INTRODUCCIÓN

Los estreptococos son un género de Bacterias Gram positivas, esféricas pertenecientes al

filo Firmicutes1 y al grupo de las bacterias ácido lácticas. Estas bacterias crecen en cadenas
o pares, donde cada división celular ocurre a lo largo de un eje. De allí que su nombre, del
Griego streptos, significa que se dobla o retuerce con facilidad, como una cadena. En
contraste, los Gram positivos estafilococos, que se dividen usando varios ejes, forman
agrupaciones racimosas de células. Los Streptococci son oxidasa y catalasa negativos.

Las especies de estreptococus que producen enfermedades son:

• Estreptococos del grupo A: Streptococcus pyogenes producen amigdalitis e

impétigo.
• Estreptococos del grupo B: Streptococcus agalactiae producen meningitis en
neonatos y trastornos del embarazo en la mujer.
• Neumococo: Streptococcus pneumoniae es la principal causa de neumonía
adquirida en la comunidad.
• Streptococcus viridans es una causa importante de endocarditis y de abscesos
dentales.
• Streptococcus mutans causa importante de caries dental. Pertenece al grupo de
estreptococos viridans.

Algunas especies de los grupos C y G tienen en su pared la proteína G, que, por su

capacidad de unión a anticuerpos, tiene importantes aplicaciones en biotecnología.

A pesar de las severas enfermedades infecciosas que causan algunas especies de

estreptococo, otras no son patógenas. Los estreptococos forman parte de la flora saprófita
de la boca, piel, intestino y el tracto respiratorio superior de los humanos.

Por regla general, las especies individuales de los estreptococos se clasifican basados en sus
propiedades hemolíticas.

En esta práctica estudiaremos las características morfológicas y fisiológicas de los

Streptococcos; así como también se realizara un estudio de las pruebas que nos permiten
identificarlos.
 OBJETIVOS

 Realizar el aislamiento de microorganismos utilizando técnicas determinadas.

 Identificar las características de las colonias del género.

 Conocer la morfología del género Streptococcus.

 Materiales

-Placas petri con agar sangre

-Agar manito salado

- hisopos y baja lenguas esteriles

-Discos de obtoquina y bacitracina

-Asas bacteriológicas

- mechero

- regla
 PROCEDIMIENTO

1.- Muestra de secreción faríngea

2.- Se sembró en agar sangre , caldo thyoglicolato y en caldo nutritivo.
2.1.- Agar sangre: se incubo usando jarra de brewuer a una atmosfera de 5% de CO2.
2.2.-Caldo thyoglicolato: se incubo a temperatura de 37° e n 18 a 24 horas, y
posteriormente se tomo a muestra y se cultivo en agar sangre para hacer la sensibilidad
colocando discos de optoquina y bacitracina; y también se hizo tinción gran.
2.3.-Caldo nutritivo: se llevo a jarra de brewuer, se incubo a temperatura de 37° e n 18
a 24 horas.
 RESULTADOS

Agar sangre:
Observar el aspecto puntiforme y traslucido de las colonias y la acción sobre el medio
que puede variar desde hemólisis completa (beta) y meta hemólisis (alfa) hasta ausencia
de acción (gamma). (Comparar estas características con las del Sthaphylococcus, que
tiene colonias opacas y grandes).

Caldo Thioglicolato:
Casitone ......................... 15 grs
Exracto de levadura ..............5 grs
Dextrosa ......................... 5.5 grs
Cloruro de sodio.................. 2.5 grs
l-Cystina ........................ 0.5 grs
Thioglicolato de sodio ..........0.5 grs
Agar ............................. 0.75 grs
Rezazurin......................... 0.001 grs
Agua destilada ................... 1,000 ml
Este medio se reparte en tubos a razón de 10 ml por cada uno. Con frecuencia el
Streptococcus es anaerobio o microaerofilo y desarrolla bien en este medio aunque el
cultivo sea negativo, sea aerobiosis (agar sangre). El germen desarrolla en grumos
pequeños sin producir turbidez.
Cuando se trata de muestras muy contaminadas de las cuales se desea aislar
preferencialmente el Streptococcus, adicionar el agar sangre de sodio a la concentración de
0.2 grs. Por mililitro. Esta adición da al medio una propiedad selectiva.

