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Genética:
1.1-Definición:
Cada ser humano está formado por trillones de células. En cada una de ellas células existen 46
cromosomas: 44 cromosomas autosómicos y 2 cromosomas sexuales (XX en las mujeres y
XY en los varones. Los 46 cromosomas corresponden a 23 aportados por el espermatozoide y
23 aportados por el óvulo, de modo que al ocurrir la fecundación se constituyen los 46
cromosomas del cigoto y de todas las células derivadas del cigoto inicial.
En los cromosomas residen los genes, que corresponden a las unidades de la herencia. La
información genética se encuentra codificada en pequeños trozos de la molécula de ADN. Los
genes poseen una secuencia específica con una función particular. Generalmente, esta
secuencia génica específica determina una función específica, como por ejemplo, la formación
de una proteína que cumple un rol específico en las complejas vías metabólicas que presentan
las diferentes células de nuestro organismo.
Cada cromosoma está formado por una molécula de ADN, por ello, en cada uno de estos
cromosomas existen miles de genes. Dado que existen dos versiones para cada cromosoma
autosómico específico (un set es aportado por el óvulo materno y el otro por el espermio
paterno), también existen dos versiones (diploidía) para cada uno de los genes autosómicos.
En el caso de los cromosomas sexuales, los genes del cromosoma X, a pesar de que la mujer
posee dos copias de cada uno de los genes presentes en el cromosoma X (genes ligados al X),
en la mayoría de los casos sólo se expresa uno de ellos. Por lo tanto mujeres y hombres
expresan una sola versión de sus genes ligados al X. Los genes del cromosoma Y, entre ellos,
los genes involucrados en la determinación del sexo, sólo se expresan en el hombre. De ahí
que en la especie humana el sexo de los hijos se haya determinado por la presencia del
cromosoma Y en el cigoto.
El ADN (lo mismo que el ARN) es un ácido nucleico, y los ácidos nucleicos se componen de
«bloques constituyentes» llamados nucleótidos. El ADN existe como dos
hebras complementarias en forma de doble hélice (dos espirales entrelazadas). Cada una de
estas hebras está hecha de muchos nucleótidos conectados uno al siguiente para formar una
larga cadena de ADN. La molécula de nucleótido tiene tres partes diferentes: el fosfato y el
azúcar, que forman la columna vertebral o estructura en forma de cinta o hebra en la imagen, y
la base. Hay cuatro tipos diferentes de bases: A, T, C y G (Adenina, Timina, Citosina y
Guanina). Estas bases están enganchadas a las columnas respectivas, cada una enrollada
generándose la conocida forma de doble hélice.
Las bases de una hebra se unen a las bases de la otra hebra, y esto da al ADN su estructura
estable de doble hélice. (Véanse las dos hebras como las dos cintas de unas zapatillas
nórdicas que se enroscan a lo largo de la pierna).
La naturaleza diferente del código del ADN de un organismo depende del orden o secuencia de
las bases a lo largo de la cadena de ADN.
2- Ingeniería genética:
2.1-DEFINICIÓN:
La Ingeniería genética es un método que modifica las características hereditarias de un
organismo en un sentido predeterminado mediante la alteración de su material genético. Sus
métodos son llamados también técnicas de ARN recombinante. Los principales trabajos de esta
técnica son:
Clonación génica
El ADN de cualquier organismo puede ser cortado en fragmentos gracias a las encimas de
restricción. Éstas son endonucleasas presentes en muchas bacterias que tienen la propiedad
de cortar el ADN extraño que penetra en la célula. Lo cortan por sitios específicos denominados
secuencias de reconocimiento, formadas por cuatro u ocho pares de bases que en la
bacteria original están protegidas para evitar la destrucción de su propio ADN.
Estas encimas cortan de modo que queda en cada extremo una hebra monocatenaria por
donde se pueden unir fragmentos de ADN cortados por la misma restrictasa.
Los fragmentos obtenidos se pueden separar por tamaños por electroforesis y así ser
estudiados o manipulados.
2-Por retrotranscriptasas
La obtención de copias de ADN se puede hacer de dos formas: Por clonación o por PCR:
1- Clonación
a) Un vector de clonación:
Se emplean como vectores de clonación pequeños elementos genéticos tales como plásmidos,
sistemas genéticos de virus y cósmidos principalamente.
