persistant sur les germes pendant 3
à 5 heures in vitro. L’effet post-antibiotique, in vitro, dure entre 2 et 8 heures contre E.coli,
Klebsiella, Pseudomonas aeruginosa et Serratia. (Cordelette R, 2000) Ces valeurs sont
mesurées in vitro et ne doivent pas être extrapolées tel quel in vivo comme une durée d’action
plus longue. Cependant cet effet post-antibiotique apporte une sécurité clinique : si la
concentration de l’antibiotique dans le tissu infecté passe en dessous du seuil d’inhibition,
l’activité sera quand même maintenue.
2. Mécanisme d’action
29
Figure 3 : Rôle de l’ADN gyrase
Le schéma général du mode d’action intracellulaire des quinolones proposé par Drlica
et Zhao (1997) est représenté dans la figure 4.
Les complexes formés entre l’ADN et l’ADN-gyrase sont piégés par les quinolones
dans une réaction réversible qui bloque la synthèse d’ADN et la croissance cellulaire.
30
Figure 4 : Mode d’action des quinolones contre l’ADN-gyrase et la topoisomérase IV
3. Résistances
Sur le plan génétique, la résistance des bactéries aux antibiotiques résulte soit d’une
résistance naturelle soit d’une résistance acquise. La résistance naturelle ou intrinsèque est un
caractère d’espèce qui touche toutes les cellules de toutes les souches alors que, la résistance
acquise est un caractère qui ne concerne que quelques (ou parfois de nombreuses) souches
d’une espèce donnée.
La résistance naturelle est stable, transmise à la descendance mais pas ou peu
transmissible sur un mode horizontal. Inversement, la résistance acquise est moins stable,
mais elle se propage souvent de façon importante dans le monde bactérien.
Les seules résistances actuellement connues aux quinolones sont de nature
chromosomique ce qui représente un énorme avantage par rapport aux antibiotiques. En effet
les résistances chromosomiques se caractérisent par leur rareté, leur spécificité, leur stabilité
et leur spontanéité. Le taux de mutation chez la plupart des micro-organismes est d’environ
10^-6 à 10^-8. En conséquence, le risque de sélectionner des souches résistantes augmente de
31
façon importante lors de traitement prolongé à des doses insuffisantes ou sur des foyers mal
irrigués.
La résistance à l’enrofloxacine est souvent croisée avec les autres quinolones mais ne
concerne en général pas les autres familles d’antibiotiques.
Il est à noter que l’apparition de souches resistantes à l’enrofloxacine semble rare en
Europe et en Amérique du Nord mais que l’on retrouve dans certains pays d’Afrique du Nord
(Maroc, Algérie) et des pays de l’Europe de l’est des pourcentages de résistances très élevés
(allant jusqu’à 30% des souches d’Eschérichia coli). (Nadeau et al, 2000 ; Raedmonck et al
,1992 ; Sanders et al, 2001 ; Peighambari et al, 1995 ; Mellata et al, 1998 ; Amara et al,
1995 ; Webber M et Piddock L.J, 2000) On peut se demander quelles sont les raisons d’une
telle disparité dans l’apparition de résistance. En fait comme souvent avec les antibiotiques il
s’agit d’une « usure » prématurée. En effet, les pays où l’on note le plus de resistance à
l’enrofloxacine sont les pays où l’enrofloxacine est la plus utilisée (les prix de ventes étant
très bas). Ces résultats prouvent que l’utilisation abusive et non raisonnée des antibiotiques,
contribue à l’apparition rapide de résistances et cela même lorsque les antibiotiques utilisées
sont réputés pour ne pas developper de résistance comme c’est le cas pour l’enrofloxacine.
Pour les quinolones, deux mécanismes biochimiques ont été mis en évidence : une
diminution de la perméabilité et surexpression des systèmes d’efflux ainsi que la modification
de la cible.
Des systèmes d’efflux constitutifs ont été identifiés chez de nombreuses bactéries à
Gram négatif. Ces mécanismes d’efflux actif ont été décrits à l’origine chez Escherichia coli
et Pseudomonas aeruginosa. Ils s’exercent vis-à-vis de nombreux antibiotiques dont la cible
d’action est intracellulaire (comme les quinolones) et ils sont qualifiés de pompes d’efflux
multidrogues. L’efflux repose sur une pompe insérée dans la membrane interne et capable
d’éjecter l’antibiotique hors de la bactérie grâce un canal présent dans la membrane externe et
grâce à une protéine de jonction périplasmique. La surexpression du gène responsable de cet
efflux conduit à une diminution de la concentration intracellulaire de l’antibiotique et donc
une résistance de la bactérie à celui-ci.
Des mutations dans le gène gyrA peuvent modifier la sous unité A de l’ADN gyrase et
diminuer l’affinité des quinolones pour leur cible ce qui provoque une résistance croisée, à
des degrés divers, pour l’ensemble des quinolones. In vivo, les mutations du gène gyrA sont
beaucoup plus fréquentes que celles du gène gyrB. Des mutations du gène parC, codant pour
les sous-unités ParC de la topo-isomérase IV ont été mis en évidence chez la poule récemment
et provoquent également un phénotype de résistance aux quinolones. (Le carrou J et al, 2006)
C. Etude pharmacocinétique
32
1. Posologie
2. Résorption
La résorption est définie comme l’étape initiale par laquelle les molécules pénètrent
dans la circulation générale à partir d’un lieu d’administration. (Keck G, 1978b)
Quelles que soit la voie et la quinolone en cause, la résorption est très bonne. Ainsi la
voie d’administration a peu d’influence sur la quantité de principe actif libéré et la
biodisponibilité de toutes les fluoroquinolones est relativement élevée. (Cordelette R, 2000)
• Administration parentérale : par voie parentérale, voie exclusive chez les ruminants, la
biodisponibilité est complète pour toutes les fluoroquinolones. En ce qui concerne
l’enrofloxacine, l’absorption après une administration parentérale est la plupart du
temps plus rapide qu’après une administration per os. Les voies intra-musculaire et
sous-cutanée présentent généralement le même profil pharmacocinétique. Après une
injection par voie intra-veineuse, les concentrations sériques initiales, très élevées,
s’aplanissent après 2 heures et deviennent comparable à celles obtenues après une
injection par voie I.M ou S.C.
Les figures 5, 6 et 7 montrent les courbes cinétiques après une administration orale ou
sous-cutanée d’enrofloxacine chez le chien, le veau et le chat. Ces courbes mettent en
évidence le pic plasmatique qui survient entre une et deux heures après l’administration. Cela
permet aussi de se rendre compte que chez le veau une administration à la base de la langue
est très nettement préférable à une administration par le biais du lait reconstitué et que chez le
chat la dose de 5mg/kg est préférable à celle à 2,5mg/kg. (Scheer M, 1987 b)
33
Figure 5 : Cinétique plasmatique sur 24heures après administration par voie orale de difloxacine(----5mg/kg) et
de marbofloxacine (-5mg/kg).
Figure 6 : Cinétique plasmatique sur 24 heures après une administration orale d’enrofloxacine de 2,5mg/kg chez
le veau.
Figure 7 : Cinétique plasmatique chez le veau après une unique administration I.V ou sous-cutané
d’enrofloxacine à 2,5mg/kg
34
Figure 8 : Concentration plasmatique après une administration unique sous cutané chez le chat de 2,5 et 5mg/kg
d’enrofloxacine.
Le suivi des concentrations plasmatiques peut se faire sur plusieurs jours. Cela permet
de vérifier et de valider le schéma thérapeutique. En effet la concentration plasmatique en
enrofloxacine doit se maintenir au dessus des CMI des bactéries pathogènes visées. Chez le
veau un traitement de 3 jours à 5mg/kg par voie orale après une première administration par
voie sous-cutanée apporte de bons résultats et permet de rester au dessus des CMI.
Chez les volailles les deux voies d’administration les plus faciles à utiliser (par le biais
de l’alimentation ou par le biais de l’eau) donne de bons résultats avec des concentrations qui
restent stables même lors d’un traitement long (14 jours). (figures 9, 10 et 11)
Figure 9: Concentrations plasmatiques chez le veau après une administration de 3 fois 2,5mg/kg () et 3 fois
5mg/kg () d’enrofloxacine (SC-PO-PO)
35
Figure 10 : Concentration plasmatiques chez des poulets après une administration via l’eau de boisson
d’enrofloxacine pendant 14 jours à 25,50 et 100ppm.
Figure 11: Concentrations plasmatiques chez des poulets après une administration via la nourriture (ad libitum)
d’enrofloxacine pendant 14 jours à 50 ou 200ppm.
3. Distribution
C’est l’étape où la molécule se répartit dans l’organisme et rejoint les lieux de son
action biologique, la diffusion dans l’organisme étant fonction des différents paramètres
physico-chimiques. (Keck G, 1978b)
36
a. Volume de distribution
b. Distribution tissulaire
Dans les organes, la diffusion peut être évaluée par le ratio tissu/plasma, c'est-à-dire le
rapport entre les concentrations tissulaires et plasmatiques. La concentration plasmatique est
la quantité d’antibiotique par volume de sang (en µg/ml), et la concentration tissulaire est la
quantité d’antibiotique par poids d’organe (en µg/g) : ainsi un rapport supérieur à 1 indique
une bonne diffusion dans les organes et les cellules. Ainsi, en fonction des tissus, les
antibiotiques peuvent atteindre des concentrations supérieures à celle du plasma. (Cordelette
R, 2000)
D’une manière générale, les fluoroquinolones ont une distribution tissulaire excellente,
ce qui constitue un des principaux arguments de vente pour les laboratoires car les infections
siègent au niveau des tissus. Les fluoroquinolones sont donc retrouvées à des concentrations
efficaces dans les tissus suivants : liquide céphalo-rachidien, encéphale, synoviale, salive,
sécrétions et muqueuses nasales, sécrétions bronchiques, poumons, os et cartilage, peau, voies
biliaires, voies urinaires, prostate, liquide séminal et milieu intracellulaire. Grâce à leur
liposolubilité, les fluoroquinolones passent également les barrières placentaires et oculaires.
L’enrofloxacine est généralement très concentrée dans la bile, l’urine, le tractus
urinaire, les sécrétions prostatiques, la salive, le foie, les reins et les poumons. Après une
administration intra-musculaire de 2,5mg/kg chez le veau on retrouve par ordre décroissant de
diffusion tissulaire : bile, urine, foie, reins, cœur, poumons. On retrouve ce même ordre chez
le chien, le porc. Les résultats sont illustrés dans la figure 12 (Scheer M, 1987b).
