Inativao da Enzima Peroxidase

Objetivo:
O objetivo observar a inativao da enzima peroxidase utilizando batatas.

Introduo terica:
Estruturalmente, as peroxidases podem ser divididas em quatro classes: *peroxidases bacterianas; *peroxidases de origem animal; *peroxidases fngicas; *peroxidases de plantas. As peroxidases podem tambm ser divididas quanto presena de um grupo heme, ou seja, podem ser classificadas como hemicas ou no-hemicas. As peroxidases hemicas catalisam a peroxidao de substratos usando o on de ferro presente no grupo heme. As peroxidases no-hemicas, tambm conhecidas como peroxirredoxinas (EC 1.11.1.15), usam cistenas com atividade redox no seu centro a tivo. Nos processos industriais podemos inativar as enzimas por um p rocesso chamado branqueamento, antes do processamento do alimento pela inativao da enzima peroxidase. A enzima peroxidase considerada uma das enzimas mais termorresistentes. As peroxidases tm um papel importante na desintoxicao celular ao eliminar o perxido de hidrognio, que uma espcie reativa de oxignio. Os substratos das peroxidases so de natureza bastante diversa, incluindo-se protenas como o citocromo c, pptidos como a glutatio na, pequenas molculas como o NADPH e cidos gordos. A catalase, enzima que catalisa a dismutao do perxido de hidrognio, tambm uma peroxidase. A glutationa peroxidase (EC 1.11.1.9) oxida a glutationa; esta molcula, um tripptido na forma reduzida, dimeriza quando oxidada, atravs da formao de ligaes dissulfureto entre dois pptidos. As peroxidases de cidos graxos so encontradas em plantas superiores e catalisam a peroxidao de cidos graxos de cadeia longa.

Em peroxidases hemicas:
As peroxidases hemicas possuem um grupo heme, em que o on de ferro se encontra no estado de oxidao Fe(III) entre ciclos catalticos. Uma molcula de perxido oxida este on, formando a espcie ferrilo, Fe(IV)=O (um tomo de oxignio ligado por uma ligao dupla ao on Fe4+). O ferrilo uma espcie qumica com alta capacidade oxidante, reduzindo-se quando oxida o substrato orgnico da peroxidase. No fim do ciclo cataltico, o ferro volta ao estado de oxidao Fe3+.

Em peroxidases no hemicas:
Uma cistena existente no centro ativo das peroxirredoxinas oxidada por uma molcula de perxido de hidrognio a S -hidroxicistena, um cido sulfnico. Esta cistena forma ento uma ligao dissulfureto com a cadeia lateral de outra cistena da peroxirredoxina. Esta ligao qumica constitui uma forma oxidada das cistenas e a sua reduo qumica feita por um substrato orgnico. A peroxidase (PO) est envolvida em muitas das reaes metablicas e processos fisiolgicos dos tecidos vegetais. Essa enzima participa no processo de lignificao e a presena de numerosas isoperoxidases, as quais podem ter funes especificas na biosntese da lignina A enzima peroxidase conhecida por sua capacidade de remoo de grupamentos fenlicos e aminas aromticas de solues aquosas e tambm a descolorao de efluentes da indstria txtil. O tratamento com peroxidase resulta na remoo de grupamentos fenlicos txicos dos efluentes industriais, usando perxido de hidrognio no processo. A enzima peroxidase tem ampla distribuio no reino vegetal, estando relacionada apermeabilidade das membranas, formao da parede celul ar, regulao do nvel de cido indolactico, do etileno e da dormncia das sementes. A ativ idade desta enzima, que utiliza oH2O2 para oxidar um grande nmero d e doadores de hidrognio, controlada por um gene dominante.

Perguntas sobre a enzima peroxidase

1- Qual a reao catalisada pela peroxidase? R: A reao catalisada por esta enzima uma rea o de dismutao, ou seja, o substrato atua tanto como redutor como oxidante. Esta reao tambm ocorre na ausncia da catalase, mas mais lentamente, devido presena de quantidades vestigiais de meta is em soluo (pela chamada rea o de Fenton). 2- Qual a fonte da peroxidase neste experimento?