Para que el vector realice su función es necesario que se una el fragmento de ADN al vestor
correspondiente. Para ello es necesario cortar el vector con la misma restrictasa que la que
hemos utilizado para obtener el fragmento.Ello origina que ambos tengan los mismos extremos
cohesivos y se puedan unir mediante una ADN- ligasa.
Es una técnica que permite duplicar un número ilimitado de veces un fragmento de ADN en un
tubo de ensayo. Mediante esta técnica pueden generarse millones de moléculas idénticas, a
partir de una molécula de ADN. Esto se puede conseguir en unas horas.
Las bases teóricas de la reacción de PCR son simples. En la reacción intervienen tres
segmentos de ADN : el segmento de doble cadena que queremos amplificar, y dos
pequeños fragmentos de cadena sencilla, los oligonucleótidos (primers u oligos), que
tienen la misma secuencia que los extremos flanqueantes del ADN molde. Además, participan
en el reacción el enzima Taq polimerasa (Taq), deoxinucleótidos-trifosfato (dNTPs), sales, y un
tampón.
Los primers se añaden a la reacción en exceso con respecto al ADN que desea amplificarse.
Los primers hibridarán con las regiones complementarias del ADN, quedando orientados con
sus extremos 3´ enfrentados, de modo que la síntesis mediante la ADN polimerasa (que
cataliza el crecimiento de nuevas cadenas 5´® 3´) se extiende a lo largo del segmento de ADN
que queda entre ellas.
En otras palabras, la ADN-polimerasa sólo puede formar una nueva hebra si ésta ya ha sido
formada parcialmente. En la naturaleza, cuando se duplica el propio ADN de una persona, otro
enzima especial llamado ADN-primasa construye el iniciador en las dos hebras antiguas u
originales.
Una vez que la polimerasa está en marcha, repta a lo largo de la hebra de ADN (la plantilla)
añadiendo al iniciador uno a uno los bloques de construcción, es decir, los nucleótidos
complementarios. El iniciador acaba siendo parte (justamente la parte inicial) de la nueva hebra
formada.
En la naturaleza, las polimerasas separan las hebras de ADN al tiempo que van construyendo
la nueva hebra de ADN. Así es como las copias duplicadas de ADN son formadas, de manera
que las células (como las de la sangre o las de la piel) puedan dividirse dando lugar a nuevas
células, proceso éste esencial para la vida.
Este proceso se repite unas 30 ó 40 veces. Durante cada ciclo, se dobla la cantidad de
segmentos, de manera que dos segmentos se vuelven cuatro, esos cuatro segmentos se
vuelven ocho, después dieciséis, etc. Al final del proceso se pueden haber hecho miles de
millones de copias del original. Ahora se tiene una gran acumulación de ADN, cuando al
principio sólo se tenía una pequeñísima cantidad. Por eso se dice de la PCR que es capaz de
«encontrar una aguja en un pajar».
Cada ciclo dura aproximadamente 5 minutos y para conseguir una cantidad útil se requieren al
menos 20 ciclos de reacciones.
Se realiza de forma automática en un aparato como se ve en la fotografía, con lo que se
consigue un clonaje rápido en un sistema libre de células.
Secuenciación
Una de las razones mas comunes para el uso de la PCR es la formación de suficiente cantidad
de ADN molde para su secuenciación. Es mucho mas sencillo y rápido que la clonación en
células.
Estudios evolutivos
Mediante la PCR se pueden amplificar genes de organismos ya extinguidos, como del mamut,
o restos antiguos humanos. Se pueden comparar estos genes con los genes semejantes de
organismos actuales y poder reconstruir árboles filogenéticos.
El PCR también se ha utilizado para conseguir el mapa del genoma humano.
La determinación de las huellas dactilares genéticas constituye una de las aplicaciones más
interesantes de la PCR.
Mediante esta técnica es posible comparar muestras diferentes de ADN para comprobar si
pertenecen al mismo individuo o no, o si existe parentesco entre ellas.
Esta técnica se aplica actualmente en Medicina forense e investigaciones policiales, con el
fin de identificar individuos a partir de muestras biológicas, como sangre, semen, piel o
cabellos. También se utiliza en las pruebas de paternidad.