37
Veau Chien
Figure 12 : Concentration de l’enrofloxacine dans les tissus et les liquides biologiques du veau et du chien, 1
heure après une administration intra-musculaire d’une dose unique de 5 mg/kg
Tableau VII: Concentration de l’enrofloxacine dans les tissus et les liquides biologiques du poulet après
administration d’une dose unique de 10mg/kg dans l’eau de boisson.
38
c. Distribution cellulaire
d. Biotransformation
39
e. Elimination
1. Toxicité aigue
L’enrofloxacine utilisée sur des animaux de laboratoire (rat, souris, cobaye) à des
doses élevées (10 fois la dose thérapeutique) n’a entraîné aucun effet sur la composition
chimique, les taux de glucose et de triglycérides dans le sang. L’urine et les excrétions
électrolytiques demeurent inchangées, excepté une augmentation de la concentration de
potassium pour des doses supérieures à 100mg/kg. Des investigations au niveau du système
nerveux central n’ont démontré aucune modification de comportement, si ce n’est une légère
stimulation de la mobilité spontanée pour des doses supérieures à 100mg/kg. En outre ces
études toxicologiques n’ont montré aucune influence sur le système cardio-circulatoire.
(Altreuther P, 1987 ; Vanberg N.E.M, 1995)
Lors d’expérimentations menées sur des rats, souris et lapins, on s’aperçoit que
l’enrofloxacine présente une très faible toxicité aigue après administration unique per os et un
peu plus élevée après administration par voie intra-veineuse. En effet la DL50 chez la souris et
le rat per os sont supérieures à 5000mg/kg alors qu’en I.V elle est à peu près égale à
200mg/kg. Chez le lapin per os elle est comprise entre 500 et 800mg/kg (Altreuther.P, 1987).
Les résultats sont indiqués dans le tableau VIII. On remarque que par voie orale
l’enrofloxacine possède un index thérapeutique élevé.
40
Tableau VIII : Toxicité aigue après administration orale et parentérale chez plusieurs espèces.
a. Toxicité articulaire
Selon certains auteurs, boiteries et myalgies sont des effets indésirables pouvant être
rencontrés chez les jeunes suite à l’administration de fluoroquinolones. (Lecoeur-Bitchatchi S
et Kolf-Clauw M, 1999) Des premières quinolones aux quinolones de dernières générations,
toutes les molécules possèdent un potentiel chondrotoxique et sont susceptibles d’induire des
arthropathies dégénératives chez des animaux juvéniles sur toutes les articulations
diarthrosiques. La dégénérescence cartilagineuse est ainsi le principal effet indésirable
rapporté chez les animaux en croissance pour l’enrofloxacine notamment lors de traitements
prolongés. (Boothe D.M, 1994 ; Anadon A, 1992) Cette chondrotoxicité, typiquement
localisée au niveau de la zone intermédiaire des cartilages épiphysaires-articulaires, induit des
lésions d’arthropathie érosive non-inflammatoire. Globalement toutes les espèces en
croissances sont sensibles à cette chondrotoxicité, néanmoins le chien semble de loin l’espèce
la plus sensible. Cet effet indésirable apparaît principalement chez les grandes races et les
races géantes, lors de leur phase de croissance rapide c'est-à-dire vers l’age de 3 mois. Chez
les jeunes chiens en croissance, ces troubles peuvent apparaîtrent dès le deuxième jour de
traitement (à des doses plus élevées que les doses thérapeutiques) avec des manifestations de
boiteries et de souffrances.
Certains auteurs signalent que l’enrofloxacine administrée par l’intermédiaire du lait
de jabot à des oisillons provoquent des retards de croissances et des lésions cartilagineuses
irréversibles dose-dépendantes. (Boothe D.M, 1994 )
Ainsi le laboratoire commercialisant l’enrofloxacine indique dans ces contre-
indications : « Ne pas administrer chez les jeunes chiens âgés de moins de 12 mois (petites
races) ou moins de 18 mois (grandes races) en raison d’une altération possible des cartilages
de conjugaison chez les chiots en croissance. » « Ne pas administrer chez les chats de moins
de 3 mois ou pesant moins de 3 kg ».
Cependant il faut noter que ces effets indésirables se rencontrent lors de traitement de
longue durée à des doses supérieures aux doses thérapeutiques (par exemple chez le chien :
15mg/kg pendant plus d’un mois).
41
b. Neurotoxicité
Les quinolones sont connues pour posséder un effet convulsivant, cependant les
fluoroquinolones semblent être bien tolérées sur ce plan, et des effets sur le système central
n’ont été notés chez le chien qu’à des doses importantes ou sur des chiens déjà traité pour de
l’epilepsie (rare).
Chez les animaux (en particulier les carnivores) ces effets neurotoxiques se traduisent
par une baisse d’activité locomotrice et des convulsions. Chez le chien une augmentation de
l’incidence de troubles nerveux a été rapportée suite à l’administration d’enrofloxacine et des
troubles convulsifs ont été rapportés chez un chien lors d’administration de 10mg/kg
d’enrofloxacine. Chez le chat la dose doit être supérieure à 50mg/kg pour qu’apparaissent des
signes neurologiques.
On note donc que, comme pour la chondrotoxicité, la neurotoxicité a été démontrée
mais à des doses non thérapeutique ce qui impose bien sûr la prudence mais qui ne fait pas de
cette molécule une molécule très neurotoxique.
c. Toxicité rénale
d. Modifications hématologiques
Des anémies et altérations de la coagulation sanguine ont été décrites chez différentes
espèces animales suite à l’administration de fluoroquinolones. Ces troubles surviennent très
rarement mais sont susceptibles d’intervenir à des doses thérapeutiques. Par ailleurs on peut
observer une baisse de l’hématocrite et du taux de protéines sériques, en particulier des
globulines. Cependant la gravité de ces troubles est considérée comme modérée.
e. Toxicité testiculaire
42
3. Embryotoxicité, tératogénicité et fonction de reproduction
Des études menées chez le rat ont montrés que l’administration quotidienne
d’enrofloxacine à une femelle gravide du sixième au quinzième jour de gestation n’avait mis
en évidence aucun effet tératogène (la plus forte dose étant 875mg/kg). On note toute de
même une diminution du poids et de la taille des produits dans les groupes recevant plus de
210mg/kg. Dans le lot recevant la plus haute dose on note même une embryotoxicité. Il faut
cependant relativiser ces résultats car aucun n’effet embryotoxique ou tératogène n’a été
montré à des doses thérapeutiques sur les animaux de destination. (Altreuther.P, 1987)
Chez les carnivores des études toxicologiques de longue échéance, menées chez des
chiens traités avec des fluoroquinolones, ont montré des effets abortifs (Lecoeur-Bitchatchi S
et Kolf-Clauw M, 1999)
4. Cytotoxicité
Les fluoroquinolones utilisées en médecine vétérinaire sont bien tolérées chez les
animaux. Elles ont une toxicité considrée comme nulle envers les cellules eucaryotes. Ceci est
principalement à mettre en relation avec la forte sélectivité des fluoroquinolones pour les
topoisomérases bactériennes, leur affinité pour les topoisomérases des cellules eucaryotes
étant 100 à 1000 fois moindre. (Cordelette, 2000)
5. Effets indésirables
Aux doses thérapeutiques (administrées par voie orale ou parentérale) les principaux
effets indésirables engendrés par l’enrofloxacine sont des troubles gastro-intestinaux tels que
nausées, vomissements et diarrhées. Les surdosages favorisent l’apparition de ces troubles.
b. Effets cardio-vasculaires
43
recommandé par le fabricant de limiter les administrations parentérale à une injection.
Cependant cet effet n’est pas systématique.
Chez les ruminants, des injections par voie intra-veineuse d’enrofloxacine sont
susceptibles d’induire des phlébites et des thromboses. Les signes d’intolérance locale suite à
l’administration par voie intra-musculaire semblent être plus rares.
Outre les douleurs engendrées et le remaniement du tissu musculaire des animaux de
rente, le principal inconvénient de cette inflammation est la diminution de la biodisponibilité.
(Cordelette R, 2000)
6. Interactions médicamenteuses
Les interactions médicamenteuses ont très rarement fait l’objet d’études chez les
animaux, en effet la grande majorité des études est réalisée chez l’homme. Cependant compte
tenu des analogies métaboliques existant entre l’homme et l’animal, l’étude de ces
interactions présente un grand intérêt en médecine vétérinaire.
a. Modulation de la biodisponibilité
44
b. Anti-inflammatoires non-stéroidiens
c. Xanthine
Puisque les fluoroquinolones présentent une bonne activité in vitro face aux bactéries
Gram positif et Gram négatif et montrent une bonne diffusion dans les sécrétions bronchiques
et le tissu pulmonaire, le clinicien peut être amené à les associer avec des broncho-dilatateurs,
comme la théophylline, notamment dans le traitement de bronchite chronique.
Or les fluoroquinolones (surtout lorsqu’elles sont administrées de façon répétée)
interfèrent avec le métabolisme de la théophylline, ce phénomène s’étendant aussi à la
caféine, l’aminophylline et l’étamiphylline. (Brown S.A, 1996) Ces associations sont donc
potentiellement capables d’augmenter les taux sériques de ces molécules et par conséquent de
majorer leurs effets indésirables. Le mécanisme semble être du principalement à une
inhibition compétitive des biotransformations et plus particulièrement de la déméthylation de
la théophylline par des enzymes du cytochrome P450. (Anadon A, 1992)
Chez le chien, des études récentes ont permis de prouver que l’administration de doses
thérapeutiques d’enrofloxacine était capable d’inhiber directement l’activité des isoenzymes
IA1 et IA2 du cytochrome P450. Il conviendra donc de prendre des précautions lors
d’administration concomitante d’enrofloxacine avec des médicaments métabolisées par ces
isoenzymes ; c’est notamment le cas de molécules telles que les phénothiazines, la
phénacétine et la warfarine. Cette étude portant sur le cytochrome P450 révèle aussi que
l’enrofloxacine stimule modérément, aux doses thérapeutiques, l’activité et le contenu des
isoenzymes IIB : cette stimulation aurait des retentissements extrêmement limités.