Cocos esféricos y ovoides Gram+

Forman cadenas
Son inmóviles y no esporulados
Colonias pequeñas
La mayoría son B-hemolisis(S.
pyogenes )
Metabolismo fermentativo
Catalasa negativos , oxidadas
negativos

CONCLUSIONES
 Los Streptococcus en la observación microscópica son cocos Gram (+), proliferan en
pares o cadenas, son esféricos u ovales de 2 um de diámetro aproximadamente.

 Culturalmente crece en medio sólido como colonias discordes, mucoides, pequeñas,

puntiformes, con existencia de hemólisis en el agar sangre, traslucidas,
transparentes, como gotitas de agua. En el agar manitol su crecimiento es escaso o
nulo

 Los estreptococos se subdividen en grupos mediante anticuerpos que reconocen a

los antígenos de superficie. Estos grupos incluyen una o más especies. Las
agrupaciones de estreptococos más importantes son A, B, y D. Entre los grupos de
estreptococos, la enfermedad contagiosa es causada por el grupo A, el
Streptococcus pneumoniae, Streptococcus mutans y otros estreptococos llamados
viridans no pertenecen a grupos antigénicos.

BIBLIOGRAFÍA
 Microbiologia Medica de MURRAY, ROSENTHAL y PFALLER ,
Streptococcus, 6ta Edicion, GEA CONSULTORIA EDITORIAL,
S.L.L.,Madrid, España.

 Microbiología médica de Jawetz, Melnick y Adelberg . Geo F Brooks, Janet

S Butel y L Nicholas Ornston. 19ª Ed Manual Moderno. Colombia.2004
McGraw- Hill.

 http://es.scribd.com/doc/18666906/10-Streptococcus

 http://qfbmicro.blogspot.com/2008/05/practica-3-streptococcus.html
 FUNDAMENTO CIENTIFICO
Género Streptococcus. Procedimientos de laboratorio
Como ya mencionamos para el género Staphylococcus la identificación comienza
con el estudio de la morfología macroscópica y microscópica a partir de un cultivo
puro. En cuanto a los requerimientos nutricionales el género Streptococcus es
exigente y por lo tanto debe ser cultivado en medios ricos que le aporten los
nutrientes necesarios, por ejemplo agar sangre ovina al 5%.
Dentro de las pruebas bioquímicas para la identificación, la primera, luego de
determinar que se trata de cocos Gram positivos, es la prueba de la catalasa. Ver
capítulo 16, Género Staphylococcus.
Luego de determinar que se trata de cocos Gram positivos, catalasa negativos,
debemos observar el efecto que producen las colonias de la cepa en estudio sobre
placas de agar sangre ovina al 5% (tipo de hemólisis). Así podemos clasificar este
grupo de gérmenes en:
• beta-hemolíticos: son aquellos que producen una hemólisis total de los glóbulos
rojos, observándose como un halo transparente alrededor de las colonias.
• alfa-hemolíticos: son aquellos que producen hemólisis parcial, la cual se observa
comoun halo con tonalidad verdosa alrededor de las colonias.
• gamma-hemolíticos: son aquellos que no producen hemólisis sobre el agar
sangre.

ESTREPTOCOCOS BETA HEMOLITICOS

Los grupos más importantes son aquellos que se mencionan en la tabla 2, junto a
las pruebas bioquímicas que se utilizan para su identificación presuntiva.

Sensibilidad a la bacitracina

Fundamento: el 99% de las cepas de Streptococcus pyogenes son sensible a

bajas concentraciones de bacitracina (discos con 0,04 U). Un 5% de las cepas de
Streptococcus agalactiae son sensibles a la bacitracina.
Procedimiento: se realiza sembrando 3-4 colonias, tomadas con asa bacteriológica
de un cultivo puro, que se estrían sobre una placa de agar sangre en varias
direcciones intentando obtener un cultivo confluente. Luego se coloca el disco de
bacitracina y se incuba 18-24 horas a 35-37ºC.
Interpretación de los resultados: la aparición de cualquier halo de inhibición del
crecimiento alrededor del disco se considera una prueba positiva (no importa el
diámetro del halo).

