Université des Frères Mentouri Constantine 1 TP Chimie 2 1ére année TCM

Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie (2018/2019)

Dosage spectrophotomètrique

Objectifs :
. Connaître la technique de spectrophotométrie.
· Connaître et savoir utiliser la relation entre l’absorbance et la concentration d’une espèce absorbante en
solution (loi de Beer Lambert).
· Déterminer à partir d’une courbe d’étalonnage la concentration d’une solution de Méthyle orange.

I-Principe de fonctionnement du spectrophotomètre

La spectrophotométrie est une méthode analytique quantitative qui consiste à mesurer l'absorbance.

Le spectrophotomètre fait passer une radiation monochromatique (de longueur d'onde λ) à travers une
cuve de longueur L contenant une solution colorée. Il mesure alors l'absorbance A (grandeur liée à la
quantité de lumière absorbée par la solution).

II- La loi de Beer Lambert (A = ε.C.L)

La Loi de Beer-Lambert c’est une loi qui détermine la relation entre l’absorbance et la concentration
d’une espèce absorbante en solution.
L = longueur de la cuve (1 cm en général, avec une précision de 1 %)
• C = concentration de la solution
• ε = Coefficient d'extinction spécifique qui dépend de la longueur d'onde. ε varie également en fonction
des forces intermoléculaires et donc du solvant utilisé.

Le graphique représentant l'absorbance

en fonction de la concentration, appelé
droite (ou courbe) d'étalonnage, permet
de déterminer la concentration d'une
solution à partir de la mesure de
l'absorbance de solutions de
concentrations connues.

Le coefficient de corrélation, "R2", et l’axe "Y" à l’origine de la droite de régression vous permettent de
démontrer l’acceptabilité de la linéarité des données.

1-Préparation des solutions de Méthyle orange

On dispose d’une solution aqueuse de Méthyle orange So de concentration massique Co = 100 mg/L (3

1
10-4 mol/L). On cherche à réaliser par dilution différentes solutions de Méthyle orange de concentrations
Ci à déterminer (cf. tableau ci-dessous).
Compléter les quatre colonnes du tableau.
n° Volume Vi de S0 Volume Volume Concentration Ci de Absorbance A
solutio introduit d’eau total la solution diluée de (sans unité)
n (mL) ajouté (mL) (mL) Méthyle orange (mg/L ou mol/L)
1 2,5
2 5
3 7,5
4 10
5 12,5
6 15

_ Rincer une burette avec la solution S o de Méthyle orange. Puis

la remplir avec cette même solution.
_ Compléter par l’eau distillée le volume nécessaire (jusqu’à
50mL).
_ Préparer dans différents fioles les solutions S1 à S6.
_ Verser le volume de solution de Méthyle orange nécessaire
puis le volume d’eau correspondante, mettre un bouchon et
agiter.

2- Mesures
La longueur d'onde de lecture est constante : λ = 465 nm.
Pour une solution de référence (ou "blanc") fixer A = 0 (bouton poussoir rouge « zéro »).
_ Mesurer l’absorbance de chacune des solutions réalisées.
_ Compléter la dernière colonne du tableau.

3-Exploitation des mesures (compte-rendu)

_ Recherche Bibliographique sur : les courbes d’étalonnage ; la loi de Beer Lambert ; l’absorbance ; les
colorants (y compris le méthyle orange).
_ Tracer la courbe A = f(C) (par papier millimétré et par Excel).
_ Commenter l’allure de la courbe.
_ Exploiter l’équation de la courbe (Y = AX (A = ε C L))
avec : Y : l’absorbance ; X : la concentration de Méthyle orange (mg/L ou Mole/L) ; A : la pente)

III- Détermination de la concentration d’une solution inconnue

1-Préparation de la solution de Méthyle orange : Prenez 9 mL, 20 mL à partir de la solution mère du
Méthyle orange (100 mg/L) dans une fiole de 50 mL et complétez avec de l’eau distillée.
2- Mesurer l’absorbance de cette solution à l’aide du spectrophotomètre.
3- déterminez la concentration de cette solution en utilisant la courbe d’étalonnage de Méthyle orange.
O
Les données : Méthyle orange : Sa formule chimique est O
C14H14N3O3SNa (Masse molaire : 327,33 g/mol S N CH3
Na N N
Solubilité : 5,2 g/L (à 20°C) et pKa = 3.4 CH3

Dr. N. BOUANIMBA