(Vancutsem P.M et Babish J.G, 1996)
Par ailleurs l’activité des fluoroquinolones sur les enzymes du cytochrome P450 est
favorisée par le grand volume de distribution des molécules concernées et par les fortes
concentrations tissulaires hépatiques atteintes : chez le chien, l’enrofloxacine se retrouve dans
le foie à des concentrations supérieures aux concentrations hépatiques d’un facteur égal à 6,4.
Ce type d’interaction est d’avantage marqué chez les animaux âgés.
45
Il est donc conseillé de diminuer les doses de théophylline, en cas d’administration
concomitante à l’enrofloxacine. De plus compte tenu de l’existence de cette interaction avec
le cytochrome P450, il semblerait logique d’éviter l’administration conjointe de médicament
se métabolisant par voie hépatique et présentant un index thérapeutique bas, avec
l’enrofloxacine. Cela semble être le cas avec les anticoagulants.
d. Antibiotiques ionophores
e. Antivitaminiques K1 coumariniques
46
II. Etude pharmacologique et toxicologique de la colistine
A. Propriétés physico-chimiques
1. Structure chimique
47
2. Propriétés physiques
B. Etude pharmacologique
1. Activité anti-bactérienne
a. Spectre d’activité
48
b. Concentrations minimales inhibitrices
c. Bactéricidie
2. Mécanisme d’action
La colistine a une activité bactéricide très rapide qui s’exerce à la fois vis-à-vis des
bactéries en phase de repos et sur les bactéries en phase active de multiplication. Les
polymyxines, grâce à leur structure hétéropolaire, agissent de façon non spécifique comme
des tensio-actifs cationiques au niveau de la membrane externe de la paroi des bactéries à
49
Gram négatif. Elles agissent par interaction hydro et électrostatiques avec les phospholipides
(PL) et la fraction lipidique A des lipopolysaccharides perturbant ainsi le fonctionnement et la
perméabilité membranaire. Plus précisément, les polymyxines entraînent des modifications
morphologiques comme la formation de vésicules, puis la membrane cytoplasmique est
atteinte, ce qui provoque la fuite de substances intracellulaires et la mort des bactéries.
(Neuman M, 1979 ; KawamataJ et NakajimaK,1965)
La connaissance de ce mécanisme d’action permet d’expliquer la toxicité élective des
polymyxines pour les cellules riches en polylyposaccharides, la possibilité de résistance
adaptative (rare) de certaines souches bactériennes par diminution du taux d’acides gras
insaturés dans les polylyposaccharides membranaires, et l’inhibition des endotoxines
bactériennes (qui sont des lypopolysaccharides (LPS)). Cette dernière propriété, essentielle
sur le plan thérapeutique, sera développée plus loin.
Les bactéries Gram positif sont insensibles aux polymyxines même si la composition
de leur membrane cytoplasmique ne diffère que de très peu de celles des Gram négatif. Leur
paroi, constituée essentiellement de peptidoglycanes et d’acides teichoïques, donc très pauvre
en LPS et PL, rend impossible toute liaison avec ces antibiotiques et par là même toute action
antibactérienne.
La résistance naturelle des cellules des mammifères semble déterminée par la présence
d’une quantité importante de lécithines et de sphingomyélines, phospholipides qui ne se lient
pas suffisamment aux polymyxines.
La résistance acquise, que ce soit in vitro ou in vivo est une éventualité survenant
rarement quelle que soit l’espèce bactérienne envisagée. Les études effectuées montrent que
cette résistance est adaptative ou phénotypique et réversible : elle correspond à une altération
de l’architecture de la paroi bactérienne. En outre elle est d’apparition lente.
Cependant récemment des résistances acquises ont été mis en évidence vis-à-vis de
Pseudomonas aeruginosa. Même si le mécanisme n’a pas été élucidé, cette résistance semble
résulter de la perte du LPS ou du remplacement d’une protéine de la membrane externe par du
magnésium. (Tam et al, 2005) Chez l’homme on retrouve des résistances acquises vis-à-vis de
Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumanii et Klebsiella pneumoniae. (Harvley J.S et
al, 2008 ; Matthaiou D.K et al, 2008)
Le déterminisme de cette modification est uniquement chromosomique, le plus
souvent à un seul échelon. La résistance plasmidique ou extra chromosomique n’a jamais été
démontrée.
50
Les raisons d’absence d’usure de la colistine tiennent donc à la nature même de la
résistance, qui, comme nous l’avons vu est adaptative : soit parce que la transmission de cette
résistance par plasmides reste sans effet compte tenu du mode d’action de l’antibiotique, soit
parce que le mécanisme permettant aux bactéries de neutraliser la colistine n’est pas
transférable, du fait de l’impossibilité pour ces bactéries de former un pont entre elles.
Les souches de germes résistants à la colistine sont donc extrêmement rares, même si
elles commencent à apparaître, et c’est ce qui fait la force de cet antibiotique. L’expérience
clinique montre que chez l’homme comme chez l’animal, en France comme à l’étranger la
colistine présente une activité antibactérienne qui ne s’altère que très peu. (Maure D, 1986)
51
Tableau XI : Inactivation des endotoxines d’E.coli par la polymyxine B et la colistine dans du lait de mammite
C. Etude pharmacocinétique
1. Résorption
52
Les polymyxines, administrées en aérosol, franchissent la barrière pulmonaire et sont
retrouvées dans le sang à des concentrations égales ou supérieures à 20% de celles obtenues
après une intramusculaire à la même dose. (Martin R et al, 1959)
L’administration par voie mammaire donne lieu à une résorption très faible.
2. Distribution
Pic plasmatique :
Après une administration intra-musculaire, le pic sérique est atteint en deux heures
environ, quelque soit la dose injectée, le sel utilisé et l’espèce. Ce sont par contre les valeurs
de ces pics sériques qui diffèrent notamment selon le sel utilisé.
Les résultats obtenus chez la brebis sont illustrés dans le tableau XII (Ziv G et
Sulman F.G, 1973) et la figure 14 (Ziv G, 1973).
Comparés aux molécules mères on se rend compte que les dérivés méthane-sulfonés
produisent des pics sériques plus marqués et des temps de ½ vie plus courte.
53
Figure 14 : Concentrations sériques de colistine chez les brebis traitées en IM avec 7,5(●) et 3,5 (○) mg/kg de
CS et avec 7,5 (▲) et 3,5(∆) mg/kg de CMSS.
Temps de ½ vie :
54
c. Fixation aux protéines
Le caractère de base fortement ionisée des polymyxines ne les prédispose pas à se lier
aux protéines plasmatiques. De fait le taux de fixation est très faible chez l’homme, de l’ordre
de 10 à 15%, modérée chez le veau : de 45 à 55% selon les concentrations, mais il est de 70%
chez la brebis.
Les dérivés méthane-sulfoné apparaissent moins fixés (ce qui est normal puisque les
fonctions amines sont occupées), mais avec de grandes variations individuelles et inter-
spécifiques : 43% chez la brebis et 5 à 10% chez le chien ! (Al khayyat A.A et Aronson A.L,
1973 ; Ziv G et al, 1982)
Al Khayyat et Aronson ont montré que le pourcentage de liaison aux protéines
plasmatiques de la colistine sulfate, qui est élevé chez le chien (70%), est inversement
proportionnel à la concentration en antibiotiques. (Fig 15), vraisemblablement du fait de la
saturation des sites de fixation des protéines sériques.
Figure 15: Fixation des polymyxines aux protéines plasmatiques chez le chien en fonction de la concentration
sérique en antibiotique.
d. Distribution tissulaire
55
Tableau XIII : Concentration de colistine sous forme libre et liée dans les tissus et liquides biologiques de
veaux après une injection IV de CS.
Aucune forme libre n’est retrouvée dans le cerveau et aucune forme liée ne l’est dans
les urines (Tableau XIII). Les concentrations obtenues sous forme libre au niveau des
poumons sont comparables aux concentrations plasmatiques : au niveau du foie et des reins,
elles leur sont supérieures.
Sur le plan quantitatif, ce sont les muscles qui contiennent la masse la plus importante
d’antibiotique ; en effet bien que les concentrations dans ces organes ne représentent que 10 à
29% des concentrations retrouvées dans le foie et les reins, les quantités totales de colistine y
sont respectivement 15 à 20 fois et 3 à 8 fois supérieures. (Tableau XIV) Cet aspect sera à
prendre en compte pour l’établissement des délais d’attente, au même titre que la persistance
prolongée de la colistine dans les tissus. (Ziv et coll, 1982)
Tableau XIV : Quantité de colistine (en pourcentage) présente dans les différents organes et liquides
biologiques chez le veau après une injection IV de CS (5mg/kg)
56
La persistance dans les organes est très prolongée : le tableau XIV montre qu’après
48 heures plus de 30% de la dose administrée chez le veau se trouve encore dans les tissus
sous forme liée.
Le passage de la colistine dans les liquides physiologiques est faible, en relation avec
son poids moléculaire élevé et son affinité pour les membranes cellulaires.
Neuman estime que les concentrations de colistine dans le LCR après administration
parentérale de doses thérapeutiques sont satisfaisantes. Cependant il apparaît que les dérivés
méthane-sulfonés produisent des concentrations plus élevées dans le LCR. (Neuman, 1979)
Les polymyxines ne diffusent pas dans les liquides synoviaux et oculaires, ni dans les
épanchements pleuraux. (Maure D, 1986)
3. Biotransformations
La colistine, compte tenu de sa stabilité et de son défaut de solubilité dans les solvants
organiques, ne subit que très peu de biotransformations. Peu de données sont disponibles dans
la littérature sur les biotransformation de la colistine sulfate.
Neuman estime que 40% de la colistine est métabolisée dans l’organisme. Chez
l’homme la colistine est exclusivement éliminée par voie rénale sous forme active. On
retrouve 80% de la dose administrée dans les urines au bout de 24 heures.
Il n’y a pas d’élimination par voie biliaire chez toutes les espèces.
La CMSS est hydrolysée in vivo et in vitro en CS. Chez la brebis, 2 heures après une
injection IM de CMSS, 75% de l’activité colistine dans le sérum est due à la CMSS ; trois
quarts d’heure plus tard 80% de l’activité est déjà le fait de la molécule mère. On comprend
mieux pourquoi l’administration de CMSS est suivie de concentrations tissulaires
importantes : très tôt après l’injection, la CMSS qui n’est pas encore hydrolysée, diffuse dans
l’organisme. La transformation en CS qui s’en suit permet d’aboutir à une activité anti-
bactérienne dans des tissus ordinairement inaccessibles à la colistine sous forme libre.
