Manual de Prácticas de Laboratorio de Farmacología

PRACTICA No. 4 Autor: Dr. Daniel Valtierra Guerra

FARMACOCINÉTICA
CURVAS DE ABSORCIÓN Y ELIMINACIÓN DE FÁRMACOS
IDENTIFICACIÓN DE FÁRMACOS Y SUS METABOLITOS EN TEJIDOS Y
LIQUIDOS ORGANICOS.
INTRODUCCION
El incremento en el uso de las llamadas drogas recreativas1 ha obligado a los Centros
Hospitalarios a disponer de exámenes de laboratorio para identificar toda clase de fármacos,
principalmente en pacientes que ingresan con cuadros de intoxicación causados por
sobredosis.
El número total de pacientes expuestos a sobredosis es difícil de estimar, porque muchos
lo hacen en sus domicilios y se recuperan sin tratamiento. En algunos países (EE.UU., Unión
Europea) y en las grandes ciudades de todo el mundo, los reportes de casos de sobredosis
accidental o deliberada, que ingresan a los hospitales han alcanzado cifras alarmantes. Más
de un millón de pacientes por año en Estados Unidos.2
En los Hospitales privados y de las Instituciones de Salud (IMSS, ISSSTE), los exámenes
cualitativos y cuantitativos de los fármacos involucrados en sobredosis generalmente no es
problema: Disponen de equipos automatizados 3 que facilitan la rápida identificación y
pueden dar el tratamiento oportuno.
El problema diagnóstico es crítico en muchas de las clínicas y hospitales que cuentan con
pocos recursos materiales y escaso personal especializado y que reciben un paciente en
estado de coma. Por tales razones, los estudiantes de Medicina en Servicio Social deben
conocer al menos aquellas técnicas de laboratorio que les orienten rápidamente al diagnóstico
y les permitan proporcionar el tratamiento correcto y oportuno.
Los signos clínicos que se observan en los pacientes en estado de coma son similares y
demandan conocimientos especializados de Patología Neurológica y de Toxicología Forense.
Por otro lado, la mayoría de los casos de sobre dosis de fármacos esta limitado a unas
pocas clases de compuestos relacionados que pueden ser identificados en muestras de sangre,
orina y otros líquidos orgánicos (contenido gástrico) en pacientes vivos.
Los métodos para la identificación de drogas son empleados: 1) Cuando no hay indicios o
pistas que permitan una identificación precisa y 2) cuando hay evidencias de la naturaleza de
la droga causal y solo se necesita cuantificarla para tener un control o referencia.
En el primer caso:
Detección rápida directa en orina para las drogas que más comúnmente causan
intoxicaciones por sobredosis: alcohol, antidepresores tricíclicos, paracetamol, salicilatos,
fenotiazinas, compuestos triclorados (tricloroetano, tricloroetanol, ácido tricloracético)
1
El término de Drogas Recreativas se ha empleado para designar el uso ocasional de drogas psicotrópicas por
algunos sectores de la población económicamente fuerte.
2
Isolation and Identification of Drugs; EGC Clarke, Vol. I, pág. 3; The Pharmacutical Press, London; 1974
3
Una ventaja importante es que son capaces de identificar y cuantificar varios compuestos simultáneamente de
muestras muy pequeñas de líquidos corporales; aunque muy eficientes y rápidos, los análisis son menos
precisos que los métodos analíticos tradicionales. Se sacrifica la precisión por la rapidez y el menor costo de los
exámenes. Los equipos automatizados son muy costosos y rápidamente quedan obsoletos