La localización de los fragmentos de ADN se puede referir, bien a fragmentos que se quieran
copiar y hay que seguirles la pista o bien a un determinado gen o secuencia de nucleótidos del
genoma del organismo.
Los primeros se hacen mediante Selección de las células hospedadoras de los plásmidos o por
selección de las células hospedadoras de los vectores víricos.
Abreviadamente, se trata de con los fragmentos obtenidos, cuanto más pequeños mejor,
recomponer la molécula original, como si se tratase de un puzzle. Así se han ido secuenciando
genes, fragmentos de ADN desde virus hasta el genoma humano.
2.3-Aplicaciones:
- Hormonas:
- Insulina
- Renina
- Celulasa
- Vacunas recombinantes, principalmente contra enfermedades víricas. La primera fue la
vacuna contra la hepatitis B que se empieza a comercializar en 1986
- Anticuerpos monoclonales
En este caso se trata de localizar el gen responsable de una enfermedad que se sabe es
hereditaria.Se conocen resultados con éxito como la identificación del gen responsable de
Corea Huntington en marzo de 1993 con marcadores de RFLP o el de la fibrosis quística.
Una vez localizado el gen se debe determinar la secuencia de nucleótidos comparando el alelo
defectuoso con el alelo normal.Cuando se logre se debe conocer y caracterizar la proteína
codificada.Esto esta encaminado no solo a conocer el fallo sino también a descubrir la
alteración producida por la proteína codificada.
4-Terapia génica:
La terapia génica consiste en la aportación de un gen funcionante a las células que carecen de
esta función, con el fin de corregir una alteración genética o enfermedad adquirida. La terapia
génica se divide en dos categorías:
En el caso del cáncer o SIDA las investigaciones van encaminadas a introducir en la zona
afectada(tumor) un gen que codifiquen la síntesis de proteínas tóxicas o que regulen las
reacciones tóxicas contra las propias células, que provoquen respuestas enérgicas del sistema
inmunitario o bien que corten el suministro de sangre que los tumores necesitan para seguir
desarrollándose.
5-Aplicaciones en agricultura
En agricultura, la genética se utiliza para cultivar plantas cuyos rendimientos sean los
deseados. En los últimos años, la aplicación de los conocimientos de Ingeniería Genética están
proporcionando buenos resultados, obteniéndose plantas transgénicas, es decir, plantas a las
que se le ha incorporado un ADN clonado (recombinante) y que se ha incorporado al genoma
de forma estable.
Los métodos para la obtención de plantas transgénicas son los cultivos celulares y de
transfección.
Entre los principales caracteres que se han transferido a los vegetales o que se están
ensayando en el laboratorio son entre otros la resistencia a herbicidas, a insectos y a
enfermedades microbianas, el incremento del rendimiento fotosintético, mejora en la calidad de
los productos agrícolas, síntesis de productos de interés comercial( como anticuerpos animales
o el interferón) y la asimilación del nitrógeno atmosférico.
6- Animales transgénicos
3.1-GENERALIDADES:
La decodificación del genoma humano, calificado como el "mapa más importante jamás
producido por la humanidad", promete alentadoras perspectivas en el tratamiento y prevención
de enfermedades hasta ahora incurables.
El genoma, o conjunto de genes de un individuo, guarda las instrucciones que determinan cada
una de sus particularidades - desde el timbre de su voz y el color de sus ojos, hasta la aparición
de una determinada enfermedad -.
Descifrar este jeroglífico permitirá que en las próximas décadas el desarrollo de fármacos
específicos para cada individuo o la creación de tratamientos para males como el cáncer, la
diabetes, los problemas cardíacos, la esquizofrenia o el Alzheimer, entre muchas otras.
Ya se han podido descifrar algunos de esos genes en relación con las enfermedades que
producen, así entre los genes más relevantes, destacan los asociados al cáncer de próstata,
glaucoma y Alzheimer, todos los cuales se encuentran en el cromosoma 1. En el 2º cromosoma
se identificó el gen del cáncer de colon, mientras que el cromosoma 3 se esconden los de
cáncer de pulmón y otra variante del que afecta al colon. La enfermedad de Parkinson y el
Corea de Huntington se alojan en el 4.