Les biotransformations de la colistine sont peu connues mais elles sont très
minoritaires puisque l’essentiel de la molécule est éliminée par voie rénale sous forme
inchangée.
4. Elimination
Après administration orale, la colistine est éliminée presque exclusivement par les
fécès. Une infime partie a été retrouvée dans les urines lors de très fortes doses. L’élimination
se fait sous forme inactive puisque la molécule se fixe aux LPS et PL des bactéries Gram
négatif.
57
En fait la colistine apparaît dans l’urine très précocement après l’administration et y
persiste plusieurs jours. Sa clairance est d’ailleurs inférieure à celle de la créatinine. La
colistine n’est pas réabsorbée par les tubules rénaux. (Neuman M, 1979)
Chez le veau par exemple, Ziv et al ont montré qu’en 24heures, 50% de la dose de
colistine sulfate administrée par voie IV ont été éliminés et en 48heures seulement 65%. Chez
le chien l’élimination est aussi lente.
Cependant on doit noter que la colistine sous forme de méthane-sulfonate (comme on
peut s’y attendre) se comporte différemment. En effet, étant moins fixée par les tissus, son
élimination est plus rapide.
D. Etude toxicologique
1. Blocage neuro-musculaire
58
respiratoires rapidement mortelles. Aux doses sub-létales on observe une paralysie avec une
dépression respiratoire accompagnée d’une cyanose.
2. Néphrotoxicité
4. Autres manifestations
59
III. Etude pharmacologique et toxicologique de la bromhexine
A. Propriétés physico-chimiques
1. Structure chimique
Propriétés physico-chimiques :
60
Ambroxol :
Formule brute : C13H18Br2N2O
Dénomination chimique : 2-amino-3-5-dibromo-N-(trans-4-hydroxycyclohexyl)
benzylamine.
Poids moléculaire : 414,56 Daltons
2. Propriétés physiques
B. Etude pharmacocinétique
1. Résorption
La biodisponibilité de la bromhexine par voie orale varie selon les auteurs entre 10 et
25% de la dose administrée en raison d’un effet de premier passage hépatique important. En
effet le ratio d’extraction hépatique (soit l’effet de premier premier passage) est estimé à 0,92
chez le rat et 0,75 chez l’homme ce qui est considérable. Iwaki et al ont montré que la
biodisponibilité orale de la bromhexine chez le rat correspond à peine à 1,8 à 3,9% de la
biodisponibilité par voie intra-veineuse (Iwaki M et al, 1990, Bechgaard et Nielsen, 1982)).
Le temps de demi-vie plasmatique de la bromhexine est assez élevé. Il oscille entre 6
et 8 h chez l’homme, entre 8,9 et 11heures chez le rat et entre 3 et 4 heures chez le cheval.
(Iwaki M et al ; 1990, Gogny M; 2004)
La fixation aux protéines plasmatiques est très importante : entre 95 et 99%.
61
2. Distribution
3. Biotransformation
La bromhexine fait l’objet d’un métabolisme intense. De nombreux métabolites ont été
mis en évidence. Il semblerait que la proportion ainsi que le nombre de ces métabolites soit
liés à l’espèce. Ainsi, chez le porc, neuf métabolites différents ont été observés (Meijer I.A et
al), chez le lapin onze (Vandecasteele-thienpont et al, 1980) et chez l’homme douze. Les
réactions les plus importantes sont toujours une hydroxylation et/ou une déméthylation, la
combinaison de ces deux transformations permettant la formation d’ambroxol (métabolite
VIII). L’ensemble des réactions de biotransformation est représenté sur la figure 18.
Il est à noter que chez le cheval, les principaux métabolites de la bromhexine sont
l’hydroxy-bromexhine et la desmethyl-bromhexine. L’ambroxol est fabriqué en très faible
quantité.
62
Figure 18 : Principales voies de biotransformations de la bromhexine chez le lapin. (--- déméthylation,
…..cyclisation , hydroxylation). D’après Schraven et al.
4. Elimination
63
Figure 19 : Cumul de la radioactivité excrétée dans les urines et les fécès de plusieurs espèces, 96 heures après
une administration orale de 14C-bomhexine (exprimée en pourcentage).
C. Etude pharmacodynamique
La bromhexine fait partie des mucomodificateurs. Ces derniers sont classés en trois
catégories :
-les mucolytiques vrais qui agissent directement sur le mucus, provoquant une
modification structurale, aboutissant à leur fluidification (les mucolytiques sont aussi appelés
fluidifiants bronchiques)
-les mucorégulateurs qui modifient la synthèse du mucus en agissant sur les cellules
elles-mêmes.
-les expectorants augmentant le volume de la phase sol.
64
- les glandes bronchiques : elles sont situées dans la sous-muqueuse bronchique. On
distingue les glandes séreuses, les glandes muqueuses et les glandes mixtes. Ces glandes se
raréfient au fur et à mesure que l’on pénètre plus profondément dans l’arbre respiratoire.
- les cellules calciformes à mucus : ces cellules font partie du revêtement muqueux
superficiel et sont nombreuses dans l’arbre respiratoire supérieur et se raréfient en périphérie.
La somme de ces deux sécrétions constitue le film des sécrétions bronchiques.
(Bonnaud F et Germouty J, 1979)
65
Figure 21 : Représentation schématique de l’escalator muco-ciliaire.
66
Tableau XVI: Caractéristiques chimiques des trois phases obtenues par centrifugation du produit d’une
expectoration à laquelle est ajouté trois volumes d’eau distillée.
Les mucolytiques peuvent rompre les liaisons entre les chaînes glycoprotéiques du
mucus ou fragmenter ces chaînes elles-mêmes de différentes manières. La figure 23 récapitule
les différents modes d’action des mucolytiques. (Gogny M, 1995)
67
Figure 23 : Mode d’action des mucolytiques.
L’action mucolytique de la bromhexine est due à son action réductrice. Les ponts
dissulfures associant les chaînes glycoprotéiques sont rompus. La viscosité et l’élasticité des
sécrétions, si elles sont anormalement élevées, diminuent rapidement et l’activité ciliaire se
normalise. L’augmentation du volume liée à cette activité est nette. Une augmentation
transitoire du jetage précède donc parfois l’amélioration de l’état clinique de l’animal. La
bromhexine agit aussi par dépolymérisation des chaînes de mucopolysaccharides acides
entraînant ainsi une fluidification du mucus. (Gogny M, 1995)
Le mécanisme de l’action mucorégulatrice est beaucoup moins connu. La bromhexine
agit donc directement sur les cellules glandulaires. Elle agirait spécifiquement sur un
transporteur d’ion qui modifierait les concentrations ioniques du mucus et viserait à diminuer
la viscosité de celui-ci (le volume de l’hydrophase s’accroît). (Hasegawa et al, 2006) La
perméabilité de la muqueuse est aussi augmentée. L’action mucorégulatrice est plus
intéressante car, en agissant sur les cellules productrices de mucus elles-mêmes et non pas sur
le mucus une fois celui-ci déjà produit, les risques de modification excessive des paramètres
de viscosité sont diminués.
4. Propriétés pharmacologiques
68
b. Action anti-inflammatoire
c. Action anti-oxydante
La bromhexine ainsi que son principal métabolite sont des anti-oxydants puissants.
Ces effets ont été démontrés dans plusieurs études. Ce mécanisme est assez complexe. Il
convient de revenir sur la formation des radicaux libres afin de comprendre l’action anti-
oxydante de la bromhexine.
L’utilisation de l’oxygène au niveau cellulaire est à l’origine de la formation d’entités
très réactives : les radicaux libres (reactive oxygen species). Il s’agit en particulier de l’anion
radical superoxyde (O2-), du peroxyde d’hydrogène (H2O2) et du radical hydroxyle (HO).
Toutes ces entités se forment lors de la réduction de l’oxygène moléculaire en eau :
Cette réaction se déroule en réalité en plusieurs étapes et fait appel à des réactions
d’oxydo-réduction dont les radicaux libres sont les intermédiaires (Bergendi L et al, 1999). Ce
sont donc des produits normaux du métabolisme cellulaire. Or ils possèdent une forte toxicité
cellulaire : altération de l’ADN, altération des protéines et des lipides (notamment
membranaires) entraînant la mort cellulaire. Il existe donc un système enzymatique spécifique
très complexe visant à maintenir un équilibre entre la production et la dégradation de ces
radicaux libres. Les principales enzymes intervenant sont la superoxyde dismutase, la catalase
et la glutathion peroxidase.
69
La bromhexine et l’ambroxol sont capables d’accélerer les réactions de dismutation
du radical superoxyde respectivement de 3 et 2,5 fois in vitro. Cette action serait dû à la
capacité des groupements aromatiques de l’ambroxol et de la bromhexine à capter un électron
provenant du radical superoxyde. De plus ils piègeraient le radical hydroxyle apportant ainsi
un autre élément de protection contre les dommages induits par les radicaux libres. (Felix K et
al, 1996). La bromhexine et l’ambroxol stabilisent les membranes cellulaires en inhibant la
phospholipase A2 (enzyme de la peroxydation lipidique directement induite par les radicaux
libres). (Heath M.F et al, 1985)
d. Autres propriétés
70
L’effet le plus intéressant est probablement l’aptitude de ces composés (bromhexine et
dérivés) à augmenter la concentration locale en antibiotiques administrés en même temps.
Plusieurs études, dans différentes espèces l’ont confirmée. Cette propriété serait extrêmement
intéressante dans l’optique d’une association bromhexine-enrofloxacine. (Gogny M, 1995 ;
Kieffer P, 1985). On verra donc plus tard les avantages qu’offrirait cette association.
Par voie intramusculaire, la dose quotidienne recommandée est de 0,1 à 0,3 mg/kg. Par
voie orale, elle est de 0,5 mg/kg. Dans tous les cas un traitement de 5 jours est recommandé
pour maintenir une concentration locale suffisante et obtenir une amélioration clinique. Il
serait intéressant de connaître son activité et sa posologie lors d’utilisation d’inhalations.
6. Effets indésirables
Par voie orale et à la dose recommandée, le seul effet indésirable parfois décrit est une
légère irritation gastro-intestinale, accompagnée d’une diarrhée passagère. Chez le chien, le
chat et le lapin une bradycardie a été rapportée à partir de 10mg/kg. La dose létale 50 (DL50)
chez le chien et le lapin est supérieure à 10g/kg c'est-à-dire que son indice thérapeutique est
élevé.