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Detección de drogas en extractos de especimenes (sangre, orina, contenido gástrico) en
pacientes (Farmacología Clínica, Farmacología Experimental, Terapéutica Clínica y
Toxicología Clínica) o especimenes tomados en autopsias (Toxicología Forense)
OBJETIVOS
El alumno, al término de esta práctica:
1. Demostrará que un fármaco, administrado por vía oral a un animal de
experimentación, se absorbe en el tubo digestivo y es posible comprobar su
presencia en la sangre y otros líquidos y tejidos del organismo
2. Demostrará que algunos fármacos pueden excretarse a través del riñón y
concentrarse en la orina.
3. Describirá un método de extracción de medicamentos y sustancias tóxicas de los
líquidos orgánicos (sangre, liquido cefalorraquideo, orina) y de algunos tejidos.
4. Aplicará los conocimientos adquiridos en el ámbito de la Medicina Forense,
Terapéutica Clínica y Farmacología Experimental.
5. Explicará los fundamentos de un método de análisis químico cuantitativo para
determinar la concentración de un fármaco determinado en los líquidos orgánicos de
un animal de experimentación.
MATERIAL BIOLÓGICO
1 perro (de 10 a 12 K de peso) para todos los equipos
FÁRMACO:
1 frasco de Sulfadiazina en polvo o en tabletas de 500 mg
REACTIVOS
Para cada equipo de trabajo de 5 alumnos
Solución A: 30 ml de Solución de ácido Tricloroacético al 3%
Solución B: 10 ml de solución de Nitrito de Sodio al 1%
Solución C: 10 ml de sulfamato de amonio al 0.5%
Solución D: 10 ml de solución de Clorhidrato de Naftil etilenodiamina al 0.1%
Agua destilada: 250 ml
MATERIAL Y EQUIPO (La cantidad de material dependerá de la cantidad de equipos
de 5 alumnos que desarrollen la práctica simultáneamente; lo que depende de la capacidad
del Laboratorio de Farmacología y del número de Profesores Instructores de Prácticas.
Espectrofotómetro: 1 para todos los Equipos.
Papel - filtro
Jeringas desechables de 5 ml, con aguja calibre 20
Matraces de Herlenmeyer de 50 ml

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Matraces bola de fondo plano de 50 ml
Tubos de ensayo de 100 x 20 mm
Embudos de cristal
Pipetas lineales graduadas de 1ml
Pipetas lineales graduadas de 10 ml
Gradillas para tubos de ensayo
Soportes metálicos con aro
Probetas graduadas de 100 ml
50 a 100 gramos de carne molida cruda fresca
Equipo Quirúrgico de disección
Solución de Heparina sódica
PROCEDIMIENTO
PRIMERA FASE
Cada equipo recibirá un perro previamente pesado por el Instructor: _________Kg
Se administra el Fármaco en estudio (100 mg / K de peso del animal) mezclado con un
poco de carne; inmediatamente después que el animal ingiera el fármaco, procederán a
anestesiarlo con pentobarbital sódico por vía IV (33 mg /K). Una vez lograda la anestesia
procederá a extraer las siguientes muestras:
Una muestra de sangre venosa, por punción percutanea en la región inguinal
Una muestra de orina: por punción suprapúbica, directa de la vejiga
Deberán anotar la hora en que se extrajo cada muestra:
SANGRE _______________ ORINA _____________
Antes de que transcurran 30 minutos, con la ayuda del Instructor:
Efectuarán una laparatomía media infraumbilical y canalizar ambos uréteres para colectar
orina en una probeta de 100 ml cada 30 minutos
Al mismo tiempo efectuarán una disección de la región inguinal para canalizar la vena
femoral y poder extraer muestras de 1 ml de sangre
Simultáneamente a la recolección de las muestras de orina. Una vez canalizada la vena se
procede a administrar heparina 1000 UI para evitar la obstrucción de los vasos.
Anote los datos en la siguiente tabla:

Hora Muestra %T mg % Muestra %T mg %

Sangre 1 Orina 1

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Sangre 2 Orina 2
Sangre 3 Orina 3
Sangre 4 Orina 4
Sangre 5 Orina 5
Sangre 6 Orina 6
Sangre 7 Orina 7
Sangre 8 Orina 8

