BHS 355.

Année Académique 2019-2020 Département de Biochimie

Chapitre 2 : La réplication de l’ADN

3. Réplication chez les Eucaryotes

Les molécules d'ADN dans les cellules eucaryotes sont considérablement plus
grandes que celles des bactéries et sont organisées en structures nucléoprotéiques complexes
appelées nucléosomes (faits de chromatine) contrairement aux procaryotes ou cet ADN est nu.
Les caractéristiques essentielles de la réplication de l'ADN sont les mêmes chez les eucaryotes
et les procaryotes, et bon nombre des complexes protéiques sont conservés sur le plan
fonctionnel et structurel :

- Modèle semi-conservatif ;
- Complémentaire, antiparallèle et sens 5’-3’ ;
- Bidirectionnelle ;
- Discontinue pour l’un des 2 brins ;
- Avec amorce d’ARN

Cependant, il existe certaines différences entre la réplication chez les procaryotes et les
eucaryotes.

Chez les eucaryotes, la synthèse de l’ADN s’effectue en un instant très précis de la

vie cellulaire alors que chez les bactéries cette synthèse est quasi-continue. Cette synthèse a
lieu dans la phase S (S pour synthèse) du cycle cellulaire (période comprise entre 2 divisions
cellulaires)

La vitesse de mouvement de la fourche de réplication chez les eucaryotes/ vitesse de

réplication (~ 50 nucléotides / s) n’est que le vingtième de celui observé chez E. coli (~ 1000
nucléotides / s). A ce rythme, la réplication d'un chromosome humain moyen provenant d'une
seule origine prendrait plus de 500 heures. La réplication des chromosomes humains se fait de
façon bidirectionnelle à partir de nombreuses origines de réplication espacées de 30 000 à
300 000 bp. Les chromosomes eucaryotes sont presque toujours beaucoup plus grands que les
chromosomes bactériens, les origines multiples sont probablement une caractéristique
universelle dans les cellules eucaryotes.

Les origines de la réplication, appelées séquences à réplication

autonome/autonomously replicating sequences (ARS) ou réplicateurs, ont été identifiées et
mieux étudiées chez la levure. Les réplicateurs de levure couvrent environ 150 bp et
contiennent plusieurs séquences essentielles conservées. Environ 400 réplicateurs sont
répartis parmi les 16 chromosomes dans un génome de levure haploïde. L'initiation de la
réplication chez tous les eucaryotes nécessite une protéine à multiples sous-unités, le complexe
de reconnaissance d'origine/ origin recognition complex (ORC), qui se lie à plusieurs
séquences dans le réplicateur. L'ORC interagit avec et est régulé par un certain nombre de
protéines impliquées dans le contrôle du cycle cellulaire eucaryote. Deux autres protéines,
CDC6 (découverte dans un criblage de gènes affectant le cycle de division cellulaire) et CDT1
(transcrit 1 dépendant de Cdc10), se fixent à l'ORC et interviennent dans le chargement de 6
protéines ( hétérohexamère) appelées protéines de maintien du minichromosome/
minichromosome maintenance proteins (MCM2 à MCM7). Le complexe MCM est une
hélicase réplicative en forme d'anneau, analogue à l'hélicase bactérienne DnaB. Les

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protéines CDC6 et CDT1 ont un rôle comparable à celui de la protéine bactérienne DnaC,
en chargeant l'hélicase MCM sur l'ADN proche de l'origine de la réplication.

Comme pour les bactéries, les eucaryotes possèdent plusieurs types d’ADN
polymérases. Certains sont liées à des fonctions particulières, telles que la réplication de l'ADN
mitochondrial. La réplication des chromosomes nucléaires implique l'ADN polymérase α
en association avec l'ADN polymérase δ.
L'ADN polymérase α est typiquement une enzyme à sous-unités multiples ayant une
structure et des propriétés similaires dans toutes les cellules eucaryotes. Une sous-unité a une
activité primase et la plus grande sous-unité (M. ~ 180 000) contient l’activité de
polymérisation. Cependant, cette polymérase ne présente pas d'activité exonucléasique 3’-5’
(activité de relecture/proof Reading), ce qui la rend impropre à la réplication de l'ADN avec
une haute-fidélité. L’ on pense que l'ADN polymérase α ne fonctionne que dans la synthèse
d'amorces courtes (contenant de l'ARN ou de l'ADN) pour les fragments d'Okazaki sur le brin
en retard. Ces amorces sont ensuite étendues par l'ADN polymérase δ qui est également
constituée de multiples sous-unités. Cette enzyme est associée à et stimulée par une protéine
appelée antigène nucléaire de cellules en prolifération/ proliferating cell nuclear antigen
(PCNA; M. 29 000), qui la stimule, et se trouve en grande quantité dans les noyaux des cellules
en prolifération. La structure tridimensionnelle de PCNA est remarquablement similaire
à celle de la sous-unité ß de l'ADN polymérase III de E. coli, bien que l'homologie de
séquence primaire ne soit pas évidente. Le PCNA a une fonction analogue à celle de la sous-
unité β, formant une pince circulaire qui améliore considérablement la processivité de la
polymérase. L'ADN polymérase δ a une activité exonucleasique 3’- 5 et semble effectuer
la synthèse du brin principal et du brin retardé dans un complexe comparable à l'ADN
polymérase III bactérienne (qui est un dimère).

Une autre polymérase , l’ADN polymérase ε, remplace l’ADN polymérase δ dans

certaines situations, comme dans la réparation de l'ADN. L’ADN polymérase ε peut
également fonctionner au niveau de la fourche de réplication, jouant peut-être un rôle
analogue à celui de l’ADN polymérase I bactérienne, en éliminant les amorces de
fragments d’Okazaki sur le brin retardé.
Chez le procaryote, les fragments d'Okazaki mesurent de 1000 à 2000 bases, et chez l'eucaryote
ils sont d'environ 200 bases.
Deux autres complexes protéiques interviennent également dans la réplication de l'ADN
eucaryote : 1-La protéine de réplication A / Replication Protein A (RPA) est une protéine
qui se fixe à l'ADN simple brin chez les eucaryotes, dont la fonction est équivalente à celle
de la protéine SSB d’ E. coli. 2- La protéine facteur de réplication C/ Replication Factor C
(RFC) travaille en association avec PCNA et facilite l'assemblage de complexes de réplication
actifs.

La terminaison de la réplication sur les chromosomes eucaryotes linéaires implique

la synthèse de structures spéciales appelés télomères aux extrémités de chaque chromosome,
grace a une enzyme appelee telomerase qui fonctionne en fournissant le site actif pour une
synthese d’ADN ARN-dependante.

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