La bromhexine est inscrite en annexe II ce qui la dispense de la détermination d’une
limite maximale de résidus (LMR) pour les bovins, les porcins et les volailles.
71
72
DEUXIEME PARTIE :
73
74
Les maladies respiratoires sont très fréquentes en élevage industriel de volailles. En
effet l’intensification de la filière rend les conditions environnementales difficiles à gérer. Le
stress est un facteur très nettement favorisant et forcément présent. La promiscuité est un autre
facteur favorisant. Les conséquences de ces maladies peuvent être très importantes
notamment au niveau économique. Ces maladies peuvent être virales, bactériennes ou
parasitaires. Dans cette étude nous nous attacherons aux maladies respiratoires bactériennes.
Nous verrons donc d’abord quelles infections bactériennes touchent les volailles, puis
nous nous attacherons à montrer l’intérêt ou non des associations enrofloxacine/colistine et
enrofloxacine/bromhexine dans le traitement de ces pathologies.
1. Etiologie
Escherichia coli est une bactérie commensale du tractus digestif des volailles. C’est
une bactérie Gram négatif, pourvue de pilis. Seul un certain nombre de sérotypes est
pathogène et appelé « Avian Pathogenic Escherichia Coli » (APEC). Certains sérotypes bien
particuliers sont associés au syndrome de la colibacillose.
75
On peut cependant rencontrer d’autres sérotypes moins fréquents mais représentés de
manière significative : O8, O15, O16, O35, 088, 0115, 0116. (Dho-Moulin M et Fairbrother
J.M, 1999)
1. Les fimbriae
Ce sont des adhésines qui sont impliquées dans l’adhérence des bactéries au tractus
respiratoire. Il semble évident que la capacité de certaines souches à adhérer à l’épithélium
respiratoire des poulets est un facteur de virulence importance. Les études portant sur les
adhésines ont été nombreuses afin de connaître celles qui interviennent dans la virulence des
souches pathogènes d’E.coli. Les études menées ont essentiellement porté sur deux types
d’adhésines : les fimbriae de type 1 (F1) et les fimbriae de type P.
α) Fimbriae de type 1
Les fimbriae de type 1 sont constituées d’une protéine majeure FimA associée à
d’autres protéines ancillaires et d’une adhésine FimH. Celles-ci sont codées par un ensemble
comprenant 9 gènes dont 7 sont présents sur le même opéron. Plusieurs variants des fimbriae
de type 1 existent chez les APEC et semblent associées aux sérotypes des souches, notamment
02 et 078 (Dho-moulin M et al, 1990).
Les fimbriae de type 1 furent longtemps considérées comme des facteurs de virulence
importants. En effet, Ike et son équipe rapportaient que 87 des 151 souches d’E.coli prélevées
sur des poulets atteint de colisepticémie étaient porteur des fimbriae de type 1 (soit près de
58%). (Ike K et al, 1990)
Wooley, quant à lui, a trouvé que l’ensemble des 40 souches d’E.coli isolées lors de
colisepticémie portait une fimbria de type 1 alors que seulement 23 souches intestinales sur 40
possédaient cette propriété. (Wooley et al, 1992)
Cependant, depuis ces résultats, d’autres études donnent des résultats qui diffèrent. En
effet des expériences menées sur un mutant dont la totalité de l’opéron fim est délété montre
que l’expression des fimbriae n’est pas nécessaire à la colonisation de la trachée et des sacs
aériens (Marc D et al, 1998). Une autre étude portant sur un mutant fimH a donné les mêmes
conclusions (Arne P et al, 2000). De plus un essai de vaccination à partir du domaine fimH
sur des poulets n’a révélé aucune protection contre les APEC (Vandemaele F et al, 2005).
β) Fimbriae de type P
Les fimbriae de type P sont codées par un ensemble de 11 gènes situés sur le
chromosome. La fimbria est constituée d’une sous-unité majeure (PapA) et d’une adhésine
terminale (PapG). L’adhésine possède trois variants différents.
La présence des fimbriae de type P est significativement plus fréquente chez les
souches isolées de poulets atteints de colisepticémie que chez les souches isolées de poulets
76
sains. (Dozois C.M et al, 1992) Cette fimbria semble jouer un rôle non pas dans l’adhésion au
niveau du pharynx et de la trachée mais semble plutôt intervenir tardivement dans le
processus infectieux.
2. La résistance au sérum
La faible quantité de fer disponible dans les liquides physiologiques ne permet pas aux
bactéries de pouvoir s’y multiplier. C’est pourquoi, elles ont acquis un système très efficace
de captation du fer leur permettant de survivre en présence de faibles concentrations de fer.
Ce système d’acquisition du fer est appelé aérobactine. Plusieurs études ont montré que la
plupart des souches APEC possèdent ce système alors que les souches non pathogènes le
produisent moins fréquemment (Lafont et al, 1987). Ainsi Linggood et son équipe ont montré
que 89% des 61 souches d’E.coli responsables de septicémie produisaient ce système alors
que seulement 11% des souches d’E.coli issus de poulets sains l’expriment (Linggood MA et
al, 1987). Ces résultats sont confirmés par d’autres études : pour Dozois et al ce sont 98% des
souches APEC qui expriment ce système et pour Emery et al cela représente 74% des
souches. (Emery D.A et al, 1992 ; Dozois C.M et al, 1992)
Ce système, dont l’opéron est situé sur un grand plasmide (colV), fonctionne in vivo et
son rôle principal serait de permettre aux bactéries de se multiplier dans le sang ou les organes
autres que l’intestin.
La corrélation élevée entre la production d’aérobactine et la virulence des souches
APEC (notamment des souches responsables de septicémie) a permis le développement d’un
test de diagnostic (détection enzymatique d’une protéine du récepteur membranaire du
complexe aérobactine-fer).
(1) Hémagglutination
Il a été montré récemment que le gène tsh isolé de souches APEC et codant pour une
hémagglutinine est associé préférentiellement à ce type de souche et ne se retrouve pas chez
des souches d’E.coli isolées de fécès d’animaux sains. D’ailleurs une étude (Dozois et al,
77
2000) portant sur une collection de plus 300 souches APEC a montré que parmi les souches
possédant le gène tsh, 90% font partie des souches les plus virulentes.
Il est à noter que ce gène n’est pas nécessaire pour la colonisation du tractus
respiratoire mais qu’il contribue au développement de lésions au niveau des sacs aériens.
Il semble donc que chez les oiseaux (comme chez les mammifères) le pouvoir
pathogène d’Escherichia coli est à déterminisme plurifactoriel.
La colibacillose peut affecter les poulets, les dindes et les canards. On retrouve
cependant plus fréquemment la colibacillose sous sa forme septicémique chez les très jeunes
poulets.
Il est couramment admis que la colibacillose se déclare à la suite d’une baisse
transitoire de l’immunité qui peut être due soit à l’intervention d’un mycoplasme ou d’un
virus soit à cause de mauvaises conditions environnementales (défaut de ventilation et taux
d’ammoniac trop élevé par exemple qui fragilise l’épithélium de la trachée et favorise
l’implantation des colibacilles).
La voie d’entrée principale de l’agent pathogène est le tractus respiratoire, via
l’inhalation de particules de poussières contaminées par des E. coli excrétés du tube digestif
d’animaux sains. Les intestins sont en effet le réservoir le plus important des E.coli
pathogènes aviaires (Stordeur P et Mainil, 2002). Le passage des bactéries dans le tractus
digestif permet à celles-ci d’acquérir des facteurs d’adhésion qui faciliteront l’invasion et la
colonisation du tractus respiratoire d’un nouvel hôte après excrétion dans le milieu extérieur.
Cet aspect est important à prendre en considération car si on diminue cette excrétion on
diminue la pression infectieuse de l’environnement.
Chez les poulets, on trouve près de 10^9 colonies formant unité de bactéries par
gramme de fécès et parmi celles-ci 10^6 sont représentées par E.coli. De plus 10-15% de
celles-ci appartiennent à des sérotypes pathogènes. (Harry E.G et Hemsley L.A, 1965; Gyles
C.L, 1994)
L’environnement est un facteur essentiel dans l’épidémiologie de la maladie et de
nombreuses études ont été menées afin de déterminer et de maîtriser les principaux facteurs
prédisposants. Ainsi on sait que les fécès et la poussière présents dans l’environnement des
volailles sont une source très importante d’E.coli pathogènes. En effet la poussière peut
contenir jusqu’à 10^6 bactéries par gramme et il existe une étroite relation entre les
sérogroupes retrouvés dans la poussière et ceux trouvés lors de septicémie (Carlson H.C et
Whenham G.R, 1968). Cependant l’inverse n’est pas vrai : les sérotypes identifiés lors
d’infections systémiques ne sont pas nécessairement les mêmes que ceux retrouvés dans le
tractus digestif.
Le taux d’humidité est aussi un facteur déterminant et plus ou moins contrôlable. Ainsi
une atmosphère poussiéreuse et peu humide permet la survie de la bactérie alors que le niveau
de contamination est réduit lorsque le niveau d’humidité augmente. Après brumisation, le
niveau de contamination peut être réduit de 85 à 95% en moins de 7 jours. (Harry E.G, 1964)
Les fécès des rongeurs peuvent aussi être des réservoirs de colibacilles pathogènes tout
comme la nourriture. Dans celle-ci, les coliformes résistent si l’humidité est de 5-10% mais
meurent pour un degré d’humidité de 15-20%. Enfin, l’eau source potentielle de
78
contamination peut être facilement contrôlée par chloration (Nagi M.S et Raggi L.G, 1972 ;
Boado E et al, 1988)
Après une multiplication au niveau du tractus respiratoire supérieur, les bactéries
colonisent les voies respiratoires profondes (sacs aériens et poumons) grâce à leur facteur
d’adhésion. Les bactéries atteignent ensuite le compartiment sanguin et colonisent ainsi les
organes profonds (cœur, foie et rate).
La contamination peut également être verticale. Les œufs sont contaminés lors de la
ponte et E. coli est capable de pénétrer à l’intérieur de l’oeuf.