Se podría continuar la lista pero antes de lograr comprender el código completo es necesario
identificar la totalidad de los genes. Luego habrá que averiguar cuál es la función de cada uno
de ellos, cómo interactúan entre sí y qué rol les cabe dentro del conjunto que conforma el
código genético humano.
3.2-APLICACIÓN EN MEDICINA:
La aplicación más inmediata de conocer el Genoma Humano y con ello las posibles mutaciones
que se pudieran producir en los genes es poder realizar un diagnóstico preciso.
El proceso de análisis genético consiste en extracción de una muestra venosa anticoagulada
con EDTA. Esta muestra es enviada a una sección determinada del laboratorio de análisis
genéticos, dependiendo del análisis que se quiera hacer.
Una vez las muestras son recibidas en la sección correspondiente de laboratorio de análisis
genéticos, suele procederse a la extracción del ADN y a la amplificación del gen de interés a
través de la reacción en cadena de la polimerasa (véase cuadro) o PCR. Se plantean entonces
distintas posibilidades técnicas:
• Electroforesis y análisis
• Secuenciación
• Encima de restricción
4- Enfermedades y Genes
4.1- Concepto:
En las Enfermedades Mendelianas, está alterado un sólo gen (o locus), de ahí su nombre de
monogénicas y se heredan siguiendo los clásicos patrones mendelianos. Aproximadamente, el
1% de los niños nacidos vivos son fenotípicamente anormales debido a la mutación de un gen.
Se han reconocido cerca de 5.000 desórdenes potenciales de un gen (Mendeliano) y se
sospecha de muchos otros.
c) Enfermedades Cromosómicas
d.- Otras:
2) Las afecciones debido a Imprinting genético (impronta genética), que son consecuencia
de la expresión diferencial de genes dependiente del origen de los cromosomas. Ejemplo el
Sindrome de Prader-Willi v/s S. Angelman, que son debidos a alteraciones genéticas del
cromosoma 15 paterno y materno, respectivamente.
4) Las afecciones por defectos genéticos de células somáticas. Una mutación en el huevo
fertilizado puede transmitida a todas las células hijas. Sin embargo, si la mutación ocurre
después de las primeras divisiones, entonces se originan mosaicos (dos o más genotipos
distintos en un mismo individuo). Este mosaicismo puede ser gonadal, somático o ambos. El
cancer es un ejemplo de este tipo de afección.
A pesar de que no se trata de afecciones genéticas propiamente tales, conviene recordar a las
Afecciones teratogénicas. Se trata de afecciones causadas por exposición a factores
exógenos, (drogas, virus, etc.,) que afectan nocivamente a un embrión que, de otra manera,
estaba destinado a desarrollarse normalmente. Estos factores se denominan genéricamente
teratógenos. Sólo se conocen 15-20 agentes teratógenos comprobados, a pesar de que se
sospecha que muchas otras sustancias puedan serlo. No se trata de afecciones genéticas
propiamente tales, sin embargo, pueden producir fenotipos similares a aquellos causados por
alteraciones genéticas, llamados fenocopias. La acción de un teratógeno depende de múltiples
factores. La relación cuantitativa de los teratógenos conocidos con la incidencia de anomalías
es relativamente pequeña, con excepción del alcohol (Sindrome de Alcohol Fetal).
4.3- Métodos de diagnóstico para las enfermedades genéticas
Se debe sospechar una afección genética frente a un niño "distinto", que se sale de las
características físicas y de comportamiento habituales. Como por ejemplo, ante un niño que
presente: bajo peso, pequeño para edad gestacional, hipotonía, malformaciones externas e
internas, dismorfias, dificultad para alimentarse, vómitos, somnolencia, convulsiones, etc.
Los pilares del diagnóstico de una afección genética son: la historia clínica, el examen físico y
los exámenes de laboratorio.
Historia clínica:
Debe hacerse una buena historia clínica del niño (prenatal- perinatal y postnatal), debe incluir
una ananmesis próxima y sobre todo remota, asi podremos averiguar si hay antecedentes de
enfermedades genéticas en la familia y de que tipo son.
Se hará una historia familiar buscando: una afección similar en los parientes, antecedentes de
consanguinidad y de etnicidad. Debe hacerse un árbol genealógico lo más completo posible.
