interprétation à la recherche des anomalies dans les différentes fractions
Plan Introduction
Electrophorèses
Anomalies au niveau de la fraction albumine
Dysglobuminémies ( fractions α1 , α2, β1 , β2
globulines )
Interférences Introduction L’électrophorèse des protéines sériques : analyse sérique simple, réalisée en routine dans la pratique quotidienne d’un laboratoire de biochimie médicale.
L’électrophorèse des protéines sériques est aujourd’hui,
très majoritairement automatisée sur gels d’agarose ou par électrophorèse capillaire.
Interprétation parfois délicate…
Pourquoi explorer le profil électrophorétique du sérum ? Confirmation de la présomption d’un diagnostic, en association avec d’autres paramètres: atteinte hépatique, cirrhose ou syndrome néphrotique.
Recherche et caractérisation d’une immunoglobuline
monoclonale dans le cas de suspicion de certains myélomes en association avec des signes cliniques.
anti-cancéreux, etc. Electrophorèse de zone sur gel d’agarose (8 g/L)
• Application des échantillons sur le gel.
• Migration électrophorétique en tampon Tris-barbital à pH = 9,2. • Séchage et coloration par une solution Etapes amidoschwarz (pH=2, 4 g/L) • Décoloration (acide citrique). • Séchage final. • Lecture sur un densitomètre à 570 nm. Electrophorèse de zone sur gel d’agarose
• Amidoschwarz plus sensible que le rouge
ponceau et idéal pour la détection des Avantages faibles gammapathies. • Semi-automatisée/automatisée. • 5 ou 6 fractions.
• Difficulté de détection de composés
Inconvénients monoclonaux de migration identique à d’autres fractions (β, α1 ou α2-globulines). Electrophorèse de zone sur gel d’agarose Electrophorèse capillaire: principe
Charges positives de Forte différence de potentiel générant un
la solution tampon important courant d’électro-endosmose.
Charges négatives Ce courant, plus important que le champ
des parois du capillaire électrique, entraine les protéines du côté cathodique. Electrophorèse capillaire • Injection des échantillons dilués au 1/10 dans le tampon de pH = 10) dans les capillaires de silice fondue (diamètre: 25 µm, longueur: 18 cm) protégés par une gaine en aluminium fondu, est effectuée à l’anode par aspiration.
Etapes • Migration des protéines en parallèle dans huit
tubes capillaires en appliquant une différence de potentiel constante de 7000 V aux extrémités de chaque capillaire thermostaté à 35,5°C.
• Détection directe des protéines à 200 nm côté
cathode. Electrophorèse capillaire
• Microtechnique (Faible volume d’échantillon).
• Automatisée avec alimentation en continu. • Rapide (quelques minutes). Avantages • Très performante. • Reproductible. • Séparation de 6 fractions.
• Contrôle visuel virtuel de la migration.
Inconvénients • Interférences. Comment interpréter un profil électrophorétique?
Electrophorèse de zone 5 ou 6 fractions selon le support utilisé.
Electrophorèse capillaire 6 fractions. Comment interpréter un profil électrophorétique? Un profil électrophorétique se lit et s’interprète en regardant le tracé et l’ensemble des chiffres qui l’accompagnent:
Protidémie dans la fourchette des valeurs usuelles (65 – 80g/L)
Les valeurs en % et les concentrations en g/L sont équivalentes
Hypo ou hyper protidémie:
- Tenir compte des % de chaque fraction
- Tenir compte des concentrations dans un but thérapeutique
Rapport albumine / globulines (1,2 – 1,8)
< 1 : albumine et globulines
>2 : globulines Comment interpréter un profil électrophorétique? Comment interpréter un profil électrophorétique?
Bisalbuminémie héréditaire ? Bisalbuminémie Bisalbuminémie Bisalbuminémie Albumine Changer les pratiques:
Estimation de l’albumine: Bonne corrélation entre
l’albuminémie estimée à partir du profil électrophorétique et l’albumine dosée par méthode colorimétrique SAUF en cas de gammapathie monoclonale > 20g/L.