Cette expression de la colibacillose est responsable d’une forte mortalité chez les
poussins de moins d’une semaine. La contamination de l’œuf (et plus précisément de la
membrane vitelline) se fait essentiellement lors de la ponte au passage du cloaque. Les œufs
contaminés présentent une coquille de moins bonne qualité, plus chaude et mouillée. On note
en parallèle des mortalités embryonnaires. Ces mortalités se poursuivent après l’éclosion et
ce, pendant une période de 3 semaines. Durant cette période les poussins peuvent présenter
des omphalites ainsi que des lésions de péricardite. Cependant la manifestation la plus
fréquente est une diminution du gain moyen quotidien, ce qui engendre des pertes
économiques conséquentes. (Lecoanet J, 1992)
79
Il existe des formes subcliniques se traduisant seulement par une diminution de la
prise alimentaire. (Stordeur P et Mainil J, 2002)
Cette maladie apparaît le plus souvent vers la trentième semaine. Elle est caractérisée
par une inflammation aiguë des cellules de la peau et du tissu sous-conjonctif de la tête. On
note donc un œdème de la tête et de la région périorbitaire. Cette pathologie n’est pas très
fréquente mais la majorité des animaux présentant ces symptômes y succombent.
La contamination par les colibacilles est toujours secondaire à une infection par des
agents prédisposants (Coronavirus, Paramyxovirus). (Lecoanet J, 1992)
- Forme génitale : on assiste alors à des ovarites ou des salpingites qui font suite à la
contamination du sac aérien abdominal gauche. Les bactéries se propagent alors par
continuité. Les animaux touchés meurent en six mois.
- Coligranulomatose (Hjarres’s disease) : elle est peu fréquente, mais peut entraîner un
taux de mortalité important (jusqu’à 75%). On note l’apparition de granulomes dans le
foie, le duodénum, le caecum et le mésentère mais jamais sur rate. Il faut réaliser le
diagnostic différentiel avec la leucose et la tuberculose.
B. La mycoplasmose
1. Etiologie
Les mycoplasmes sont des procaryotes appartenant à la classe des Mollicutes. Ils sont
délimités par une simple membrane cytoplasmique ce qui les rend peu résistants dans le
milieu extérieur et sensibles à la plupart des désinfectants. Ce sont des bactéries très
sommaires mais de culture lente et difficile.
Les oiseaux peuvent abriter une vingtaine de sérotypes de mycoplasmes différents. Les
espèces les plus pathogènes sont : Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma synoviae,
Mycoplasma meleagridis et secondairement Mycoplasma iowae.
80
2. Epidémiologie
Les mycoplasmes peuvent affecter tout type de volaille (dinde, poule, canard, oie,
pigeon). L’installation d’une mycoplasmose respiratoire nécessite l’association de plusieurs
facteurs agissant en combinaison ou en synergie.
La transmission des mycoplasmes peut être verticale ou horizontale. La transmission
horizontale se fait entre animaux ou par le biais du matériel, de l’aliment ou de l’eau dans
laquelle le germe peut survivre quelques jours. La transmission verticale des mycoplasmes
résulte surtout du contact des sacs aériens et de l’ovaire. L’ovaire ainsi colonisé assure la
pérennité verticale à ceux-ci. (Thiaucourt L, 1984)
3. Etude spécifique
a. Mycoplasma gallisepticum
● Genre Gallus : la maladie s’exprime lors d’un stress quelconque (manipulation, vaccination,
entrée en ponte…) et complique souvent une maladie virale à expression respiratoire comme
la bronchite infectieuse ou la maladie de Newcastle. Elle est souvent compliquée ou associée
à une colibacillose.
Les symptômes observés sont des râles trachéaux et bronchiques, du jetage et de la
toux. Au niveau des lésions, on retrouve une desquamation de l’épithélium ainsi qu’un
dépolissement des sacs aériens associés parfois à la présence de bouchons caséeux. Il y a
souvent une pneumonie, une périhépatite, une péricardite fibrineuse ou purulente lors de
complications. Le microscope révélera un décapage des cils de l’escalator mucociliaire.
● Genre Meleagridis : la maladie, affectant le dindon, se traduit souvent par une sinusite sub
ou infraorbitaire chronique bilatérale. Elle peut s’étendre à toutes les membranes de l’œil.
L’inflammation est parfois telle, que l’oiseau ne peut plus ouvrir les yeux ni se nourrir.
On entend des râles trachéo-bronchiques avec dyspnée. L’examen nécropsique révèlent des
lésions trachéiques, bronchiques ainsi qu’une aérosacculite en plus de la sinusite à contenu
caséeux. ( Thiaucourt L, 1984)
b. Mycoplasma méleagridis
Il s’agit d’une mycoplasmose spécifique du dindon. Cette maladie est transmise par
l’œuf et se traduit par des aérosacculites ou des retards de croissance chez les jeunes oiseaux.
L’expression et l’aggravation de la maladie sont largement favorisées par les conditions
d’élevage.
A l’examen nécropsique on note un épaississement des sacs aériens ainsi que la
présence d’un enduit jaunâtre.
81
c. Mycoplasma synoviae
C. La pasteurellose
1. Etiologie
Les pasteurelles sont des bactéries Gram négatif et se présentent sous la forme de
coccobacilles ovoïdes, immobiles et encapsulés. Ces germes ne sporulent pas et sont sensibles
aux rayons solaires, à la dessiccation ainsi qu’aux désinfectants usuels.
Le genre Pasteurella est classé dans la famille des Pasteurellacea et contient de
nombreuses espèces : P. multocida, P.haemolytica, P.gallinarum. Pasteurella multocida est
responsable du choléra aviaire. Les autres pasteurelles sont plutôt des germes opportunistes
venant compliquer des affections primitives et notamment des maladies respiratoires.
2. Epidémiologie
Il s’agit d’une affection des oiseaux adultes ou subadultes. Il existe de très nombreux
porteurs sains. La transmission horizontale est surtout directe et le passage de la bactérie dans
l’organisme se fait au travers des muqueuses. Le germe pénètre essentiellement par voie
respiratoire. Les matières virulentes sont les sécrétions buccales, nasales et conjonctivales.
Tout stress est un facteur nettement favorisant de l’affection.
3. Pathogénie et clinique
82
Les formes subaiguës ou chroniques compliquent souvent des mycoplasmoses ou des
affections virales.
L’expression de la pasteurellose est très variable. En ce qui concerne la pasteurellose
respiratoire on note un jetage, des éternuements, une conjonctivite, des râles trachéaux, une
aérosacculite, une périhépatite ainsi qu’une péricardite. On note certaines fois des foyers de
pneumonie.
D. Le coryza infectieux
Il s’agit d’une maladie infectieuse et contagieuse provoquée par une bactérie Gram
négatif : Avibacterium paragallinarum (anciennement Haemophilus paragallinarum). Elle se
traduit par une inflammation aiguë des voies respiratoires supérieures : conjonctivite et
sinusite. C’est un coryza capable d’affecter toutes les espèces de gallinacés. Ce sont
essentiellement les oiseaux de plus d’un mois qui sont touchés.
L’incidence de cette maladie s’est considérablement amoindrie en Europe ces
dernières décennies. Le coryza entraîne plus de morbidité que de mortalité mais il se
complique facilement. Les germes de surinfection sont comme toujours les mycoplasmes et
les colibacilles.
Les lésions sont situées au niveau de l’arbre respiratoire supérieur (muqueuse nasale,
oculaire, sinus infra-orbitaire). (Jordan et al, 2002)
83
II. Associations médicamenteuses impliquant l’enrofloxacine : intérêts dans le traitement
des pathologies respiratoires des volailles
Les deux premiers cas sont l’effet d’une parfaite indépendance d’action alors que les
deux derniers témoignent d’une interaction au niveau des mécanismes d’actions.
On définit aussi un autre type d’interaction en cinétique de bactéricidie: la dominance.
L’antibiotique dominant impose à l’association sa dynamique d’action (cela se manifeste
pendant la phase précoce de bactéricidie). (Loussouarn M, 1998 ; Puyt J.D, 2004)
Les différents types d’interactions sont schématisés sur la figure 25.
84
2. Principes généraux des associations
L’ensemble des lois édictées par Jawezt est schématisé sur la figure 26.
85
L’association enrofloxacine/colistine respecterait donc ces lois puisque ce sont deux
antibiotiques bactéricides l’un actif sur les germes en phase de repos et l’autre sur les germes
en phase de multiplication et de repos. Cependant il est difficile de savoir sans mesures
expérimentales si cette association mène à une synergie ou à une totale indifférence. Nous
verrons plus loin qu’une synergie entre ces deux molécules n’a été démontrée que pour deux
germes.
ANTIBIOTIQUE DOMINANT
Concentration-dépendant Temps-dépendant
Tableau XVII : Résultats théoriques des associations au cours de la phase précoce de l’activité bactéricide des
antibiotiques. (Drugeon H.B et al, 1987)
Lors d’une association d’antibiotique on constate qu’un des deux partenaires associés
impose sa vitesse de bactéricidie à l’autre : c’est l’antibiotique dominant. Ainsi il apparaît
intéressant d’associer un antibiotique concentration dépendant dominant à un partenaire
temps-dépendant conduisant généralement à une thérapeutique synergique à vitesse de
bactéricidie rapide de type « concentration-dépendante ». La forte bactéricidie d’une telle
association va permettre de faire rapidement chuter l’inoculum bactérien. (Veber B, 2004)
86
La colistine et l’enrofloxacine sont toutes les deux concentration-dépendant vis-à-vis
des bactéries Gram négatif. La phase précoce de bactéricidie sera donc forcément de type
concentration-dépendante et cette association ne bénéficiera pas de synergie. L’avantage
d’avoir deux antibiotiques concentration-dépendants (ou temps dépendant) c’est que le
rythme d’administration des deux substances sera proche.
En revanche vis-a-vis des bactéries Gram positif l’enrofloxacine est temps-dépendant
et la colistine concentration-dépendant. Si l’antibiotique dominant est la colistine alors
l’association bénéficiera d’une cinétique de bactérécidie rapide de type concentration-
dépendant qui ferait rapidement chuter l’inoculum bactérien (Veber B, 2004). Si
l’enrofloxacine est l’antibiotique dominant alors il y aura antagonisme.
B. L’association enrofloxacine/colistine
Lorsque l’on souhaite associer deux antibiotiques, c’est pour en retirer certains
avantages. Plusieurs raisons théoriques et pratiques peuvent justifier la prescription d’une
association. Nous allons voir donc quels sont les intérêts et les inconvénients d’une telle
association, particulièrement dans le traitement des pathologies respiratoires des volailles.