Se deben aclarar los resultados reproductivos adversos tales como abortos espontáneos
repetidos, nacidos muertos y niños nacidos vivos con anomalías.
La edad avanzada del padre (final de la cuarta y quinta década) está asociada
significativamente más asociada con mutaciones Mendelianas. La edad materna avanzada está
asociada a anomalías cromosómicas, particularmente con la trisomía 21. Es importante señalar
que toda información consignada en la genealogía debe ser comprobada.
b) Examen físico
El examen físico del niño deber ser completo y cuantificable (para rasgos fenotípicos que
presentan una distribución normal en la población). Especialmente importante es el examen de
la cara, de las extremidades, y los dermatoglifos (disposición de las crestas dérmicas palmares
y plantares).
Uno de los objetivos del examen físico es la búsqueda de malformaciones, que pueden ser:
mayores (aquellas con consecuencias médica y/o cosmética seria para el paciente, menores:
caracteres morfológicos inusuales que no son serios ni médica ni cosméticamente para el
paciente.
c) Exámenes de laboratorio
C.1- Laboratorio corriente: Orina, Rayos X, sangre, ecografía, scanner, resonancia magnética
nuclear, etc.
C.2- Dermatoglifos: Los dermatoglifos son las configuraciones formadas por las eminencias y
surcos de la piel que cubre las palmas de las manos y las plantas de los pies o también se
definen como los tipos de distribución de las líneas dermopapilares que se hallan tanto en las
palmas de las manos como en las plantas de los pies y en todos los pulpejos de los dedos. Los
caracteres determinantes de los dermatoglifos se transmiten por herencia, así el número de
pliegues de las huellas digitales constituye un buen ejemplo de herencia poligénica. Dada su
transmisión hereditaria, son patrones únicos para cada individuo mostrando una gran
diversidad tanto por sus detalles como por las combinaciones que presentan en una persona
determinada; además, existen variaciones considerables en las frecuencias de las diferentes
configuraciones dermatoglíficas tanto en los dos sexos como entre los diferentes grupos
étnicos.
Los estudios sobre dermatoglifos han destacado la relación de ciertos patrones anormales con
una serie de síndromes genéticos y cromosómicos.
Las poblaciones muestran diferentes tipos de disposiciones dermatoglíficas:
- patrones dérmicos normales, aquellos presentes en la mayoría de la población,
- inusuales, presentes en un porcentaje pequeño de la población sana y en algunos de los
síndromes malformativos.
- anormales, presentes en un alto porcentaje de síndromes malformativos de origen mono o
poligénicos, cromosómicos o ambientales y también en alguna ocasión en personas sanas
Cromatina sexual X (de Barr) e Y (cromatina Y): orienta a alteraciones en número y forma de
cromosomas sexuales. Sin embargo, dado que requiere confirmación cromosómica (cariotipo),
en muchos laboratorios este examen no se practica. La cromatina sexual X, corresponde a un
cromosoma X inactivo. Una mujer normal (XX) inactiva uno de sus dos cromosomas X, para
compensar dosis génica en relación al hombre normal que posee sólo un cromosoma X. La
inactivación del cromosoma X ocurre al azar, tempranamente en el desarrollo embrionario y
afecta a la mayoría de los genes ubicados en el cromosoma X. En los núcleos de las células
existirán tantos corpúsculos X, como cromosomas X-1, posea el individuo. La cromatina Y,
corresponde a la presencia de un cromosoma Y. Ambos exámenes de cromatina se han
utilizado para el diagnóstico del sexo de fetos, embriones y células sexuales.
El cariotipo está indicado en pacientes con retardo mental con o sin anomalías congénitas
múltiples; en padres de pacientes con rearreglos cromosómicos; en hijos de padres con
rearreglos balanceados; en parejas con 2 o más abortos espontáneos o con abortos y recién
nacidos muertos; en parejas con infertilidad de etiología desconocida; en pacientes con
genitales ambiguos, con amenorrea 1a o 2a de origen oscuro, en pacientes con falla puberal y
en pacientes con alteraciones conductuales.
d.)Exámenes Bioquímicos
Con la ayuda de las sondas genéticas, los médicos ya pueden rastrear el ADN en busca de
genes defectuosos, responsables de una infinidad de males.