Hidrolisis del PYR

Objetivo: separar Streptococcus pyogenes y Enterococcus de los demás

estreptococos. S. pyogenes
y Enterococcus poseen la capacidad de hidrolizar el substrato PYR (pirridonil ß-
naftilamida)
debido a que poseen la enzima l-piroglutamil aminopeptidasa. Existen varias
configuraciones
comerciales de este test por eso no detallaremos ninguna en particular. En general
siempre se
revelan por un cambio de color. Este test es más específico y menos laborioso que
realizar el
test de sensibilidad a la bacitracina, la bilis esculina y caldo salado (se verán más
adelante).

Prueba de CAMP

Objetivo: separar Streptococcus agalactiae de los demás estreptococos ß-

hemolíticos.
Fundamento: los estreptococos del grupo B producen una proteína extracelular
difusible llamada “factor CAMP” (iniciales de los autores que lo describieron) que
actúa sinérgicamente
con la ß-lisina de S. aureus, potenciando la lisis de los eritrocitos.
Procedimiento: se realiza estriando un cultivo del estreptococo ß-hemolítico en
estudio en forma perpendicular a una estría de un estafilococo productor de ß-
lisina, en placas de agar sangre. Se incuban 18-24 horas a 37ºC.
Interpretación de los resultados: la prueba positiva se evidencia por la presencia
de una zona de potenciación de la hemólisis en forma de punta de flecha en el
lugar donde se contactan las dos estrías.

ESTREPTOCOCOS ALFA Y GAMMA HEMOLITICOS

Dentro de este grupo se incluyen Streptococcus penumoniae, Streptococcus del

grupo viridans y Enterococcus (algunas cepas pueden presentar beta-hemólisis).
Describiremos los ensayos bioquímicos utilizados para su identificación.

Sensibilidad a la optoquina
Objetivo: diferenciar S. pneumoniae de otros estreptococos β-hemolíticos.
Fundamento: se basa en la sensibilidad de S. pneumoniae a una concentración
menor o igual a 5 μg/ml de hidroxicuprina (optoquina).

Muchos Streptococcus aislados de infecciones humanas poseen antígenos

específicos de naturaleza
polisacárida (polisacárido C o ácidos teicoicos) que se encuentran en la pared
celular.
La extracción del polisacárido C por diferentes técnicas y su posterior
enfrentamiento con antisueros específicos definen una serie de grupos que se
denominan con letras mayúsculas a partir de la A. La utilidad de la extracción
antigénica dependerá del tipo de hemólisis. En los estreptococos ß-hemolíticos se
ha confirmado como el mejor método para su clasificación.
En los no ß-hemolíticos, la extracción antigénica sólo es útil para la identificación
de los grupos D y B.
Existen diferentes métodos para la extracción enzimática que no detallaremos.
Actualmente se utilizan métodos de extracción rápida por medio de enzimas de
extracción.
Luego se procede a la identificación del polisacárido por medio de técnicas de
aglutinación con partículas de látex que tienen absorbido el antisuero específico.