SEGUNDA FASE
Una vez que hayan tomado todas las muestras se procederá a extraer y cuantificar el
fármaco de cada una de ellas. Se empleará el Método de Bratton – Marshall que se basa en la
formación de un compuesto diazoico que reacciona con la sal de Naftil-etilendiamina y
forma un complejo que toma un color rojizo, cuya intensidad es proporcional a la cantidad
del fármaco en la muestra. La intensidad del color puede leerse en el espectrofotómetro en %
de transmitancia. Las lecturas pueden compararse en tabla adjunta (página 5) previamente

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establecida que muestra la concentración del compuesto coloreado en mg /dl para cada
lectura en % de T
METODO
Estudie los esquemas que se muestran en la hoja anterior. Marque cada tubo para
identificar cada muestra, por ejemplo S1, S2 u O1, O2. etc.
A Precipitación de proteínas en medio ácido: Introduzca 1 ml de la muestra (sangre u
orina) en el matráz de Herlenmeyer que contiene la solución A
B Filtre el contenido del matraz a través del papel – filtro, reciba el filtrado en un
matraz bola de fondo plano. El filtrado debe ser incoloro y transparente.
C Con una pipeta de 10 ml introduzca 10 ml del filtrado a un tubo de ensayo (la pipeta se
desecha, debe usar una pipeta limpia para cada muestra problema)
D Con una pipeta de 1 ml introduzca 0.5 ml de la solución B, agítelo y deje reposar 3
minutos.
E Con otra pipeta de 1 ml agregue 0.5 ml de la solución C, agítelo y deje reposar 2
minutos
F Con una tercera pipeta de 1 ml agregue 0.5 ml de la solución D, agite y deje reposar un
minuto. En este momento podrá observar un color rojizo de intensidad variable.
G Agregue 8.5 ml de agua destilada con una pipeta limpia y seca, agite y deje reposar 10
minutos.
TERCERA FASE
Cuantificación del fármaco en los extractos coloreados.
Con la ayuda del instructor leerá la Transmitancia de la solución para determinar la
concentración del fármaco proveniente de cada muestra problema. (el color de las soluciones
persiste varias horas)
Anote los valores obtenidos en la tabla de la página 3, y con esos datos construya una
gráfica de absorción y eliminación.
INFORME
Sobre la base de los objetivos de esta práctica y de los resultados obtenidos, anote sus
propias conclusiones y comentarios personales en la hoja anexa, con letra manuscrita y
legible. El Informe Definitivo deberá ser redactado por el equipo.
El Informe podrá ser entregado por escrito o en un disco de 3 ½ pulgadas (floppy disk)
Incluyendo Marco Teórico, Material y Método, Resultados Obtenidos, Discusión y
Comentarios, Bibliografía, Anexos (tabla de resultados y gráficas)

Tabla para Convertir (% de T) en mg / dl de sulfanilamida

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%T mg / dl %T mg / dl %T mg / dl
2 90.0 32 25.4 62 9.9
3 80.0 33 24.7 63 9.5
4 74.0 34 24.0 64 9.0
5 68.7 35 23.3 65 8.7
6 64.5 36 22.7 66 8.4
7 61.0 37 22.0 67 8.0
8 58.0 38 21.5 68 7.5
9 55.0 39 20.7 69 7.2
10 53.0 40 20.0 70 7.0
11 50.8 41 19.5 71 6.8
12 48.5 42 19.0 72 6.2
13 46.5 43 18.5 73 5.9
14 45.0 44 18.0 74 5.5
15 43.2 45 17.5 75 5.2
16 41.5 46 16.8 76 5.0
17 40.0 47 16.4 77 4.7
18 39.0 48 16.0 78 4.3
19 37.5 49 15.4 79 4.0
20 36.5 50 15.0 80 3.7
21 35.5 51 14.5 81 3.5
22 34.0 52 14.0 82 3.1
23 33.2 53 13.5 83 2.9
24 32.2 54 13.0 84 2.5
25 31.5 55 12.6 85 2.2
26 30.2 56 12.3 86 2.0
27 29.8 57 11.8 87 1.7
28 28.5 58 11.4 88 1.5
29 27.5 59 11.0 89 1.1
30 27.0 60 10.6 90 1.0
31 26.1 61 10.2

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