Hemofilia:
Alcoholismo:
Corea de Huntington:
Anemia Falciforme:
Fibrosis quística:
Hipotiroidismo Congénito:
Se caracteriza por una especie de ruptura de uno de los brazos del cromosoma X.
Miopatia de Duchenne:
Atrofia muscular que aparece hacia los dos años de edad y desemboca en una parálisis total.
Maníaco - Depresión:
Esquizofrenia:
Ceguera y parálisis.
Aparece con una frecuencia de 1 en 3000 en las poblaciones judías originarias en Europa
Central.
Malformaciones Congénitas:
El riesgo de una embarazada tenga un hijo con una malformación gen tica en el nacimiento es
del cuatro por ciento.
- Hidrocefalia:
- Microcefalia:
- Labio Leporino:
- Ano Imperfecto:
Defecto del tubo neural que consiste en una anomalía en el cierre de uno o más vértebras.
4.5-Cáncer y oncochips:
• CÁNCER
Nuestro organismo está formado por distintas clases de células que se dividen sucesivamente
aumentando su contenido en moléculas y orgánulos y duplicando y segregando sus
cromosomas para dar lugar a otras células iguales a ellas genéticamente( proceso de mitosis),
de una manera metódica y ordenada. Cuando uno de las fases de esta mitosis falla, se produce
una mutación que dará lugar, si no es remediado, a la aparición de una neoplasia.
Las células de un tumor son monoclonales(vienen de una sola célula), por lo que sólo hace
falta un fallo no corregido para que se produzca el tumor.
El organismo tiene una serie de procesos que deberían evitar el crecimineto descontrolado de
células, es decir, deberían evitar el inicio del cáncer. Estos métodos son la muerte celular
programada o apoptosis. Esta apoptosis esta mediada por el gen supresor p53 u otros
mecanismos. Estos evitan que cuando el ADN, que esta replicandose o ha sido replicado, tiene
una alteración en una o varias secuencias de nucleótidos sea destruido.
Esto se da como resultado de una mutación en uno de los genes que controlan la capacidad de
proliferación de dicha célula. Esta célula crece con una velocidad ligeramente superior a la
norma, y puede pasar inadvertida durante mucho tiempo, ya que para que un tumor pueda ser
detectado hace falta que tenga una medida mínima de 1 cm si se hace por palpación
2-Promoción:
Es durante esta fase cuando el agente promotor tumoral (sustancias que actúan modificando
los productos de genes implicados en el control de la proliferación celular, de modo que
colaboran con la mutación iniciadora de todo el proceso), estimula el crecimiento de las
escasas células iniciadas que con una sola mutación tenían alterado levemente u crecimiento.
3-Progresión tumoral:
Se conocen muchas de las causas de las mutaciones que provocan un cáncer, pero se
desconoce prácticamente en la totalidad las causas de porqué una célula defectuosa tiene la
capacidad de invadir otros tejidos.
El crecimiento de un tumor, tanto primario como secundario, requiere una vascularización. Sin
la presencia de vasos sanguíneos, las células tumorales no solo no tendrían capacidad
invasiva, sino que morirían por falta de oxígeno y nutrientes y falta de eliminación de anhídrido
carbónico y otras sustancias de deshecho.
Una vez en la cercanía de los vasos sanguíneos, las células tumorales deben atravesar las
paredes para acceder a la circulación sanguínea o linfática. Ya en el torrente sanguíneo o
linfático, las células se expanden al resto del organismo.
• ONCOCHIPS
Los avances en nanotecnología, la reciente publicación del Genoma Humano, así como la
disponibilidad de decenas de miles de clones han permitido el desarrollo de técnicas de análisis
molecular masivo, basadas en la identificación de mutaciones o cambios en la expresión de los
genes. Los primeros análisis sobre neoplasias humanas efectuados con biochips han
demostrado que cada tumor tiene una huella genética (perfil de expresión) propia, y que estos
perfiles se pueden agrupar mediantes técnicas bioinformáticas permitiendo una correlación
precisa con las características del tumor, pronóstico, respuesta al tratamiento,....
