9-BIOCHCLIN - S2 - Cours Du Lundi 28-03-2022

MODULE : PHYSIOLOGIE ET BIOCHIMIE CLINIQUE
- S2 -
COURS DE BIOCHIMIE CLINIQUE
2021-2022
EXPLORATION DES PROTEINES PLASMATIQUES

PAR DES METHODES ELECTROPHORETIQUES
E-mail : guemouri.guemouri@gmail.com
Biochimie Clinique - Pr. L. GUEMOURI - FMDC- Année 2021-2022

PARTIE 2 : PROTEINES PLASMATIQUES
PLAN
I. INTRODUCTION
II. DEFINITION DES PROTEINES PLASMATIQUES
III. EXPLORATIONS DES PROTEINES PLASMATIQUES
III.1. EXPLORATION DES PP PAR DES METHODES ELECTROPHORETIQUES
III.1.1. Méthodes électrophorétiques
III.1.2. Groupe des Albumines
III.1.3. Groupe des Globulines
A. Groupe des Alpha-globulines (-globulines)
 Groupe des Alpha-1-globulines (1-globulines)
 Groupe des Alpha-2-globulines (2-globulines)
B. Groupe des Béta-globulines (-globulines)
C. Groupe des Gamma-globulines (-globulines)
III.1.4. Les protéines de la réaction inflammatoire
III.1.5. Interprétation des profils électrophorétiques
III.2. EXPLORATION DES PP PAR DES METHODES CHIMIQUES
III.2.1. Techniques colorimétriques
III.2.2. Techniques enzymatiques
III.2.3. Exploration des principales enzymes plasmatiques par les
techniques colorimétriques et enzymatiques
III.3. EXPLORATION DES PP PAR DES METHODES IMMUNOLOGIQUES
III.2.3. EXPLORATION DES PRINCIPALES ENZYMES PLASMATIQUES
Les enzymes plasmatiques :
 Ne représentent quantitativement qu’une très faible partie

des protéines plasmatiques,
 Peuvent être mise en évidence grâce à leur spécificité
enzymatique,
 Sont déterminées grâce à leur activité enzymatique qui est
proportionnelle à leur concentration.

Les principales enzymes d’intérêt clinique :

 Amylase,
 Bilirubine,
 5’-Nucléotidase,
 Gamma-Glutamyltransférase,
 Lipase,
 Phosphatases,
 Lactate déshydrogénase,
 Transaminases.

Amylase Propriétés et Rôles
 Amylase encore appelée α-amylase,

 Deux groupes d’isoenzymes selon l’origine : Pancréatique (P)
ou Salivaire (S),
 Retrouvée dans : larmes, lait maternel, sueur, leucocytes,
plaquettes, entérocytes, poumons, prostate, appareil génital,
 Rôle principale est l’hydrolyse de l’amidon présent dans
l’alimentation, générant glucose, maltose et dextrine,
 Prescrite pour la recherche d’une pathologie des glandes
salivaires,
 Prescrite pour le diagnostic de la pancréatite aiguë
lorsqu’elle est couplée à la lipase.
α-Amylase
LIEN VIDEO
https://www.youtube.com/watch?v=HTJy3lnPmL8

Amylase Variations
 Valeurs de référence chez l’adulte : 10-45 U/l (30°C)

12-62 U/l (37°C),
 Variations physiologiques en fonction de l’âge, au cours
de la grossesse, ethnie,
 Variations pathologiques
Principales indications
 Examen d’urgence devant toute crise douloureuse abdominale,
 Demandée dans les affections des glandes salivaires,
 Diagnostic de la pancréatite aiguë (couplée à la lipase).

Bilirubine Propriétés et Rôles
 Pigment jaune dans la bile (liquide sécrété par le foie), il est

à l’origine de la couleur des urines,
 Captée au niveau du foie et excrétée dans la bile,
 Provient de la dégradation de l’hémoglobine des globules
rouges vieillis au niveau de la rate,
 Circule dans le sang, liée à l’albumine,
 Prescrite pour diagnostiquer ou suivre une hépatopathie,

hépatite, cholestase ou cirrhose.

