Química Farmacêutica 2

Inibidores da ECA
Outubro de 2009

Eliezer J. Barreiro
Professor Titular

Eliezer J. Barreiro, outubro de 2009

 Características ideais de um fármaco anti-hipertensivo
• Ativo por via oral
• t1/2 adequado & confortável

• Ser eficaz em todos os tipos de hipertensão (endócrina ou hormonal,

neurogênica, renal e essencial 90%)

• Baixo índice de efeitos adversos sem efeitos toxicológicos a longo prazo

• $

Fármacos Anti-Hipertensivos
• Antagonistas α1-adrenérgicos (prazosin)
• Antagonistas β1-adrenérgicos (propranolol)
• Agonistas α2-adrenérgicos (clonidina)
• Bloqueadores de canais de cálcio (verapamil)
• Inibidores da ECA (captopril)
• Antagonistas de receptores da angiotensina II (losartana)
• Diuréticos (hidroclorotiazida)
INIBIDORES DA ECA

INDICAÇÕES TERAPÊUTICAS

Hipertensão

Falha Cardíaca Congestiva

EFEITOS ADVERSOS

Hipotensão postural

Tosse (noturna)

Dor de cabeça (acúmulo de bradicinina)

Fadiga

Stress renal
 Sistema Renina-Angiotensina (RAS) O
O
2HN-Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu
Leu--Val-Ile-Tyr-Ser-ENZ
Val
H3C CH3
N
Pró-renina H
CH3 HN CH3

aldosterona

1934 – Harry Goldblat (EUA)

AT1-ant. 1940 – Bruno Menendez (ARG)
Losartana 1949 – Maurício O. Rocha e Silva (BR)
Valsartana 1965 – Sérgio H. Ferreira (BR)

Amino-peptidase (angiotensina III... Angiotensina IV))

AÇÕES DA ANGIOTENSINA II

CLIVA E INATIVA
A BRADICININA

VASOCONSTRITOR POTENTE

INDUZ A LIBERAÇÃO DE ALDOSTERONA:

responsável pelo controle da excreção de K+ e
retenção de Na+ pelos rins
 CARBOXIPEPTIDASE A (CPA) E ENZIMA CONVERSORA DE
ANGIOTENSINA: PROTEÍNAS HOMÓLOGAS

Uso da CPA como modelo para o desenvolvimento de inibidores de ECA

CPA: conhecida, cristaliza facilmente e sua estrutura havia sido

determinada

ECA: embora a sua estrutura fosse desconhecida, haviam muitas

semelhanças:

Ambas são metaloproteases Zn2+-dependentes: clivam resíduos

carboxi-terminais e precisam de carga negativa no substrato
 Inibidores da ECA Nonapeptídeos ativos
Bothorops jararaca
Ondetti et al., 1971
Pyro-Glu-Trp-Pro-Arg-Pro-Gln-Ile-Pto-Pro-OH Isolamento, identificação
S. H. Ferreira e síntese
1934-
1934- resíduo de ácido Teprotide (SQ 20,881)
piro-glutâmico

Protótipo de inibidor
da ECA
Carboxipeptidase A Enzima conversora de Angiotensina

Zn++ + Zn++ H +
H O O O
N R H O
N N O
R H OH
O H H H R HO
H O Substrato peptídico
N O
O ácido 2(R)-benzilsuccínico
N O O O
R H H H Inibidor da carboxipeptidase A
H
O N O
H
otimização
O Succinil-L-prolina
O
O O O
O
O N
H S H
N O HO
Succinato de benzila
CH3 O CO 2 H
succinil-L-prolina
Captopril (capoten)
Fraco inibidor da ECA
Sítios esquemáticos de interação da carboxipeptidase A e da ECA
 MODELOS DE INTERAÇÃO DE SUBSTRATOS
COM A CARBOXIPEPTIDASE A E COM A ENZIMA CONVERSORA DE
ANGIOTENSINA (ECA)

MODELO DE LIGAÇÃO DO MODELO DE LIGAÇÃO DO

SUBSTRATO À SUBSTRATO À ENZIMA
CARBOXIPEPTIDASE A: CONVERSORA DE ANGIOTENSINA:
Sítio de ligação
Bolsa hidrogênio
hidrofóbica

2+ ECA
2+ Zn
Zn X
H
O
O H O R1
H N H
N O Proteína N O
Proteína N N
H H
R1 O R3 O
Ligação + R2
H 2N Ligação + ECA
amídica
H 2N H3N
lábil O amídica
N
H lábil Sítios de ligação
adicional com as
N cadeias laterais
ARG145

Foye's Principles of Medicinal ChemistrY, 6th Edition (2008)

 MODELOS DE INTERAÇÃO DO ÁCIDO D-2-BENZILSUCCÍNICO
E DERIVADOS COM A CARBOXIPEPTIDASE A E COM A ENZIMA
CONVERSORA DE ANGIOTENSINA (ECA)

