Plasticité cellulaire

et progression tumorale

TEM
TME

Académie Nationale de Médecine A. Puisieux

2 Février 2011 Centre de Recherche en Cancérologie de Lyon
 Cancérogenèse: un processus “multi-étapes”

Epithélium normal

Tumeur métastatique
 Cancérogenèse: un processus “multi-étapes”

Anomalie Anomalie
génétique ou génétique ou
épigénétique épigénétique

Epithélium normal Hyperplasie

Tumeur métastatique
 Cancérogenèse: un processus “multi-étapes”

Anomalie Anomalie Anomalie

génétique ou génétique ou génétique ou
épigénétique épigénétique épigénétique

Epithélium normal Hyperplasie Dysplasie

Tumeur métastatique
 Cancérogenèse: un processus “multi-étapes”

Anomalie Anomalie Anomalie

génétique ou génétique ou génétique ou
épigénétique épigénétique épigénétique

Epithélium normal Hyperplasie Dysplasie

Anomalie
génétique ou
épigénétique

Tumeur métastatique Carcinome in situ

 Cancérogenèse: un processus “multi-étapes”

Anomalie Anomalie Anomalie

génétique ou génétique ou génétique ou
épigénétique épigénétique épigénétique

Epithélium normal Hyperplasie Dysplasie

Anomalie
Anomalie Anomalie génétique ou
génétique ou génétique ou épigénétique
épigénétique épigénétique

Tumeur métastatique Tumeur invasive Carcinome in situ

 Cancérogenèse: un processus “multi-étapes”

Anomalie Anomalie Anomalie

génétique ou génétique ou génétique ou
épigénétique épigénétique épigénétique

Epithélium normal Hyperplasie Dysplasie

Anomalie
Anomalies Anomalie Anomalie génétique ou
génétiques ou génétique ou génétique ou épigénétique
épigénétiques épigénétique épigénétique

Tumeur métastatique Tumeur invasive Carcinome in situ

 Cancérogenèse: un processus “multi-étapes”

APC/b-caténine K-Ras/B-Raf PIK3C1/PTEN

Epithélium normal

p53/Rb

? Smad4/TGF-bRII Bax

Tumeur métastatique Tumeur invasive

Cancer colo-rectal
 Cancérogenèse: un processus “multi-étapes”

Cellules normales + hTert + H-Ras - p53

Indépendance vis-à-vis
des facteurs de - Rb
croissance

Insensibilité aux
Echappement
signaux anti- - PP2A
à l’apoptose prolifératifs

Cellules transformées

Activation de Migration, Invasion

l’angiogenèse et Métastase Génération
de colonies en
Potentiel milieu semi-solide
réplicatif illimité
 Cancérogenèse: les principales étapes

Activité mitogénique
aberrante

Tissu normal Hyperplasie Dysplasie

Tumeur métastatique Tumeur invasive Carcinome in situ

 Activation des voies de signalisation mitogénique

RTK: Récepteurs Tyrosine Kinase: ErbB2, EGF-R, c-Kit…

 Cancérogenèse: les principales étapes

Activité mitogénique
aberrante

Tissu normal Hyperplasie Dysplasie

Inhibition de
mécanismes
de
sauvegarde

Tumeur métastatique Tumeur invasive Carcinome in situ

 Sénescence et apoptose: des systèmes de sauvegarde

Activité mitogénique
aberrante

Cellules normales Systèmes de sauvegarde p53

Rb
Myc ErbB2, Ras, Raf

ARF p16Ink4A
ATM Cellules sénescentes
N Cycline D
AD -
MDM2 ns Cdk4/6
io
at
p21WAF1
Cellules apoptotiques
r Cycline E
té -
Al Cdk2
p.
Ré

p53 Rb

Lésions bénignes
Apoptose Sénescence
 Activation de la sénescence et de l’apoptose dans les lésions bénignes

Lésions broncho-pulmonaires Lésions cutanées

Naevus Adénome

(m B-Raf)

Ki67 Prolifération Ki-67

Mélanome Carcinome

Effecteur
de l’apoptose p16Ink4a
p53
Effecteur
de la sénescence

Apoptose
SA-b-Gal
TUNEL
Sénescence

(Gorgoulis et al., Nature 2005) (Michaloglou et al., Nature, 2005)

 Sénescence et apoptose: des systèmes de sauvegarde

Activité mitogénique
aberrante

Systèmes de sauvegarde p53

Rb

Inhibition des systèmes de sauvegarde

Tumeur maligne
Tumeurs bénigne
 Sénescence et apoptose: des systèmes de sauvegarde

Activité mitogénique
aberrante

- Fréquence des mutations du gène p53 dans les p53

cancers humains Rb

- In vitro, coopération entre l’activation de Ras

ou Myc avec l’inhibition de p53

Inhibition des systèmes de sauvegarde

Tumeur maligne
Tumeurs bénigne
 Cancérogenèse: les principales étapes

Activité mitogénique
aberrante

Tissu normal Hyperplasie Dysplasie

Inhibition de
Acquisition de capacités mécanismes
de motilité et d’invasion de
sauvegarde

? ?