Bilirubine Propriétés et Rôles
 Lorsqu’il y a un problème d'élimination, la bile s'accumule

cela provoque un ictère,
 Elle risque de s'accumuler chez le nouveau-né quand le foie
n'est pas encore tout à fait mature : c'est l'ictère
physiologique du nouveau-né,
 On distingue 2 types de bilirubine:
 Bilirubine libre ou indirecte ou non conjuguée,
 Bilirubine conjuguée ou directe,
Bilirubine libre + Bilirubine conjuguée = Bilirubine totale

Bilirubine Libre / Non Conjuguée / Indirecte
Propriétés et Rôles
 Elle est produite dans la rate et la moelle osseuse,

 Elle n’est pas soluble dans l’eau,
 Elle est transformée par le foie en bilirubine directe,
 Elle est toxique pour l’organisme, en particulier pour le
cerveau.

Bilirubine Conjuguée / Directe
 Elle est excrétée dans la bile,

 Elle est dégradée dans l’intestin grêle et le colon puis
évacuée dans les selles,
 Elle colore les selles en brun,
 Elle augmente dans les cholestases.

Bilirubine Variations
 Valeurs de référence chez l’adulte :

 Bilirubine totale : 3-10 mg/l
 Bilirubine libre ou indirecte : 2-7 mg/l
 Bilirubine conjuguée ou directe : 1-3 mg/l
 Variations physiologiques en fonction du sexe, au cours
de la grossesse, médicaments (variation iatrogène),
 Dans les affections hépatobiliaires,
 Dans les syndromes hémolytiques,
 Dans l’ictère du nouveau-né.

Bilirubine
élevée ou basse
LIEN VIDEO
https://www.youtube.com/watch?v=UHCu58TY-y0

5’-Nucléotidase Propriétés et Rôles
 5’-Nucléotidase dont le sigle est 5’Nu,

 Enzyme présente dans de nombreux tissus, essentiellement
dans le foie et les cellules des voies biliaires,
 Principalement localisée au niveau de la membrane
plasmique des cellules,
 Différentes formes moléculaires :
 Forme membranaire (ecto 5’Nu) rattachée à la membrane
par un groupement glycosyl-phosphatidyl-inositol,
 Forme soluble membranaire,
 Deux formes cytosoliques.
5’-Nucléotidase Rôles
 C’est une phospho-mono-estérase, qui hydrolyse les

nucléotides extracellulaires en nucléosides (adénosines),
spécifiquement la liaison ester phosphorique au niveau du 5-
phosphate des nucléotides,
Elle permet donc la formation des nucléosides pénétrant
facilement à l’intérieur des cellules (enrichir le pool
cytosolique des purines),

5’-Nucléotidase Variations pathologiques
 C’est un bon indicateur des affections du foie et des voies

biliaires,
 Son dosage est utile pour le diagnostic de cholestases
(diminution de la sécrétion biliaire),
 Son activité est en relation avec le degré d’invasion
métastasique,
 Sa détermination est souvent associée à celle des
phosphatases alcalines :
 5‘Nu normale : phosphatases alcalines d'origine osseuse,
 5'Nu augmentée : phosphatases alcalines hépato-biliaire.
5’-Nucléotidase Variations

 Homme > 30 ans : ≤ 8,8 U/l à 37°C
 Femme > 20 ans : ≤ 9,7 U/l à 37°C
de la grossesse,
 Dans les affections osseuses, si : 5’Nu normale et PAL augmentée,
 Dans les affections d’origine hépato-biliaire, si : 5’Nu augmentée
et PAL augmentée.