ESPECIES DE STREPTOCOCCUS
Streptococcus pyogenes.
La especie más importante de los estreptococos del grupo A es S. pyogenes
originan diversas enfermedades supurativas y no supurativas. Aunque este
microorganismo constituye la causa más frecuente de faringitis bacteriana, la fama
de estos microorganismos se debe a las llamativas enfermedades potencialmente
mortales provocadas por bacterias necrosantes, como evidencia las publicaciones
que han inundado tanto la literatura científica como la prensa sensacionalista.
Fisiología y Estructura.- Las cepas de S. pyogenes son cocos esféricos de
diámetro comprendido entre 1 y 2 μm que forman cadenas cortas en las muestras
clínicas y cadenas de mayor longitud cuando crecen en medios de cultivos. Su
crecimiento es óptimo en el medio agar sangre enriquecido, pero se inhibe cuando
contiene una concentración elevada de glucosa. Después de 24 horas de
incubación se observan colonias blancas de 1 a 2 mm con grandes zonas de β-
hemólisis.
Se ha estudiado detalladamente la estructura antígenica de S. pyogenes. El marco
estructural básico de la pared celular, es la capa de peptidoglucano, la cual tiene
una composición parecida a la de otras bacterias grampositivas. En el interior de la
pared celular se encuentran los antígenos específicos de grupo y de tipo.
Hidratos de carbono específicos de grupo.- El hidrato de carbono específico de
grupo, el cual constituye aproximadamente el 10% del peso seco de la célula
(antígeno del grupo A), es un dímero de N-acetilglucosamina y de ramosa. Este
antígeno se usa para clasificar a los streptococcos del grupo A y distinguirlos de
otros grupos de estreptococos.
Proteínas específicas de tipo.- La proteína M es la principal específica de tipo que
se asocia a los streptococos virulentos. Se compone de dos cadenas polipetídicas
que forman una hélice alfa. La proteína se ancla a la membrana citoplásmica, se
extiende a través de la pared celular y sobresale por encima de la superficie
celular. El extremo carboxilo está anclado en la membrana citoplásmica y la
porción de la molécula incluida en la pared celular, origina la variedad antigénica
observada entre los más de cien serotipos de proteína M. Las proteínas M se
subdividen en moléculas de clase I y de clase II. Las proteínas de clase I
comparten los antígenos expuestos, mientras que las proteínas M de clase II
carecen de antígenos expuestos comunes. A pesar de que las cepas portadoras
de ambas clases de antígenos pueden provocar infecciones supurativas y
glomerulonefritis, tan sólo las bacterias que contienen proteínas M de clase I
producen fiebre reumática.
Una proteína secundaria específica de tipo que constituye un marcador
epidemiológico útil en las cepas bacterianas que no expresan la proteína M es la
proteína T (resistente a la tripsina). Se ignora cuál es la función estructural de esta
proteína. Aunque la clasificación epidemiológica de S. pyogenes se ha basado
tradicionalmente en la identificación de los tipos específicos M o T mediante la
aglutinación con anticuerpos específicos frente M o T, es posible que este
procedimiento se sustituya por la secuenciación del gen emm que codifica la
proteína M.
Otros componentes de la superficie celular.- Otros componentes importantes de la
pared deS.pyogenes son las proteínas tipo M, el ácido teicoico y la proteína F. Las
proteínas de tipo M están codificadas por un complejo de más de 20 genes que
componen la superfamilia de genes emm. Estos genes codifican las proteínas M,
las proteínas de tipo M y otras proteínas que se unen a las inmunoglobulinas (Ig).
El ácido teicoico y la proteína F facilitan la unión a las células del organismo
anfitrión, al formar un complejo con la fibronectina que se encuentra presente en la
superficie de las células del organismo anfitrión.
Cápsula.- Algunas cepas de S. pyogenes forman una cápsula externa de ácido
hialurónico que contiene moléculas repetidas de ácido glucurónico y N-
acetilglucosamina. La cápsula no se diferencia a nivel antigénico del ácido
hialurónico presente en los tejidos conjuntivos de mamífero, de modo que permite
evitar la fagocitosis bacteriana. Es probable que las cepas encapsuladas de esta
especie originen infecciones sistemáticas graves.
Patogenia e inmunidad.- La virulencia de los estreptococos del grupo A está
determinada por la capacidad de las bacterias de adherirse a la superficie de las
células del organismo anfitrión, invadir las células epiteliales, evitar la
opsonización y la fagocitosis y producir una variedad de toxinas y de enzimas. Se
ha demostrado que en la adherencia a las células del organismo anfitrión, median
más de 10 antígenos bacterianos distintos, siendo los más importantes el ácido
teicoico, las proteínas M y la proteína F. La adherencia inicial es una interacción