R:A fonte usada nesse experimento as batatas. 3- Como a reao de formao da colorao marrom no teste feito para determinar a atividade peroxidsica? R: Depois de os pedaos das batatas serem fervidos na agua elas foram cortadas ao meio e foi se pingado sobre elas uma gota de H 2 O2 e uma gota de guaiacol, de depois de alguns segundos as duas partes da batata onde foi pingado os elementos, comeou a escurecer e ficar amarronzado. 4- Qual a importncia dessa enzima em processamento de alimentos? R:A enzima peroxidase ajuda na preservao dos alimentos.

Procedimento:
No experimento foi se usado batatas como fonte da enzima peroxidase; primeiramente foi se pego uma batata e cortado em 20 cubos de 02 cm, depois disso os 20 cubos foram deparados de 10 em 10. Depois disso foi se colocado 350 ml de agua no bequer e foi fervida at atingir aos 100C, depois disso os primeiros 10 cubos da batata foram colocadas nessa agua, e a cada 1 minuto uma amostra era tirada usando uma pina, colocada em cima da tabua de cortar carne forrada com papel alumnio, e assim essa amostra era cortada ao meio usando uma faca limpa, (limpa porque assim no correria o risco de haver interferncia de outros tipos de enzimas) e sobre essas duas partes eram pingadas respectivamente uma gota de H2 O2 a 10%e uma gota de guaiacolpara observar a inativao da enzima peroxidase. Esse foi o resultado: (Tonalidade Marrom) Tempo (minutos) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 2 cm +++ +++ +++ ++ + -

Os outros 10 cubos foram colocados em Banho Maria a 80 e ali a cada 10 minutos se era tirado um amostra e era feito o mesmo processo dos outros 10 cubos, que era cortar o cubo ao meio e depois pingava uma gota de H2 O2 a 10% e uma gota de guaiacol sobre as duas partes, e assim se era observado a inativao da enzima peroxidase, esse foi o resultado: (Tonalidade Marrom) Tempo (minutos) 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 2 cm +++ +++ ++ + + + -

Materiais:
y y y y y y y Faca Tabua De Cortar Carne Papel Alumnio Bequer Banho Maria Bico de Bunsen Pina

Interpretao:
As peroxidases (EC 1.11.1) so um grupo de enzimas oxirredutases que oxidam substratos orgnicos, tendo o perxido de hidrognio como molc ula aceitadora de eltrons. A reao denominada peroxidao, sendo descrita pela equao:

Xreduzida + H2O2 (peroxidase + cofator) -----> Xoxidada + H2O Nesta equao, X a molcula que sofre peroxidao (substrato). A estrutura da enzima peroxidase dividida em quatro partes tais como a:

   

peroxidases bacterianas; peroxidases de origem animal; peroxidases fngicas; peroxidases de plantas; Essa enzima dividia tambm em duas classes: Hemicas:Essas peroxidases catalisam a peroxidao de substratos usando o on de ferro. No Hemicas:Essas usam casena com atividade redox no seu centro ativo.

As peroxidases tm um papel importante na desintoxicao celular ao eliminar o perxido de hidrognio, que uma espcie reativa de oxignio.Alm disso a enzima peroxidase ajuda no processamento e conservao dos alimentos. Nos processos industriais podemos inativar as enzimas por um processo chamado branqueamento, antes do processamento do alimento pela inativao da enzima peroxidase. A enzima peroxidase considerada uma das enzimas mais termorresistentes. A enzima peroxidase tem ampla distribuio no reino vegetal, estando relacionada a permeabilidade das membranas, formao da parede celular, regulao do nvel de cido indolactico, do etileno e da dormncia das sementes. A atividade d esta enzima, que utiliza o H 2 O2 para oxidar um grande nmero de doadores de hidrognio, controlada por um gene dominante.

Concluso:
Ocorreu tudo bem no experimento, embora que alguns resultados tiveram que ser fictcios pois no houve tempo de esperar o resultado das amostras que estavam em Banho Maria em 80C, porque eram 10 minutos para retirar cada amostra, o escurecimento foi bem visvel, o tom amarronzado, como foi mostrado nas tabelas, e se levava poucos segundos aps pingar os elementos H 2 O2 e guaiacol a reao comear, tudo ocorreu bem, e deu para entender um pouco mais sobre a inativao da enzima peroxidase.

Referncias Bibliogrficas:
http://pessoal.educacional.com.br/up/50280001/2822570/t194.asp?ale=36390 http://pt.wikipedia.org/wiki/Peroxidase http://www.ufpel.edu.br/cic/2009/cd/pdf/CA/CA_01890.pdf