87
On remarque aussi que malheureusement aucune des deux molécules n’est active
contre les bactéries strictement anaérobies (même si elles ne sont pratiquement jamais
responsables des infections respiratoires des volailles).
88
Cependant, en pratique et en première intention, on peut se baser sur des antibiotiques
reconnus synergiques sur certaines bactéries.
L’effet synergique de l’association enrofloxacine/colistine a été démontré sur deux
bactéries : Proteus et Serratia. Le genre Serratia et certains Protéus produisent une enzyme
capable d’inactiver les polymyxines ; cette résistance est levée par l’adjonction de quinolones
qui supprimant la production de cette enzyme. Il s’agit donc d’une véritable synergie
démontrée entre la colistine et l’enrofloxacine, malheureusement peu utile dans le cadre du
traitement des pathologies respiratoires des volailles. Il reste cependant à noter que cette
association a été très peu étudiée et que par conséquent de nombreuses bactéries n’ont pas
bénéficié de tests in vitro dans le cadre de cette association. (Neuman M, 1998)
Il faut noter qu’une étude très récente a été réalisée sur l’incidence d’un traitement aux
quinolones sur la sensibilité de certaines souches bactériennes aux antibiotiques
polypeptidiques. Cette étude particulière est très intéressante dans le cadre d’une association
enrofloxacine/colistine. En effet, les auteurs ont voulu évaluer dans quelle mesure un
traitement avec des quinolones, à des concentrations sub-inhibitrices, pouvait altérer la
sensibilité des souches bactériennes à un traitement aux antibiotiques polypeptidiques. Les
résultats sont surprenants : 1 heure après avoir traité Klebsiella pneumoniae avec 0,25 fois la
CMI de la ciprofloxacine cette bactérie est plus sensible aux polymyxines (B et E) et aux
défenses immunitaires. La lévofloxacine et l’acide nalidixique à 0,25 fois la CMI augmentent
aussi la sensbilité de Klebsiella pneumoniae aux polymyxines alors que la gentamycine et la
ceftazidime utilisées dans les mêmes conditions n’ont pas cet effet. Deux autres bactéries
pathogènes, à savoir Pseudomonas aeruginosa et Haemophilus influenzae, deviennent aussi
plus sensibles aux polymyxines après un traitement avec 0,25 fois la CMI de ciprofloxacine.
Les auteurs précisent que la ciprofloxacine et levofloxacine augmentent la perméabilité de la
membrane externe de Klebsiella pneumoniae et Pseudomonas aeruginosa. Ils démontrent
aussi que ces deux fluoroquinolones augmentent la liaison des antibiotiques polypeptidiques
à la membrane externe de ces bactéries. (Campos A.M et al, 2006)
On voit donc ici que les conclusions de cet article semblent intéressantes dans le cadre
de notre association, cependant ces résultats doivent être confirmés en utilisant des
concentrations égales aux CMI car c’est le schéma thérapeutique utilisé actuellement. En effet
si l’on associe la colistine à l’enrofloxacine dans le traitement des infections respiratoires on
utilisera des doses qui permettent d’obtenir, au site d’infection, des concentrations égales aux
CMI des germes impliqués, puisqu’il s’agit de la base de l’antibiothérapie actuelle. On peut
noter aussi que les germes qui ont été testés, sont des germes qui sont souvent retrouvés lors
d’infections respiratoires chez les volailles comme il a été décrit précédemment. Par ailleurs,
les auteurs pensent que ces résultats peuvent ouvrir de nouvelles perspectives dans le cadre
des traitements antibactériens.
On pourrait être tenté de prescrire une association dans le but de diminuer les risques
toxiques en réduisant les posologies de chaque produit et étant donné la toxicité de la colistine
on pourrait penser qu’il s’agit d’un avantage indéniable. Or ce n’est pas envisageable puisque
la réduction des doses entraînerait des taux plasmatiques et tissulaires insuffisants. La
conséquence peut être des échecs thérapeutiques ou l’apparition de résistances.
De plus, la règle veut que l’on utilise chaque substance à la même dose que celle
utilisée lorsqu’elle est administrée seule, ce qui est une nécessité absolue en cas
89
d’indifférence. Il en découle que, non seulement, une association d’antibiotique ne diminuera
jamais le risque toxique mais en plus l’inverse pourra être observé. En effet la toxicité des
deux antibiotiques s’ajoute, voire se potentialise. Par exemple, chez les insuffisants rénaux
l’utilisation d’antibiotiques néphrotoxiques comme la colistine va accentuer cette insuffisance
et provoquer une diminution de l’excrétion rénale de celui-ci. L’antibiotique et son associé
ont la possibilité d’augmenter très nettement les concentrations tissulaires et sanguines jusqu'à
atteindre des concentrations nettement toxiques.
a. Propriétés physico-chimiques
b. Propriétés pharmacocinétiques
1. Résorption :
C’est à ce niveau que l’on a la plus grosse incompatibilité. En effet, la résorption orale
de la colistine est quasi-nulle alors que celle de l’enrofloxacine est rapide et complète. On ne
pourra pas utiliser cette association par voie orale dans le but de traiter directement une
infection respiratoire et si l’on veut que les deux antibiotiques soient présents au niveau du
foyer infectieux. La résorption parentérale de la colistine et de l’enrofloxacine est rapide et
complète. Ce seront donc les voies parentérales qui seront à privilégier pour cette association
dans le traitement des infections respiratoires des volailles. Cependant l’utilisation par voie
orale de la colistine n’est pas abérrante pour autant. Comme nous l’avons vu précedemment,
les bactéries, et plus précisément les Escherichia coli acquièrent une facteur d’adhésion dans
le tube digestif. C’est à ce niveau là que l’utilisation de la colistine est très interessante. En
effet la colistine possède une excellente activité dans le tube digestif sur Escherichia coli
lorsqu’elle est administrée par voie orale. Le bénéfice de l’utilisation de la colistine par voie
orale est donc indirect mais très intéressant dans le cadre d’une maladie contagieuse pour
90
laquelle l’influence de l’environnement est grande. L’association peut donc s’utiliser par voie
voie parentérale et orale. Chez les volailles, la voie la plus facile et la plus utilisée est la voie
orale. En effet l’eau d’abreuvement est fréquemment utilisée comme voie d’administration
surtout lorsqu’il s’agit de traiter un lot d’animaux ce qui est le cas lors de pathologies
d’élevages fortement contagieuses.
Une alternative à cette voie d’administration pour traiter de nombreux
animaux simultanément est la voie pulmonaire par nébulisation ou brumisation. Cette voie est
intéressante car la résorption pulmonaire des deux antibiotiques est bonne. De plus dans le
cadre du traitement de pathologies respiratoires cette voie est tout à fait adaptée.
2. Distribution
3. Biotransformations
4. Elimination
L’élimination des deux molécules se fait en majeure partie (voire quasi exclusivement
pour la colistine) par voie rénale. Cette élimination rénale est très importante à prendre en
91
considération. Chez les insuffisants rénaux, cette association sera sans doute contre-indiquée
ou du moins, si elle est tout de même utilisée, les doses devront être réduites. C’est un point
extrêmement important compte tenu de la toxicité rénale de la colistine. Cette association sera
contre-indiquée pour les mêmes raisons chez les animaux déshydratés ou fortement débilités.
C. L’association enrofloxacine/bromhexine
Une étude, réalisée chez des poulets, a montré une concentration en ciprofloxacine
nettement plus élevée dans de nombreux organes lorsque l’enrofloxacine est utilisée en
association avec la bromhexine que lorsqu’elle est utilisée seule. (Ceva, 2005)
Martin G.P et al ont montré une augmentation significative de la concentration
d’oxytétracycline dans les sécrétions bronchiques de mini porcs lors d’association à la
bromhexine. L’étude est réalisée sur seulement 3 mini-porcs. Ils réalisent cette étude en co-
administrant 40 mg/kg deux fois jour d’oxytétracycline et 0,5mg/kg de bromhexine per os
pendant 5 jours. Outre ce résultat, ils montrent que la bromhexine anihile l’augmentation de
viscosité crée par l’oxytétracycline. (Martin G.P et al, 1993).
Les résultats se révèlent être différents dans l’étude de Friis et al réalisée sur des veaux
de 8 à 10 semaines. Les résultats de cette étude, présentés sur la figure 27, sont obtenus après
une unique co-administration d’oxytétracycline à 10 mg/kg en intra-veineux et de bromhexine
à 2 mg/kg en intra-musculaire.
Figure 27 : Concentration d’oxytétracycline dans le plasma ○, les sécrétions bronchiques ● et nasales ▲ après
administration de 10 mg/kg d’oxytétracycline IV avec ou sans administration simultanée de bromhexine à
2mg/kg IM.
92
On remarque donc que l’administration simultanée de bromhexine n’augmente la
concentration ni dans les sécrétions bronchiques, ni dans les sécrétions nasales.
L’auteur propose deux hypothèses pour expliquer les différences entre ses résultats et
les résultats obtenus dans d’autres études notamment celle de Kotzian J et al. La première
serait que ces différences soient dues à l’utilisation de méthodes analytiques différentes. Dans
l’étude de Kotzian, les analyses avaient été réalisées grâce à des dosages microbiologiques
alors que dans celle-ci les dosages ont été réalisés par chromatographie liquide à haute
performance. L’auteur pense que la bromhexine peut influencer les résultats des dosages
microbiologiques. L’autre hypothèse émise par l’auteur serait que la bromhexine n’est pas
capable d’augmenter la concentration d’oxytétracycline après une unique injection.
L’augmentation de la concentration d’oxytétracycline dans les différentes sécrétions de
l’arbre respiratoire grâce à la bromhexine nécessiterait plusieurs administrations. Cette
hypothèse est probablement à privilégier car l’administration unique d’antibiotique et de
bromhexine n’est scientifiquement pas fondée.
Les conclusions tirées de cette étude doivent être prises avec précaution vu le petit
nombre d’animaux utilisés. En effet cette étude a été menée sur 4 veaux frisons ce qui signifie
que n=2 veaux par lot. On peux donc réellement s’interroger surla représentativité de ces lots
et par conséquent sur la significativité de ces résultats. (Friis C et al, 1995)
Friis voulait comparer ces résultats à ceux de Kotzian. En effet Kotzian et al ont aussi
réalisé une étude sur l’association bromhexine/oxytétracycline chez les bovins. Et les résultats
sont totalement opposés puisque cette étude montre une augmentation de plus de 360% de la
concentration d’oxytétracycline dans les sécrétions bronchiques ! (Kotzian et al, 1976)
Escoula et al ont également testé les effets de la bromhexine sur des bovins. La
bromhexine est ici utilisée en I.M une fois par jour pendant 3 jours (45mg/animal).