débil entre el ácido teicoico y los sitios de unión de los ácidos grasos en la
fibronectina y las células epiteliales. La adherencia posterior implica a la proteína
M, la proteína F y otras adhesinas que interaccionan con los receptores
específicos de las células del organismo anfitrión.
S. pyogenes puede invadir las células epiteliales, un proceso mediado por la
proteína M y la proteína F, así como por
otros antígenos bacterianos. Se considera que esta internalización es importante
tanto para el mantenimiento de las infecciones persistentes (por ejemplo: la
faringitis estreptococica recurrente) como para la invasión de los tejidos profundos.
S. pyogenes dispone además, de otros mecanismos para evitar la opsonización y
la fagocitosis. La región
conservada de la proteína M se puede unir a una betaglobulina sérica, el factor H,
la cual constituye una proteína reguladora de la ruta alternativa del complemento.
El componente C3b del complemento, un importante mediador de la fagocitosis,
se ve desestabilizado por el factor H. Por ello, cuando C3b se une a la superficie
celular en la región de la proteína M es degradado por el factor H, con lo que se
evita la fagocitosis. El efecto sólo se ve superado cuando el paciente produce
anticuerpos opsónicos específicos de tipo frente a la proteína M específica. La
unión de fibrinógeno a la superficie de la proteína M inhibe también la activación
del complemento por la ruta alternativa y reduce la cantidad de C3b unido. Las
proteínas M interfieren en el proceso de fagocitosis. Por último, todas las cepas
deS.
pyogenes son capaces de producir una peptidasa de C5a, una serina proteasa
que inactiva este componente. C5a es
una molécula quimioatrayente de neutrófilos y fagocitos mononucleares; de este
modo se inhibe la formación de
abscesos hasta que el paciente logra neutralizar la peptidasa por medio de
anticuerpos específicos.
Además, diversas enzimas y toxinas pueden intervenir en la patología observada
por S. pyogenes.
TIPOS DE HALOS DE INHIBICIÓN (EN DISCOS CON ANTIBIÓTICO)
Cuando el disco impregnado con el antibiotico toma contacto con la superficie
humeda del agar, el agua se absorbe en el papel filtro y el antibiotico se difunde en
el medio que lo rodea .La velocidad de extracción del antibiotico fuera del disco es
mayor que su difusión modo que la concentración inmediatamente adyacente al
disco puede exceder a la del disco mismo. No obstante a medida que aumenta la
distancia , hay una reduccion logaritmica de la concentración del antibiotico
.Cuando se alcanza una masa celular critica de bacterias, se sobrepása la
actividad inhibitoria y aparece el crecimiento bacteriano .La concentración del
antibiotico que se difundio en esta interfase de crecimiento y las bacterias
inhibidas se conoce como concentración critica y se aproxima a la CIM obtenida
en las pruebas .Esto coincide con el desarrollo de una prueba practicable de
difucion de discos ,se ha intentado simplificar la prueba . En la placa se presenta
el disco de antibiotico en un antibiograma en el que no se produce crecimiento
bacteriano en una placa de agar inoculada con el gérmen. Es una medida de la
potencia del antibiotico frente al gérmen. Los diferentes tipos de inhibición son los
siguientes:
1 . Pruebas de sensibilidad antimicrobiana por difusión en disco.
2. Pruebas de concentración mínima inhibitoria (MIC) en caldo. Esta prueba
cuantitativa es muy útil para microorganismos anaerobios, para determinar la
actividad bactericida o evidenciar el sinergismo o antagonismo entre agentes
antimicrobianos.
3. Pruebas para producción de beta-lactamasa. Los procedimientos comúnmente
utilizados para determinar la
producción de beta-lactamasas en laboratorios clínicos incluyen el método
cromogénico de
cefalosporina, el acidimétrico y el iodométrico. Todas estas pruebas están
basadas en la detección de
los productos finales de la hidrólisis de beta-lactamasas por colorimetría.
4. Pruebas para la detectar la resistencia a oxacilina (metacilina)
enStaphylococcus. Esta prueba es importante considerando que algunas cepas
deStaphylococcus pueden dar falsos negativos para metacilina en pruebas de
difusión debido a la rápida inactivación de este medicamento en refrigeración.
Se utiliza una oxacilina más estable que permite detectar además de las oxacilina
resistentes, la mayoría de las
cepas metacilina resistentes.
5. Pruebas de sensibilidad por microdilución en caldo para bacterias anaerobias.
Para anaerobios se recomienda utilizar dilución en agar, microdilución en caldo y
macrodilución en caldo. Se deben utilizar medios suplementados que favorezcan
el crecimiento de anaerobios, en particular la microdilución en caldo es útil para
microorganismos comoClostridium.
 CUESTIONARIO