Tumeur métastatique Tumeur invasive Carcinome in situ

 Cancérogenèse: une histoire d’oncogènes,
de gènes suppresseurs de tumeur et de “gènes de métastase”?

Les propriétés permettant l’invasion et la

dissémination métastatique sont acquises au
cours des phases avancées de la progression
tumorale, par un nombre limité de cellules
cancéreuses.
 Cancérogenèse: une histoire d’oncogènes,
de gènes suppresseurs de tumeur et de “gènes de métastase”?

Les propriétés permettant l’invasion et la

dissémination métastatique sont acquises au
cours des phases avancées de la progression
tumorale, par un nombre limité de cellules
cancéreuses.

POURTANT:

- Séquençage et études d’expression: - Prédiction possible du risque métastatique par

pas de différences significatives entre étude du transcriptome de la tumeur primaire
Tumeur primaire vs Métastase
(Jones et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 2008) (van de Vijver er al., N. Engl. J. Med, 2002; Fan et al., N. Engl. J. Med, 2006)

. Au sein d’une tumeur capable de métastaser, la

majorité des cellules cancéreuses exprime des
facteurs qui favorisent la dissémination
. La capacité d’une tumeur à métastaser serait
déterminée de façon précoce
Identification de facteurs susceptibles de favoriser la dissémination métastatique

n Twist1

Neuroblastomes 172 27%

Carcinome canalaire in situ Nevus
Sein 84 50% Twist1 Ac Twist1 Ac
Mélanomes 20 80%

Tumeurs Colon 9 78%

(n=330)
Poumon 7 14%

Rein 13 53%

ESCC 15 47%

CLL 10 0%

Carcinome canalaire invasif Mélanome

Twist1 Ac Twist1 Ac
(RT-PCR quantitative; Tumeur/Normal >2)
 Twist1, un régulateur clef de l’embryogenèse

. Twist 1: Facteur de transcription de type bHLH

Très conservé au cours de l’évolution

Domaine bHLH
. KO de Twist est létal chez la drosophile et la souris

Drosophila embryos
Twist -/- Twist +/+

Formation du mésoderme Migration des cellules

de la crête neurale

« Twisted » embryos

TEM

Transition épithélio-mésenchymateuse
 Transition épithélio-mésenchymateuse : TEM

Signaux du TGF-b EGF, PDGF, IGF, hGF TNFa

micro-environnement

TGFb-R RTKs

Par6 Smads Ras PI3K Src NFkB

Vimentine
Pôle apical
E-Cadherine
Snai1/2; Twist1; Zeb1/2
N-Cadhérine
apico-basale

TEM
yPolarité

Cytokératine

Pôle basal
Intégrines Intégrines
Membrane basale
TME
MMPs

Matrice extra-cellulaire

- Perte de la polarité cellulaire

Cellules épitheliales - Pertes des jonctions serrées et adhérentes Cellules mésenchymateuses

- Remodelage du cytosquelette
- Gain de marqueurs mésenchymateux
- Promotion de la motilité cellulaire

TEM
TME
 Rôle de la transition épithélio-mésenchymateuse au cours de l’embryogenèse

TEM essentielle au cours de l’embryogenèse pour:

- la formation du mésoderme au cours de la gastrulation

- la migration des cellules de la crête neurale

- la différenciation de multiples tissus et organes. A l’exception des dérivés de

l’ectoderme (SNC et épiderme), tous les tissus sont des produits de cycles de TEM - TME.

Réactivation aberrante de la TEM dans maladies fibrotiques et cancers

L’inhibition de Twist1 provoque l’apoptose ou la sénescence des cellules cancéreuses

Lignées cancéreuses humaines

(n=91) WAC (neuroblastome) T47D (cancer du sein) RPMI 7951 (mélanome)
wtp53; N-Myc ampl. mp53; ErbB2 4 copies mp53; mB-RAF
Twist1 mRNA

n Twist1

Contrôles
Neuroblastomes 27 65%
Contrôles

Sein 21 43%

Mélanomes 15 100%

Inactivation de
Poumon 50%

Twist1 (shRNA)
10

Rein 8 0%
Inactivation
de Twist1
HCC 10 40%
(shARN)