L’électrophorèse ne remplace jamais le dosage quantitatif
de l’albumine (Problème des interférences de plus en plus important avec l’électrophorèse capillaire).
Ig A Lambda Béta-2 globulines Béta-2 globulines (béta2 > béta1) IT inutile IT
Pédiatrie Maladies infectieuses Rhumatologie
Hypogamma-globulines
Déficit immunitaire: Myélome à Physiologique: - Primitif chaines nouveau né - Acquis légères (Chimio, radio, corticoides…) Hypogammaglobulinémie
Nouveau né Corticoides Ig G = 0,4 g/L Ig G = 2,7 g/L Ig A < 0,01 g/L Ig A < 0,01 g/L Ig M = 0,13 g/L Ig M < 0,01 g/L Hypogammaglobulinémie Protidémie basse Protéinurie pathologique Signes cliniques évocateurs
Recherche de chaines légères dans les urines
Myélome à chaines légères
Hypogammaglobulinémie 6 mois après le diagnostic: Présence de chaines légères libres dans le sang Hypergammaglobulinémies Monoclonales/ Polyclonales Oligoclonales Biclonales
Gammapathie biclonale: Ig A Kappa Hypergammaglobulinémies biclonales Pics béta-1 et béta-2
Gammapathie biclonale: Ig A Kappa Hypergammaglobulinémies biclonales Pics béta-2 et gamma Gamma globulines Gammapathie monoclonale:Myélome multiple Plasmocytose médullaire > 10% démontrée sur biopsie Et un ou plusieurs des critères suivants Evidence d’une ou plusieurs atteintes (CRAB): Hypercalcémie > 2,75 mmol/L ou > 0,25 mmol/L par rapport à la limite supérieure anémie normochrome normocytaire IR: Cl <40mL/min ou créat >177 µmol/L, lésions osseuses > 1 biomarqueur de malignité Palsmocytose > 60% Rapport CLL impliquée/CLL non impliquée >100 Lésions osseuses Gamma globulines Gammapathie monoclonale de signification indéterminée (MGUS): 3 critères présents: • Ig monoclonale < 30g/L et CLL urinaires < 0,5 g/24h et stable dans le temps → progression 1% des cas/an • Plasmocytose médullaire < 10% Gamma globulines Myélome multiple indolent Absence de critères de MM et de MGUS • Ig monoclonale > 30g/L OU Plasmocytose médullaire > 10% • MAIS absence d’atteinte organique
Evolution >10% des cas/an
Gamma globulines Gammapathie monoclonale:Myélome multiple Critères de malignité: Kahler, Waldenstrom Ig > 30g/L Plasmocytose médullaire > 10% CRAB: hypercalcémie, anémie, IR, lésions osseuses D’accompagnement Maladies autoimmunes Hépathopathies chroniques Infections chroniques LLC Lymphome Cancers MGUS: intérêt pronostic de l’EPP Identification de certaines interférences Zone Préalbumine Indétectable dans le sérum
Sa présence sur le profil = interférence:
Sulfaméthoxazole (CCLM 2006)
Hyperbilirubinémie (Ann Biol Clin 2010)
Zone Préalbumine Sulfaméthoxazole (Electrophoresis 2004) Zone Préalbumine Bilirubine( Ann Biol Clin 2014) Zone Albumine Hyperlipoprotéinémie Zone Albumine Hyperlipoprotéinémie
Albumine = 11,7 g/L
Cholestérol = 13,7mmol/L Zone Albumine Hyperlipoprotéinémie
LDL-C = 10,00 mmol/L Zone Albumine Hyperlipoprotéinémie
+ Réactif LDL + Anti Apo B
Albumine Bétalactamines (Rev Med Inter 2009)
Avant traitement Pendant le traitement Après traitement
Zone Albumine AFP (Gastroenterol Clin Biol 2010)
Sans Ac anti AFP Avec Ac anti AFP
Zone Albumine Cause? (Ann Biol Clin 2015) Zone alpha-2 globulines Iohexol: Produit radio-opaque (CCLM 2015) Zone Béta-1globulines Ioméprol: produit de contraste iodé