En concreto, el oncochip del CNIO permite analizar 6.514 genes, de los que 2.403 han sido
escogidos según su función directamente relacionada con procesos tumorales y 4.111 han sido
seleccionados por su expresión anómala en tejidos tumorales o por su localización en regiones
cromosómicas donde se detectan frecuentes alteraciones
Todos los genes impresos en el ONCOCHIP han sido escogidos específicamente como
potencialmente relevantes, y los primeros análisis confirman que es una técnica esencial para
el análisis molecular del cáncer y su posterior diagnóstico y tratamiento.
Para llevar a cabo un experimento con el oncochip se seleccionan dos muestras que puedan
compararse, como por ejemplo una muestra de tejido tumoral y otra de tejido sano, o bien un
tejido invasivo (metastásico) y otro no invasivo, o uno tratado farmacológicamente y otro no.
El "oncochip", como cualquier otro biochip, es físicamente una base de cristal u otro material
sobre la cual se colocan genes seleccionados conocidos, dispuestos en filas y columnas
perfectamente identificadas. Se trata de una matriz con una celda identificada por su número
de fila y de columna.
En el caso del "oncochip" del Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas (CNIO), cada
celda de la matriz mide 4 cm2. y en ella se colocan, en total, 6.514 genes humanos.
Para identificar "oncogenes", es decir, los genes que desempeñan un papel en el desarrollo de
un cáncer con el "oncochip" se extrae todo el ARN del tumor a analizar. Seguidamente, se
marca este ARN tumoral con un compuesto fluorescente y se marca con distintos colores o
fluorocromos, en general rojo y verde. El ARN total marcado se añade a continuación sobre el
biochip.
Una vez incorporados, los genes activos en el tumor reaccionan con los genes situados en el
biochip y aparece un punto brillante, fluorescente, en el lugar del biochip en el que reaccionan.
Los genes inactivos del tumor por otra parte, no reaccionan y no dan lugar por tanto a
fluorescencia.
Esta interacción se produce sólo si la cadena de ARN extraída del tumor es la complementaria
de alguna de las cadenas de ARN que contiene el "oncohip": si coinciden, el producto
fluorescente añadido al ARN tumoral, brilla.
El gen del tumor queda entonces identificado porque coincide (tiene exactamente la cadena
complementaria) con uno de los genes ya conocidos que contiene el "oncochip". Su nivel de
actividad por otro lado vendrá dado por el hecho de que si es mucho el ARN de ese gen que se
hallaba presente en el tejido tumoral, habrá más ARN coincidente, más concentración por tanto
de material fluorescente indicándose así la mayor actividad del gen en cuestión.
Traducido a colores, se observa una fluorescencia roja, verde o amarilla: si es roja, los genes
seleccionados del oncochip están más expresados en la muestra que se pretende analizar. Si
aparece el verde, se encuentran en una concentración más baja. Finalmente, el color amarillo
identifica los genes que tienen niveles de expresión similares.
Los oncochips no sirven para predecir el riesgo innato que tiene cada persona de desarrollar
un cáncer. Para lo que sí van a servir es para determinar la ficha genética exacta de un tumor
ya desarrollado y establecer con ello su agresividad, si va a producir o no metástasis y el
tratamiento adecuado. A partir del 2004, esas fichas serán la principal guía de los oncólogos a
la hora de predecir el comportamiento de un tumor y decidir su tratamiento óptimo.
En cualquier tejido celular se pueden encontrar expresados (esto es, activos) entre 500 a
15.000 genes distintos. En el caso del cáncer, el nivel de expresión de ciertos genes en las
células, es decir, su mayor o menor actividad, determina el comportamiento que va a tener el
tumor, su agresividad (si va a ser más o menos dañino) así como la respuesta que podrá tener
el tumor a distintos tipos de tratamiento.
El "oncochip" en cuestión desarrollado por el CNIO identifica las mutaciones que se pueden
producir en 6.514 genes cuya actividad se ha relacionado con distintos tipos de cáncer. El
estudio se llevará a cabo a partir de tejidos de pacientes previamente seleccionados, igual que
si se tratase de un ensayo clínico de un medicamento.
En las últimas dos décadas se han descubierto más de 50 oncogenes y genes supresores de
tumores implicados en tumores humanos. Estos hallazgos, se verán cuantitativamente
incrementados con los datos derivados del proyecto Genoma, y propiciarán el diseño de
"oncochips" específicos para cada oncogen y sus respectivas mutaciones.