1.-Mencione 2 pruebas útiles para identificar Streptococos beta hemolíticos

del grupo A?
Tenemos entre las más empleadas:
• Aglutinación de partículas de látex: poco usado.
• Enzimoinmunoanálisis (ELISA) e Inmunocromatografía (IC): ofrecen una
buena especificidad (92,8-100%) y una sensibilidad que llega a ser de un
96%.Se puede disponer del resultado en menos de 20 minutos.

2.- Explique 1 prueba que permita la diferenciación de S.pneumoniae de otro

estreptococos alfa hemolíticos?

En este caso se usa el disco de optoquina para diferenciar entre S. pneumoniae

(sensibles) y otras especies de estreptococos a hemolíticos (resistentes). La
sensibilidad a la optoquina es una medida de la fragilidad de la membrana celular
bacteriana. La optoquina, que es el clorhidrato de etilhidrocupreína, se utiliza en
una dilución acuosa de 1 / 4000 para impregnar los discos, quedando en éstos 5
µg de la droga.
Método: se toma una suspensión de colonias puras en caldo Mueller Hinton o
tioglicolato y con un hisopo se estría una placa de agar sangre de carnero al 5 %.
Sobre la estría se coloca el disco de optoquina. Se incuba con atmósfera de CO2
al 5 % ( jarra de Brewer ), durante 24 hs. a 37° C.
Interpretación: Sensible, cuando hay inhibición alrededor del disco. Se
considera como punto de corte 16 mm. (discos de 10 mm) o 14 mm (discos de 6
mm). Resistente, cuando el crecimiento no es inhibido alrededor del disco. Los
casos de halos intermedios deben resolverse por acumulación de pruebas a favor
o en contra.
3.-Que pruebas se emplean para diferenciar S.Aureus de S. Epidermidis?
Se realizan las siguientes:
• Prueba de la coagulasa
• Prueba de la novobiocina.

4.-¿Cuándo y por qué debemos tratar los faringoamigadalitis aguda?

La recomendación de tratar todas las Faringoamigdalitis agudas consideradas

como bacterianas se dirige no tan solo a acortar la duración de la enfermedad,
sino a corregir diversos hechos susceptibles de ocurrir:

• Como las complicaciones de vecindad como otitis media, abscesos

periamigdalianos, sinusitis.
• La recurrencia de la faringoamigdalitis aguda a corto plazo, pues cuando no se
erradica el germen causante es factible una recaída sin la necesidad de un
nuevo contagio.
• Las complicaciones a distancia, como la enfermedad reumática.
• La evolución hacia la faringoamigdalitis crónica porque cada episodio agudo
no tratado deja cicatrices y microabscesos que constituyen este cuadro.
• Acortar el período contagiante que va desde la etapa aguda hasta dos o tres
semanas. Cuando es tratado se traduce a dos o tres días después de iniciado
el tratamiento con antibióticos.

5.- ¿Qué importancia tiene para la clínica el conocimiento de la flora

bacteriana de la faringe y amígdalas, sobre todo en los casos de portadores
sanos?

Es importante porque en lo portadores sanos las bacterias q pertenecen a la flora

normal de la faringe y amígdalas no les va a producir nada puesto q su sistema
inmune esta indemne y si estas bacterias fuesen a parar a un portador
inmunosuprimido estas misma podrían ocasionar problemas.