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MASTER Spécialisé : Sciences de l’Environnement en Milieu Urbain

Eaux et Energies Renouvelables


2019 - 2020

METHODES PHYSIQUES DE SEPARATION ET D'ANALYSE  DES


BIOMOLECULES

TRAVAUX DERIGIEES
2019 - 2020

L'extraction est une technique de séparation en génie chimique et en chimie de laboratoire.


Les montages ci-dessous indiquent les différents types d’extraction.

1- Donner le nom de chaque montage.

pince ronde

aimant

5 6
4 7
8
3
2 9

agitateur magnétique

support élévateur

Extracteur de Soxhlet. Microonde Macération

2 - Quelle est la technique qui permet d’obtenir le l’extrait avec le minimum de solvant et
dans un temps court.

L’extraction par un appareil de Microonde

3 - Nommer le matériel ci-dessous et citer son rôle :

pince trois doigts

pince ronde

tête de distillation

réfrigérant droit
ampoule de coulée isobare

arrivée d'eau
départ d'eau allonge courbe

arrivée d'eau

olive aimantée

erlenmeyer récepteur

5 6 5 6
4 7 4 7

3 8 3 8

agitateur magnétique chauffant


2 9 2 9
1 11 1 10

support élévateur

Un sublimateur Hydro distillation Matériel d’extraction par CO2 supercritique

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4 - Quelle est la technique qui permet d’obtenir le l’extrait avec une grande pureté,
selon un processus non polluant.
C’est la technique d’extraction par CO2 supercritique

5- Citer les différentes techniques de séparation et d’analyse.

A – Les techniques chromatographiques.


B- Les techniques électro phorétiques

7 - On veut séparer quatre acides aminés par électrophorèse sur support. La glycine a pour
un pH de 6, de 5,5 pour la phénylalanine, de 11,2 pour l’arginine et de 3,2 pour l’acide
glutamique.
H2N - CH2 - COOH
O

Le PH de la solution électrolyte est égal à 6.

Solution:

Le point isoélectrique est atteint lorsque la forme pka1  pka 2


non chargée est majoritaire, soit lorsque pH i 
2

Cette propriété permet de séparer les acides aminés par électrophorèse.

PH = 5.5 ≠ 6

A pH 6, la glycine est sous la forme du zwitterion, sans charge globale.


Il ne sera donc entraîné ni vers l’anode, ni vers la cathode.

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L’acide glutamique est sous la forme dicarboxylate-ammonium, donc de charge globale


négative. Il sera entraîné vers l’anode.
L’arginine est sous la forme diammonium-dicarboxylate, donc de charge globale positive.
Il sera entraîné vers la cathode.
On peut aussi placer ces trois acides au même point, et visualiser leurs déplacements. Pour
révéler correctement les aminoacides, on utilise ensuite un révélateur : la ninhydrine.
La réaction qui conduit à un dérivé coloré (violet à jaune)

La ninhydrine ou nihydrine (2,2-dihydroxyindan-1,3-dione) est un composé aromatique


utilisé comme révélateur des acides aminés .

Tous les acides aminés sont colorés en pourpre de Ruhemann , seule la proline et
l'hydroxyproline sont colorées en jaune.

Elle réagit également avec les amines primaires générant une coloration pourpre de
Ruhemann et avec les amines secondaires auxquelles elle fournira une coloration jaune.

Pulvériser en surface le réactif à la nihydrine et reporter à l’étuve à 80 °C pendant 5


minutes

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8 - Calculer le pHi des solutions aqueuses de valine, de lysine et d’acide aspartique en


faisant apparaître les différentes formes ioniques dans l’écriture des équilibres successifs de
déprotonation ?
Que pouvez-vous dire sur le caractère acido-basique de ces AA à pH = 7 ?

pKa :2,28 pKa :2,18 pKa :2,09

pKb : 9,72 pKb : 8,95 pKr : 3,86

pKr : 10,53 pKb: 10,53

On peut définir que le Pk comme étant le PH de demi-dissociations (auquel 50 % du groupe


est dissocié)

La chaîne latérale peut avoir un pKr qui sera variable selon les acides aminés

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Bon courage et à bien tôt

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