Gamma-Glutamyl-transférase Propriétés et Rôles
 Gamma-Glutamyl-transférase dont le sigle est GGT ou γ-GT,

 Enzyme présente dans de nombreux organes, comme le
rein, les intestins et plus particulièrement dans le foie,
 Sa fonction est de transférer le groupe gamma-glutamyl
provenant du glutathion sur des acides aminés, des
peptides ou de l’eau,
 Cette fonction est très importante pour la détoxification de
l’organisme par le foie.

Gamma-Glutamyl-transférase Propriétés et Rôles
 La GGT est un marqueur d’anomalie du foie, souvent due à

un alcoolisme chronique,
 Sa production par l'organisme est augmentée par l'alcool,
 Son dosage peut être utile dans la détection de
l'alcoolisme, des affections hépato-biliaires ou des tumeurs
hépatiques,
 Le taux élevé est également associé à des facteurs de
risques cardiovasculaires comme les dyslipidémies, le
diabète ou l’obésité.

Gamma-Glutamyl-Transférase
Que sont les Gamma-GT et quelles sont les normes
LIEN VIDEO
https://www.youtube.com/watch?v=aDMJjRKHGaQ

Gamma-Glutamyltransférase Variations

 Homme : 8-35 UI/l à 30°C 10-45 UI/l à 37°C
 Femme : 5-25 UI/l à 30°C 7-35 UI/l à 37°C
 Variations physiologiques en fonction du âge, sexe,
surcharge pondérale, médicaments,
 Dans le cadre d’un bilan hépatique,
 Dépistage et surveillance de l’alcoolisme chronique.

Gamma-Glutamyl-Transférase
Que signifie les Gamma-GT élevées
LIEN VIDEO
https://www.youtube.com/watch?v=hUfAFzJCNDk

Lipase Propriétés et Rôles

 Glycoprotéine sécrétée par le pancréas,
 Présente en faible quantité dans la muqueuse gastrique, les
leucocytes et les érythrocytes,
 Enzyme qui hydrolyse les liaisons esters des triglycérides en
présence de colipase et de sels biliaires à faible
concentration,
 Libérée par le tractus digestif pour la digestion des graisses,
 Transforme les graisses alimentaires en acides gras et alcool
(Lipolyse),
 Lipase sérique utile au diagnostic et au suivi des pathologies
du pancréas (pancréatites aiguës).
Lipase Variations
 Valeurs de référence chez l’adulte : 13-60 U/l

 Variations physiologiques en fonction de l’âge après 60
ans,
 Dans l’exploration de la fonction pancréatique.

Phosphatases Propriétés et Rôles
 Enzymes qui catalysent la séparation de l'acide

phosphorique des esters non phosphoriques,
 Enzymes capable d’enlever un groupe phosphate d’une
molécule simple ou d’une macromolécule biologique,
 Il existe 2 types de phosphatases :
 Phosphatases Alcalines,
 Phosphatases Acides.

Phosphatases Alcalines Propriétés et Rôles
 Glycoprotéines membranaires dont le sigle est PAL,

 Très répandues dans tous les tissus humains,
particulièrement concentrée dans le placenta, l'intestin, le
rein, les os (ostéoblastes) et le foie,
 Molécules contenant du zinc, de poids moléculaire 170 KDa,
 Catalyse l’hydrolyse d’esters mono-phosphoriques à pH
alcalin en libérant du phosphate, permettant le passage des
métabolites à travers les membranes cellulaires.

Phosphatases Alcalines Propriétés et Rôles
 Plusieurs isoenzymes existent de composition hétérogène

mais de même activité.
 Les isoformes osseuses et hépatiques des PAL représentent

physiologiquement à elles deux environ 50% de l’activité
PAL sérique.
Phosphatases Alcalines Variations
 Valeurs de référence chez l’adulte : 40-130 UI/l à 37°C

 Variations physiologiques en fonction du âge (enfant et
adolescent),au cours de la grossesse, alimentation,
médicaments (variation iatrogène),
 Dans l’exploration des affections hépatiques,
 Dans l’exploration des affections des voies biliaires,
 Dans l’exploration des affections du tissu osseux.