J0 J2 Zone Béta-1 globulines Traitement du plasma par l’éthanol: -Prélèvement précieux/nouveaux- nés - Sang incoagulable/héparine…
Précipitation du fibrinogène à froid
Bande supplémentaire en Béta-1
Zone béta2 globulines Produit de contraste Gamma globulines
Sur Capillarys®:
Profil normal Vs signes cliniques de myélome
(CCLM 2012)
Confirmation sur gel
Traitement du sérum par le 2-mercaptoéthanol Vérification de la présence d’un précipité dans la barrette de dilution Gamma globulines
+ 2-mercaptoéthanol
Vérifier la limpidité du liquide dans la barrette de dilution
Recommandations pratiques Toute bisalbuminémie nécessite un dosage quantitatif de l’albumine: Albumine estimée par électrophorèse ~ albumine dosée → toute la fraction estimée est constituée par l’albumine: Chercher une interférence de la bilirubine, des bétalactamines… Albumine estimée par électrophorèse > albumine dosée → Identifier si possible la protéine qui a migré avec l’albumine: AFP, lipoprotéine, Ig… Recommandations pratiques Tout pic étroit au niveau des globulines oriente vers: Une gammapathie monoclonale (si clinique en faveur)
Interférence de médicaments, produits de contraste,
hémoglobine…
Toute hypogammaglobulinémie inexpliquée
chez un adulte oriente vers un myélome à chaines légères (Recherche dans les urines) Recommandations pratiques Devant Béta-2 > Béta 1 isolée, il faut suspecter une gammapathie monoclonale Une gammapathie plyclonale ou oligoclonale peut cacher un pic monoclonal Ne pas conclure à un myélome à chaine légères avant de tester les anti IgD et IgE La monoclonalité de l’Ig pourrait être basée sur le rapport Kappa/Lambda CONCLUSION Electrophorèse sur gel d’agarose et sur Capillarys® se valent. Rigueur opérationnelle Importance des renseignements cliniques et thérapeutiques Lecture attentive du tracé électrophorétique Interprétation souvent facile Problème des interférences Hôpital Universitaire de Monastir Laboratoire de Biochimie et de Toxicologie DEMANDE D`ELECTROPHORESE DES PROTEINES SERIQUES Nom : ……………….. Prénom : ……………… Age : …… Service : …………….. Matricule : …………. Antécédents pathologiques : • Médicaux : ………………………………..……………………. • Chirurgicaux :…………………………………………………… • Familiaux :………………………..………………….…………. Motif d`hospitalisation : …………………………………….…………. …………………………………………………………………………… Paramètres cliniques : • Syndrome néphrotique : oui non • Cirrhose hépatique : oui non • Gammapathie monoclonale : oui non • Syndrome inflammatoire : oui non • Syndrome tumoral : oui non • Maladies auto-immunes : oui non • Autres données cliniques : ……………………………… Paramètres biologiques : NFS :………….. VS : ……… CRP : …………TP : ……………… Créatininémie : ………… Urée : …………… Calcémie : ……..... ASAT : ........ ALAT : ........ BT : ….… BD : …… GGT : …………. PAL : ……… Lipasémie : ………… Amylasémie : ………….. Autres : ………………………………………………………………… Explorations radiologiques : ………………………………………… ………………..………………….……………………………………… Traitement en cours : • Antibiothérapie : type : ...……… dose : ……… durée : ……. • Immunosuppresseur : oui non • Corticothérapie : oui durée : …….. non • Anticoagulant : oui non • Autres : préciser ………………………………….. Le Médecin Demandeur A cœur veillant, rien d’impossible
![Hyperlipoproteinemie version imprimable [du Dr.Abdi]](https://imgv2-1-f.scribdassets.com/img/document/120951886/149x198/61968994e8/1544358845?v=1)