CPA
ECA

Bolsa Sítio de ligação

2+
Zn hidrofóbica hidrogênio
O ECA
O X
O H
2+
Zn O R1
O +
H2N O O Derivados do ácido
N
H2N H D-2-benzilsuccínico
O O O
N R2
H + ECA
ARG145 H3N
N
Sítios de ligação
Ácido D-2- adicional com as
benzilsuccínico
cadeias laterais
INIBIDORES DA ENZIMA CONVERSORA DE ANGIOTENSINA (ECA)
CONTENDO O GRUPO TIOL: DESENHO DO CAPTOPRIL
O
O
L-Pro IC50= 330 µM N
O
AA L-Arg IC50= 470 µM
OH L-Phe IC50= 550 µM
L-Leu IC50= 610 µM O
L-Met IC50= 750 µM
L-Ile IC50= 1040 µM OH
L-Val IC50= 1100 µM
L-Ala IC50= 1340 µM CO2H IC50= 4800 µM
Gly IC50= 1990 µM CH2CO2H IC50= 2600 µM
L-Ser IC50= 2440 µM CH2CH2CO2H IC50= 330 µM
L-His IC50= >3000µµM CH2CH2CH2CO2H IC50= 70 µM
L-Lys IC50= >3000 µM CH2CH2CH2CH2CO2H IC50= >4000 µM
D-Phe IC50= >3000 µM

L-Pro IC50= 0,20 µM

CH2SH IC50= 1,1 µM
CH2CH2SH IC50= 0,20 µM
CH2CH2CH2SH IC50= 9,7 µM
O L-Arg IC50= 0,65 µM
L-Phe IC50= 0,43 µM
HS AA L-Leu IC50= 1,6 µM
L-Ala IC50= 0,85 µM
Gly IC50= 2,8 µM
 INIBIDORES DA ENZIMA CONVERSORA DE ANGIOTENSINA (ECA)
CONTENDO O GRUPO TIOL: DESENHO DO CAPTOPRIL

9 vezes mais ativo

CH2CH2SH IC50= 0,20 µM
O 953 vezes
mais ativo
N CH(CH3β)CH2CO2H IC50= 22 µM (S) CH(CH3β)CH2SH IC50=0,023µµM
??? CH(CH3α)CH2CO2H IC50= 1480 µM (R) CH(CH3α)CH2SH IC50=2,4 µM
O CH2CH(CH3β) CO2H IC50= 2600 µM CH2CH(CH3) SH IC50=1,1 µM
CH2CH(CH3α) CO2H IC50= 610 µM
OH CH2CH2CH2CH2CO2H IC50= >4000 µM

21500 vezes mais ativo

O O O O
H3C
HS N HS N HS N S N

O O O O
OH O O OH
IC50= 0,20 µ M IC50= 39 µ M IC50= 17 µ M CH3 IC50= 4300 µ M
H
HS N O
HS
O (S)
O O HS N
OH OH
IC50= 1100 µ M IC50= 460 µ M
CH 3
(R)
(5500 vezes -ativo) (2300 vezes -ativo) O
captopril OH
INIBIDORES DA ENZIMA CONVERSORA DE ANGIOTENSINA (ECA)
CONTENDO O GRUPO TIOL: DESCOBERTA DO CAPTOPRIL

O O
N N

CO2- CO2-
CH3
CO2- CO2-

Succinil-L-prolina D-2-metilsuccinil-L-prolina

Introdução do grupo
1981
tiol

O O
N N

CO2- CO2-
CH3
HS HS

CAPTOPRIL
3-mercaptopropanoil-L-prolina (Ki= 1,7 nM

Ondetti, Rubin & Cushman, Science 1977, 196, 441-444

INIBIDORES DA ENZIMA CONVERSORA DE ANGIOTENSINA (ECA)
CONTENDO O TIOL: ANÁLOGOS DO CAPTOPRIL
HS CH3 HS
H
(S) H
N N
Captopril (1,0)* (>1000)
O O CO2H
HO2C EUTÔMERO
HS CH3
H HS CH3
H
N (>10000) (R)
N (>120)
O
O
DISTÔMERO
HS HO2C

N (10)
O
HO2C CH3
HO2C H

HS N (>1100)
O
N HO2C
(>10000)
O
HO2C

* Valores de Ki relativos
CRISTALOGRAFIA DE RAIOS X: MODO DE INTERAÇÃO DO
CAPTOPRIL COM SEU ALVO-TERAPÊUTICO (ECA)