Phosphatases Alcalines Osseuses
 Glycoprotéines tétramérique, dont le sigle est PAO ou

PALOS,
 Poids moléculaire 80 KDa,
 Présente à la surface des ostéoblastes, libérée dans la
matrice osseuse sous forme de dimère après hydrolyse,
 Sa concentration sérique reflète l’activité d’ostéogenèse,

Phosphatases Alcalines Osseuses Variations

 Homme : 5,5 - 22,9 µg/l
 Femme pré-ménopausée : 4,9 - 26,6 µg/l
 Femme ménopausée : 5,2 -24,4 µg/l
 Variations physiologiques âge, sexe, variation
nycthémérale, croissance osseuse, activité physique,
DIMINUTION AUGMENTATION
Hypoparathyroïdies Hyperparathyroïdies
Maladie de Cushing : (changements Métastases osseuses
de conformation corporelle, perte de Maladie de Paget (remodelage
muscle, ) osseux anormal et excessif)
Biomnis/ Biologie Médicale Spécialisée

Phosphatases Acides Propriétés et Rôles
 Enzymes lysosomiales dont le sigle est PAC,

 Présentes dans plusieurs organes : prostate, foie, poumons,
pancréas, rate, os, sang,
 Hydrolysent les phosphates organiques et libèrent les
phosphates minéraux insolubles,
 Circule dans le sang et l’activité est plus importante dans le
sérum que dans le plasma, à cause de la libération de
l’isoenzyme plaquettaire au cours de la formation du
caillot,
 ,

Phosphatases Acides Propriétés et Rôles
 On distingue couramment deux isoenzymes,
 Isoenzyme-2 : Phosphatase acide prostatique (PAP),

synthétisée essentiellement dans la prostate,
 Isoenzyme-5 : Phosphatase acide tartrate résistante

(TRAP), provient en partie de l’os.
 ,

Phosphatases Acides Variations

 Homme : (20-50 ans) : 1,9 -5,0 UI/l - (> 50 ans) : 2,2 - 5,3 UI/l
 Femme : (20-40 ans) : 1,5 - 4,4 UI/l - (> 40 ans) : 1,5 - 4,8 UI/l
 Variations physiologiques en fonction de l’âge, sexe,
AUGMENTATION
- PAC : anomalies cellulaires, infarctus myocardique, embolie
pulmonaire,
- PAP : adénomes , cancers de la prostate,
- TRAP : anémies hémolytiques, ostéolyse,
Guide pratique des analyses médicales, 4ème Eds, 2005

Lactate Déshydrogénase Propriétés et Rôles
 Enzyme intracellulaire dont le sigle est LDH,

 Présente dans la plupart des tissus (myocarde, foie, rein,
cerveau, muscle strié) et les cellules sanguines
(essentiellement lignées érythrocytaires et myélocytaires),
 Enzyme importante dans le métabolisme des sucres,
 Enzyme qui catalyse la transformation du lactate en pyruvate
et inversement :
En milieu aérobie : elle catalyse la transformation du lactate
en pyruvate qui entre dans la néoglucogenèse,
En milieu anaérobie : elle participe à la glycolyse en
hydrolysant le glucose en lactate.
 Tétramère de poids moléculaire 135 KDa,

 Composé de deux sous-unités :
 Sous-unité H (Heart = Cœur) : elle a une affinité importante
pour le lactate favorisant la formation d’énergie dans le
cycle de Krebs aérobie,
 Sous-unité M (Muscle) : elle est plus efficace en milieu
anaérobie.
 La composition des deux sous-unités définit cinq

isoenzymes dont la répartition tissulaire est spécifique.