L’antibiotique testé est de la famille des macrolides : la spiramycine (20mg/kg les deux
premiers jours). Cet antibiotique est retrouvé dans le tractus respiratoire à une concentration
10 fois supérieure à celle trouvée dans le sang. Escoula se demandait si la bromhexine
permettait d’augmenter encore cette concentration. Les résultats de cette étude mettent en
avant plusieurs choses remarquables.
Premièrement, en suivant la pharmacocinétique de la spiramycine, on s’apercoit que le
pic plasmatique de concentration est différent suivant le groupe. En effet le pic de
concentration de spiramycine sans bromhexine se situe à 30 min post-injection alors qu’en
présence de bromhexine il se situe à 2 heures post-injection. Cela suggère un mode de
distribution différent sous l’influence de la bromhexine.
Deuxièmement on s’aperçoit qu’en présence de bromhexine, la concentration de
spiramycine dans les sécrétions nasales est plus importante (Figure 28 : l’aire sous la courbe
est proportionnelle à la concentration). Cette augmentation est de 6% le premier jour, 42% le
deuxième jour et de 32% le dernier jour. On peut remarquer que l’action de la bromhexine est
peu visible le premier jour et par contre maximale le deuxième jour. Ces résultats pourraient
expliquer les résultats obtenus par Friis. (Escoula L et al, 1982)
93
Enfin, on remarque que la concentration de spiramycine est encore élevée 48h après la
dernière injection de l’antibiotique et 24h après la dernière injection de bromhexine alors
qu’elle n’est plus détectée dans le sang. (Tableau XVIII)
Tableau XVIII : Concentration de la spiramycine (µg/g) dans les sécrétions nasales de bovins recevant de la
spiramycine (S) ou de la spiramycine + bromhexine (SB).
94
Bergogne-Berezin a réalisé une étude en associant la bromhexine à deux
antibiotiques : l’érythromycine et l’amoxicilline. Cette étude a été réalisée sur 48 patients en
milieu hospitalier. L’erythromycine est utilisée à la dose habituelle (0,5g deux fois par jour)
pendant 3 jours et l’amoxicilline à la dose de 1g/BID pendant 7 jours. Deux doses de
bromhexine, (48mg et 96mg/j) sont utilisées. L’action de la bromhexine est montré par le
ratio de la concentration dans les sécrétions bronchiques sur la concentration du sérum au
même moment. Les résultats montrent une élévation significative de la pénétration de
l’erythromycine et de l’amoxicilline dans les sécrétions bronchiques en présence de
bromhexine. Il est à noter également que le pourcentage de pénétration est plus élevé lorsque
la dose de bromhexine est de 96mg (4,3% contre 7,5%). Pour l’auteur ces résultats confirment
l’efficacité de la bromhexine : cette molécule à la capacité de rompre les chaînes de
mucopolysaccharides des sécrétions bronchiques et ainsi de favoriser localement l’absorption
de l’antibiotique. (Bergogne-berezin E et al, 1985)
Ainsi, une étude réalisée sur cinq purs-sangs a montré une augmentation de 50% de la
concentration de la céphalotine (béta-lactamine) dans le liquide broncho-alvéolaire lors
d’association à l’ambroxol par voie orale. Les résultats de cette étude sont présentés sur la
figure 29.
Figure 29 : Variation de la concentration de céphalotine ajustée au taux de protéine dans le liquide broncho-
alvéolaire. Céphalotine plus ambroxol, céphalotine seule.
On peut noter que le nombre d’animaux utilisé est ici faible (5) mais l’auteur précise
que l’expérience a été répété sur chaque cheval quatre fois à une semaine d’intervalle et que
les résultats sont des moyennes. On remarque aussi que l’effet de l’ambroxol apparaît ici
après seulement une heure. (Matsuda Y,1999)
95
Une autre étude, associant l’ambroxol (PO) à l’ampicilline, à l’amoxicilline ou à
l’érythromycine, a été réalisée chez le rat. Les résultats de cette étude sont sans équivoque :
l’ambroxol permet une augmentation significative (p<0,05) de la concentration
bronchopulmonaire d’ampicilline de plus de 234%, de celle de l’érythromycine de 27% et de
celle de l’amoxicilline de 27%. (Wiemeyer J-C, 1981)
Spatola et al a aussi testé l’association amoxicilline /ambroxol (60mg trois fois par
jour, PO) chez l’homme et les résultats sont du même ordre. On note une augmentation de la
concentration d’antibiotique dans les tissus pulmonaires ainsi qu’un ratio concentration
pulmonaire sur concentration du sérum augmenté. (Spatola et al, 1987). Des résultats
identiques sont obtenus dans l’étude de Gene et al : l’augmentation de la concentration
d’amoxicilline est objectivée dans le liquide broncho-alvéolaire. (Gene et al,1987)
La seule étude de ce genre faisant intervenir une quinolone est celle de Pagagnin et al.
Celui-ci recherchait les effets de l’ambroxol sur la concentration d’ofloxacine dans les tissus
pulmonaires chez l’homme. Elle est réalisée sur 24 patients souffrant de maladie pulmonaire
chronique. Le groupe testé reçoit 200mg BID d’ofloxacine et 30mg TID d’ambroxol pendant
10 jours. Les analyses sont réalisées au terme du dixième jour. Les résultats montrent que
l’ambroxol n’augmente pas la concentration bronchique d’ofloxacine de manière
significative. Cependant la concentration d’ofloxacine est trois fois plus élevée dans les
cellules alvéolaires du groupe testé que dans le groupe témoin. L’auteur précise que la
concentration d’ofloxacine est naturellement élevée dans les tissus pulmonaires. Cet argument
n’explique pas totalement ces résultats étant donné que l’ofloxacine n’est pas le seul
antibiotique à diffuser largement dans les tissus pulmonaires. En effet les antibiotiques de la
famille des macrolides ont aussi une concentration pulmonaire élevée. Or on a vu
précédemment que certains macrolides voient leur concentration pulmonaire augmenter en
présence d’ambroxol (et même de bromhexine) (Paganin F et al, 1995) Cependant les
résultats de cette étude paraissent montrer que l’association d’une fluoroquinolone avec
l’ambroxol ne permet pas une synergie comme celle décrite avec les β-lactamines, les
macrolides, tétracyclines ou céphalosporines, permettant une augmentation de la
concentration d’antibiotique dans les sécrétions bronchiques et/ou les tissus pulmonaires.
Cependant l’extrapolation de ces résultats à l’association bromhexine/enrofloxacine reste
difficile à réaliser car il s’agit du dérivé de la bromhexine et qu’il ne s’agit pas du même
antibiotique (même s’il appartient à la même famille). L’ensemble de ces résultats est
récapitulé dans le tableau XIX.
96
Antibiotiques
Bromhexine/Ambroxol Voie Espèce Résultat Auteur/Date
Famille Molécule
Quinolone Enrofloxacine Bromhexine PO Poulet Positif Ceva
Tétracycline Oxytétracycline Bromhexine PO Mini-porc Positif Martin G.P et al/1993
Tétracycline Oxytétracycline Bromhexine IV Veau Négatif Friis et al/1991
Tétracycline Oxytétracycline Bromhexine Bovin Positif Kotzian et al/1976
Macrolide Tylosine Bromhexine IM Porc Positif Paschov et al/1997
Macrolide Spiramycine Bromhexine IM Bovin Positif Escoula et al/1981
Macrolide Erythromycine Bromhexine PO Homme Positif Bergogne-berezin E et al/1985
Béta-lactamine Amoxicilline Bromhexine PO Homme Positif Bergogne-berezin E et al/1985
Béta-lactamine Céphalotine Ambroxol PO Cheval Positif Matsuda Y et al/1999
Béta-lactamine Ampicilline Ambroxol PO Rat Positif Wiemeyer J-C/1981
Béta-lactamine Amoxycilline Ambroxol PO Rat Positif Wiemeyer J-C/1981
Béta-lactamine Amoxycilline Ambroxol PO Homme Positif Gene et al/1987
Béta-lactamine Amoxycilline Ambroxol PO Homme Positif Spatola et al/1987
Macrolide Erythromycine Ambroxol PO Rat Positif Wiemeyer J-C/1981
Quinolone Ofloxacine Ambroxol Homme Positif/Négatif Pagagnin F et al/1995
Tableau XIX : Résultats comparés des différentes études sur l’association entre la bromhexine ou l’ambroxol et divers antibiotiques
97
Il est à noter que très peu d’auteurs peuvent justifier cette synergie. En effet, les
mécanismes d’action de la bromhexine ou de l’ambroxol vis-à-vis des anti-infectieux restent
flous. On s’aperçoit seulement que l’accès de l’anti-infectieux au site infectieux est facilité et
sa concentration in situ augmentée. Wiemeyer avance tout de même quelques hypothèses. Il
pense que l’ambroxol augmente la perméabilité des vaisseaux sanguins et du tractus
respiratoire.
Compte tenu des nombreuses propriétés de la bromhexine et des résultats obtenus lors
de son association avec l’enrofloxacine, l’association lors d’infections respiratoires chez les
volailles, semble judicieuse.
99
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WIDMANN Sandra
RESUME:
La plupart des élevages de volailles dans le monde sont concernés par les pathologies
respiratoires. Du fait de leur impact économique important leur traitement est un enjeu à part
entière.
La seconde partie présente dans un premier temps les principales infections bactériennes à
tropisme respiratoire et leurs agents causals qui sévissent chez les volailles, puis dans un
second temps d’analyser différentes associations proposées : l’enrofloxacine et la colistine
ainsi que l’enrofloxacine et la bromhexine.
Enfin les bénéfices et inconvénients de ces associations, bromhexine dans le traitement des
pathologies respiratoires des volailles, sont exposés.
MOTS CLES :
- Antibiotique
- Enrofloxacine
- Colistine
- Bromhexine
- Association
JURY :
Président : Monsieur le Professeur Jacques DESCOTES
ADRESSE DE L’AUTEUR :
18 av de la république
69160 Tassin la demi-lune