Test de
SA-bgalactosidase

Apoptose Sénescence Sénescence

(Valsesia-Wittmann et al., Cancer Cell 2004) (Ansieau et al., Cancer Cell 2008)
 Inhibition des systèmes de sauvegarde par Twist1

Neuroblastomes Cellules normales Cancers du sein, Mélanomes

Myc Ras, Raf, ErbB2

ARF p16Ink4A
ATM

Twist1 Cycline D
-
Twist1
HDM2 Cdk4/6
p21WAF1 Cycline E
-
Cdk2

p53 Rb

(Valsesia-Wittmann et al., Cancer Cell 2004) (Ansieau et al., Cancer Cell 2008)

Apoptose Sénescence
 Rôle oncogénique de Twist1 dans les cancers du sein

Carcinome canalaire invasif

Surexpression de Twist1
50% des cas (n=84)

HMECs: Cellules humaines épithéliales mammaires normales

Contrôle Twist1 ErbB2 ErbB2 + Twist1 72h

Prolifération X Prolifération X Sénescence Prolifération XXX

Arrêt définitif
de prolifération
(Ansieau et al., Cancer Cell, 2008)
 L’échappement à la sénescence par Twist1 est associé à une TEM

HMECs + hTert
Contrôle Twist1 ErbB2 + Twist1 7 jours

E-Cadhérine
Phalloïdine
Hoechst

Vimentine
Phalloïdine
Hoechst

(Ansieau et al., Cancer Cell, 2008)

 La TEM facilite la transformation cellulaire

HMECs + hTert
Contrôle Twist1 ErbB2 + Twist1

Transformation
Croissance en
milieu semi-solide

hTert H-RasV12 Inhibition Inhibition Activation

+ (ou Erbb2) + de Rb + de p53 + de PP2a

Evénements Immortalisation Activation

mitogénique
Inhibition des systèmes
de sauvegarde
nécessaires à la
transformation
maligne
hTert H-RasV12
+ (ou Erbb2) + Twist1

Immortalisation Activation
mitogénique
 La TEM permet le gain de propriétés d’auto-renouvellement et d’invasion

HMECs + hTert
Contrôle Twist1 ErbB2 + Twist1

Auto-renouvellement
Formation de
mammosphères

Invasion
Culture en
Matrigel

(Ansieau et al., Cancer Cell, 2008; Morel et al., Plos One, 2008)
Twist1 favorise la dissémination métastatique dans les tumeurs mammaires

Lignées cancéreuses mammaires murines

Les cellules cancéreuses

capables de métastaser
surexpriment Twist1

L’inactivation de
Twist1 prévient la
formation de
métastases
pulmonaires

(Yang et al., Cell, 2004)

 Twist1: un oncogène et un gène de métastase

Epithélium normal Hyperplasie Dysplasie

Twist1

Tumeur métastatique Tumeur invasive Carcinome in situ

Twist1: un oncogène et un gène de métastase

Twist1

?
 Coopération oncogénique in vivo entre K-RasG12D et Twist1

WAP-Cre X Ki-LSL-KRasG12D  Souris transgéniques conditionnelles K-RasG12D

WAP-Cre X Rosa-LSL-hTwist1  Souris transgéniques conditionnelles Twist1

Développement normal de la glande mammaire

Pas de développement de cancers (à l’â ge de 8 mois)

(Morel et al., soumis à publication)

 Coopération oncogénique in vivo entre K-RasG12D et Twist1

WAP-Cre X Ki-LSL-KRasG12D  Souris transgéniques conditionnelles K-RasG12D

X
WAP-Cre X Rosa-LSL-hTwist1  Souris transgéniques conditionnelles Twist1

Souris transgéniques WAP-Cre;Kras;Twist1

Survie sans tumeur

K-RasG12D

Twist1 + K-RasG12D

Twist1 + K-RasG12D Temps (jours)

wt Twist1 K-RasG12D Twist1 + K-RasG12D

Carcinomes métaplasiques
 Rôles oncogéniques de Twist1 au cours de la progression tumorale

Signalisation
Tissu normal mitogénique Lésion bénigne
aberrante p53
Rb

p53
Twist1
Rb

Carcinome canalaire in situ Tumeur maligne

 Rôles oncogéniques de Twist1 au cours de la progression tumorale

Signalisation
Tissu normal mitogénique Lésion bénigne
aberrante p53
Rb

p53
Twist1
Rb

EMT
Carcinome canalaire invasif

Signaux du
menvironnement
Tumeur maligne
Motilité cellulaire
Auto-renouvellement

(Ansieau et al., Cell Cycle, 2009; Ansieau and Puisieux, Oncogene, 2010)