 Répartition tissulaire des différentes isoenzymes du LDH

Isoenzymes Sous-unités Tissus/ Cellules % sérique
LDH-1 HHHH Myocarde, Cerveau, Hématies 17 – 27 %
LDH-2 HHHM Myocarde, Cerveau, Hématies, 27 – 37 %

système réticuloendothélial
LDH-3 HHMM Muscles striés, cerveau, rein 18 – 25 %
LDH-4 HMMM Foie, muscle strié, rein, cerveau 9 – 15 %
LDH-5 MMMM Foie, rein, muscle strié 8 – 20 %


 Répartition sérique des différentes isoenzymes du LDH

Lactate Déshydrogénase Variations
 Valeurs de référence chez l’adulte : 190 - 430 UI/l (37°C),

de la grossesse, post-partum,
AUGMENTATION
Infarctus du myocarde (LDH, LDH-1),
Maladies : pulmonaires (LDH-2, LDH-3),
hépatiques (Rapport LDH-5/LDH-4),
musculaires (LDH-1, LDH-3),
rénales (LDH-3, LDH-4, LDH-5),
hématologiques (LDH-1, LDH-2),
oncologiques (LDH-5).

Lactate Déshydrogénase
Lactate dehydrogenase enzyme
LIEN VIDEO
https://www.youtube.com/watch?v=hSca4reTrRQ

Transaminases Propriétés et Rôles
 Enzymes de nature glycoprotéique, localisées

principalement au niveau du cytoplasme cellulaire,
 Elles sont présentes dans tous les tissus en particulier au
niveau du foie, du cœur et des muscles,
 Enzymes ayant une activité métabolique importante à
l'intérieur des cellules,
 Leur rôle est de permettre le transfert d’amines lors de
processus chimique,
 Elles reflètent l’activité et la destruction des cellules.

Transaminases Sigles
Elles sont au nombre de deux :
 Alanine Amino Transférase (ALAT)

–
= Sérum Glutamopyruvate Transférase (SGPT)

= Transférase Glutamopyruvate (TGP)
 Aspartate Amino-Transférase (ASAT)

–
= Sérum Glutamooxaloacétate Transférase (SGOT)

= Transférase Glutamooxaloacétate (TGO)

Alanine Amino Transférase (ALAT)
 Elles se retrouvent dans le foie, les reins et également en

faible quantité dans les muscles striés et dans les globules
rouges.
 Elles prédominent dans le foie. Elle est relativement

spécifique du foie,
 Elles hydrolysent les substrats possédant comme résidus

N-terminal, la L-alanine.

Alanine Amino Transférase (ALAT) Variations

 Homme : 10 - 45 UI/l,
 Femme : 10 - 35 UI/l
 Variations physiologiques en fonction du sexe, grossesse,
médicaments, alcool,
AUGMENTATION
Atteintes hépatiques

Aspartate Amino-Transférase (ASAT)
 Elles se retrouvent dans le foie, les globules rouges et dans

les muscles striés, le cœur, les reins, le cerveau et le
pancréas,
 Elles prédominent dans les muscles, en particulier dans le
muscle cardiaque,
 Elles hydrolysent les substrats possédant comme résidus
N-terminal, la L-Aspartate.

Aspartate Amino-Transférase (ASAT) Variations

 Homme : 10 - 40 UI/l,
 Femme : 10 - 35 UI/l
 Variations physiologiques en fonction du sexe, grossesse,
médicaments, alcool,
AUGMENTATION
Atteinte cardiaque
Atteinte musculaire

Transaminases
Transaminases ALAT, ASAT (SGOT, SGPT)
LIEN VIDEO
https://www.youtube.com/watch?v=2fz-UMoi5to

PARTIE 2 : PROTEINES PLASMATIQUES
PLAN
I. INTRODUCTION
II. DEFINITION DES PROTEINES PLASMATIQUES
III. EXPLORATIONS DES PROTEINES PLASMATIQUES
III.1. EXPLORATION DES PP PAR DES METHODES ELECTROPHORETIQUES
III.1.1. Méthodes électrophorétiques
III.1.2. Groupe des Albumines
III.1.3. Groupe des Globulines
A. Groupe des Alpha-globulines (-globulines)
B. Groupe des Béta-globulines (-globulines)
C. Groupe des Gamma-globulines (-globulines)
III.1.4. Interprétation des profils électrophorétiques
III.2. EXPLORATION DES PP PAR DES METHODES CHIMIQUES
III.2.1. Techniques colorimétriques
III.2.2. Techniques enzymatiques
III.2.3. Exploration des principales enzymes plasmatiques par les
techniques colorimétriques et enzymatiques
III.3. EXPLORATION DES PP PAR DES METHODES IMMUNOLOGIQUES