Figura de Nelilma C Romeiro

GLU384

Zn2+
HS CH3
H
HIS353 N
O
HO2C

Captopril
GLN281 HIS513

LYS511
TYR520

The Protein Data Bank (PDB, Código: 1UZF), http://www.rcsb.org/pdb

 INIBIDORES DICARBOXILADOS DA ECA

O
(S)
HS N
Exantema cutâneo Grupamento tiol: Novos
CH 3 perda de paladar propriedades quelantes i-ECA
O (R)

captopril OH
(Capoten®) H 3C CH 3
O
Merck
Intoxicações c/ metais
HS OH pesados (Hg; Cu; Pb; Zn)
NH 2
penicilamina (dimetilcisteína)
isolada em 1953 urina pacientes c/ O
hepatopatias tratados
NH
c/penicilina N
N CH 3
O
Bioisosterismo
O OH
clássico
O O NH
N N
O H O N
HO N N CH 3
N O
HO N CH 3
O OH
O
CH 3 Squibb
Merck H3C
O IC50 = 4,9 µ M OH S N
IC50 = 2,4 µ M
OH "lead compound"
Eleição de novo O O CH 3
protótipo O
OH
 INIBIDORES DICARBOXILADOS DA ECA: DESENHO DO
ENALAPRIL
OBJETIVOS: SUBSTITUIR O GRUPO TIOL DO CAPTOPRIL, MANTENDO A CAPACIDADE
DE COORDENAÇÃO COM O ÁTOMO DE ZINCO DA ECA

O OH
Análogos Tripeptídicos:
O R1
H
N O
A: C-terminal
R4
N B: Penúltimo aminoácido
R3 R2
OH C: Grupo N-carboximetila substituído

C B A
ENALAPRILATO
(Ki= 0,2 nM) 2+
ECA
2+ ECA Zn
Zn X
X H
H
O O O
H O
O N H
H Peptídeo N H
N OH N R1
N
R2
CH3
O O +
O O + NH3
Mimetiza a cadeia lateral H3N ECA
da fenilalanina ECA Mimetiza o estado-de-transição da hidrólise
Propriedades PK insuficientes da angiotensina-I
(BAIXA BIODISPONIBILIDADE P.O.)
 INIBIDORES DICARBOXILADOS DA ECA: DESENHO DO
ENALAPRIL
SOLUÇÃO PARA OTIMIZAR A BIODISPONIBILIDADE POR VIA ORAL:
PRÓ-FÁRMACO

O O O OH
O O
H H
N N
N N
Esterases
CH3 CH3
O OH O OH

ENALAPRIL ENALAPRILATO
~1000 vezes menos ativo
que o ENALAPRILATO

pKa = 5,49 pKa = 8,02

 CRISTALOGRAFIA DE RAIOS X: MODO DE LIGAÇÃO DO
ENALAPRILATO COM O SÍTIO RECEPTOR

Figura de Nelilma C Romeiro

GLU384

CO2H CH3
HIS353
N
N
Zn2+ H
O CO2H

LYS511 ENALAPRIL

VAL518
HIS513

TYR523 TYR520

The Protein Data Bank (PDB, Código: 1UZE), http://www.rcsb.org/pdb

 Binding do captopril X enalapril

GLU384
GLU384

Zn2+
HIS353 HIS353
Zn2+

HIS513 LYS511

GLN281
VAL518
HIS513
TYR520 LYS511 TYR523 TYR520
 SAR DOS INIBIDORES DA ECA
O

(CH2)n grupo quelante

de Zn2+ N-anel

ANEL NITROGENADO: GRUPO CARBOXILATO

ANÉIS HETEROCÍCLICOS HIDROFÓBICOS >> POTÊNCIA

SÍTIOS QUELANTES DE Zn2+:

OH

tiol carboxila P

C-ESTEREOGÊNICO COM CONFIGURAÇÃO ~ L-amino ácidos

 O H O
O H O
* N *
N H3C O * N *
H3C O N
CH 3 *
O
O
OH
OH ramipril
lisinopril
NH 2
Biodisponibilidade po ~30% t1/2= 12h----dose única

O OH
O H O H O

N * N *
* * H3C O N *
H3 C O
CH 3
O N
quinapril
benzapril O

HO Biodisponibilidade po ~60%

Captopril Biodisponibilidade po ~65% t1/2= 2h----doses fracionadas

 CH3
HO2C S
O O S
N CH3
H3C CH3
O N
O N
H3C P H
O O O CO2H
O

fosinopril espirapril
CH3 Renormax

OCH3
O O CH3
CH3H H OCH3

N O O
N CH3
H
O CO2H N
N
trandolapril H
O CO2H
moexepril
Anti-hipertensivos inibidores da enzima conversora
valsartana
 Bibliografia
Gringauz, A (1997) Introduction to medicinal chemistry: how drugs act and why,Wiley-VCH,
New York, pp.417-499
Foye, WO; Lemke, TL; Williams, DA (1995) Principles of medicinal chemistry, Williams &
Wilkins, USA, p. 388-404

Leitura Suplementar
Siegel, D; Lopez, J; Meier, J; cunningham, F (2001) Changes in the pharmacologic
treatment of hypertension in the department of veterans affairs 1997-1999: decreased use
of calcium antagonists and increased use of β.blockers and thiazide diuretics pain Am. J.
Hypertens. 14: 957-962
Tabibiazar, R; Jamali, AH; Rockson, SG (2001) Formulating clinical strategies for
angiotensin antagonism: a review of preclinical and clinical studies Am. J. Med.. 110:
471-480

Eliezer J. Barreiro, outubro de 2009