III.3. EXPLORATION DES PROTÉINES PLASMATIQUES
PAR DES METHODES IMMUNOLOGIQUES
Méthodes immunologiques : basées sur le caractère

immunogène de la molécule,
Le caractère immunogène ou pouvoir immunogène
se dit d'une molécule capable d’induire une réaction
immunitaire,
 Elles sont basées sur la réaction spécifique entre un
Antigène et un Anticorps,
 Elles constituent une des méthodes les plus
communes en chimie analytique pour le diagnostic,
le contrôle et le suivi des maladies.

Les différentes méthodes immunologiques utilisées en

biochimie clinique :
 Immunoprécipitation,
 Immunofluorescence,
 Radioimmunologie,
 Immunoenzymologie.
(Voir Cours Immunologie)

Les applications cliniques :
 Bilan immunologique en immunopathologie,
 Bilan immunologique en auto-immunité,
 Bilan immunologique en infectiologie et immunopathologie,
 Bilan immunologique en endocrinologie.

FIN PARTIE II
- PROTEINES PLASMATIQUES -

A suivre…

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EXPLORATION DES PROTEINES PLASMATIQUES

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Les enzymes plasmatiques :

 Ne représentent quantitativement qu’une très faible partie

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Les principales enzymes d’intérêt clinique :

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Amylase Propriétés et Rôles

 Amylase encore appelée α-amylase,

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 Valeurs de référence chez l’adulte : 10-45 U/l (30°C)

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Bilirubine Propriétés et Rôles

 Pigment jaune dans la bile (liquide sécrété par le foie), il est

 Prescrite pour diagnostiquer ou suivre une hépatopathie,

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Bilirubine Propriétés et Rôles

 Lorsqu’il y a un problème d'élimination, la bile s'accumule

Bilirubine libre + Bilirubine conjuguée = Bilirubine totale

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Bilirubine Libre / Non Conjuguée / Indirecte

 Elle est produite dans la rate et la moelle osseuse,

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Bilirubine Conjuguée / Directe

 Elle est excrétée dans la bile,

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 Valeurs de référence chez l’adulte :

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5’-Nucléotidase Propriétés et Rôles

 5’-Nucléotidase dont le sigle est 5’Nu,

 C’est une phospho-mono-estérase, qui hydrolyse les

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5’-Nucléotidase Variations pathologiques

 C’est un bon indicateur des affections du foie et des voies

 Valeurs de référence chez l’adulte :

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Gamma-Glutamyl-transférase Propriétés et Rôles

 Gamma-Glutamyl-transférase dont le sigle est GGT ou γ-GT,

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Gamma-Glutamyl-transférase Propriétés et Rôles

 La GGT est un marqueur d’anomalie du foie, souvent due à

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 Valeurs de référence chez l’adulte :

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Que signifie les Gamma-GT élevées

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Lipase Propriétés et Rôles

 Valeurs de référence chez l’adulte : 13-60 U/l

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Phosphatases Propriétés et Rôles

 Enzymes qui catalysent la séparation de l'acide

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Phosphatases Alcalines Propriétés et Rôles

 Glycoprotéines membranaires dont le sigle est PAL,

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Phosphatases Alcalines Propriétés et Rôles

 Plusieurs isoenzymes existent de composition hétérogène

 Les isoformes osseuses et hépatiques des PAL représentent

Phosphatases Alcalines Variations

 Valeurs de référence chez l’adulte : 40-130 UI/l à 37°C