Microrganismos na Indstria

Os microrganismos tem sido explorados ao mximo e esto cada dia mais, presentes na indstria e na economia do mundo. Esse processo de utilizao de organismos vivos na indstria para modificao do ambiente humano pode ser chamado de Biotecnologia. Como exemplos podemos citar a utilizao de microrganismos nos produtos farmaceuticos (antibiticos, esterides, insulina), produtos qumicos (solventes, acetonas), bebidas alcolicas (cerveja, vinho), vinagre, vacinas, suplementos alimentares, laticnios (queijo, iorgurte), na minerao e na indstria do petrleo. A seguir comentaremos sobre antibiticos e laticnios para exemplificar como os microrganismos fazem parte da biotecnologia.

ANTIBITICOS
HARAGUCHI define antibiticos como substncias qumicas derivadas de organismos vivos ou produzidos por eles, capazes de inibir processos vitais de outros organismos. Esses organismos em sua maioria so bactrias. Observado que h muita variao quanto classificao dos antibiticos, dispomos os que consideramos de maior interesse para um melhor entendimento de como os microorganismos fazem parte dos antibiticos. 1. Origem - Segundo CASAL em Prospeco de bactrias produtoras de antibiticos os microorganismos produtores de antibiticos distribuem-se por trs grupos de organismos formadores de esporos: fungos filamentosos (ex. Penicillium chrysogenum), bactrias formadoras de endsporos (ex. Bacillus subtillis) e bactrias actinomicetas ( ex. Streptomyces griseus).

* BFE Bactria formadora por endsporos; F fungo; A actomiceto.

2. Toxicidade Seletiva - a capacidade de atuar num determinado microrganismo seletivamente, no atingindo ao hospedeiro. 3. Espectro de ao - Pode ser amplo ou pequeno, diferenciando-se pela diversidade de organismos afetados 4. Sntese - Microbiana - tem origem geralmente por uma ou poucas bactrias (actinomicetos) e vrios tipos de fungos filamentosos. Qumica - Sulfonamidas, Trimetoprim, Cloranfenicol, Isoniazida alm de outros antivirais e antiprotozorios. Semi-sinttica - so antibiticos naturais modificados pela adio de grupamentosqumicos. 5. Tipos de ao - O antibitico pode agir de forma eliminatria (bactericidas) ou por inibio de crescimento(bacteriostticos) do organismo. Os principais antibiticos que so considerados bactericidas, so: Amoxicilina, ampicilina, bacitracina, canamicina, carbenicilina, cefalosporinas, estreptomicina, gentamicina, oxacilina, penicilina, polimixina, rifampicina. E os considerados

bacteriostticos so: cido nalidxico, eritromicina, lincomicina, tetraciclina.

nitrofuranos e

6. Ao predominante De acordo com HARAGUCHI: y Ao sobre germes gram-positivos: bacitracina, eritromicina, penicilina; y Ao sobre germes gram-negativos: canamicina, colistina, neomicina; y Ao sobre micobactrias: canamicina, cicloserina, estreptomicina; y Ampla ao: cloranfenicol, tetraciclina; y Ao antimictica: anfotericina, fungicidina, griseofulvina; y Ao antiprotozoria: fumagilina, paromomicina. 7. Estrutura qumica Segundo a estrutura qumica, HARAGUCHI classifica os antibiticos em: y derivados de monopeptdios: cicloserina, azaserina; y derivados do cido; y aminopenicilnico e anlogos: penicilinas, cefalosporinas; y derivados de propanodiol: cloranfenicol; y derivados de hidrocarbonetos aromticos: tetraciclinas, rifamicinas; y derivados macroldicos: estreptomicina, neomicina, vancomicina; y antibiticos polinicos: anfotericina, nistatina; y antibiticos polipeptdios: bacitracina, polimixina. 8. Mecanismos de ao Conforme o artigo da UNIVERSO DA SADE (2010), os mecanismos de ao do antibitico e suas devidas explicaes so as seguintes: a. Inibio da sntese da Parede Celular Estes agentes antimicrobianos correspondem aos mais seletivos, apresentando um elevado ndice teraputico. -lactmicos - Penicilinas, ampicilina ecefalosporinas: contm em sua estrutura um anel -lactmico, que interage com protenas denominadas PBPs (Penicillin Binding Protein), inibindo a enzima envolvida na transpeptidao, responsvel pela ligao entre as cadeias de tetrapeptdeos do peptideoglicano. Com isso, h o impedimento da formao das ligaes entre os tetrapeptdeos de cadeias adjacentes de peptideoglicano, ocasionando uma perda na rigidez da parede celular. Acredita-se tambm que tais drogas podem atuar promovendo a ativao de enzimas autolticas, resultando na degradao da parede. Bacitracina - Interfere com a ao do carreador lipdico que transporta os precursores da parede pela mebrana. Resulta na no formao das ligaes entre o NAM e NAG. Vancomicina - Liga-se diretamente poro tetrapeptdica do peptideoglicano. ainda a droga de escolha para linhagens resistentes de S. aureus. b. Ligao Membrana Citoplasmtica So agentes antimicrobianos que muitas vezes exibem menor grau de toxicidade seletiva.

Polimixinas - Ligam-se membrana, entre os fosfolipdeos, alterando sua permeabilidade (detergentes). So extremamente eficientes contra Gram negativos, pois afetam tanto a membrana citoplasmtica como a membrana externa. Ionforos - Molculas hidrofbicas que se imiscuem na Membrana citoplasmtica, permitindo a difuso passiva de compostos ionizados para dentro ou fora da clula. c. Inibio da sntese de cidos nuclicos Possuem uma seletividade varivel. Novobiocina - Se liga a DNA girase, afetando o desenvolvimento do DNA, impedindo sua replicao. Quinolonas - Inibem a DNA girase, afetando a replicao, transcrio e reparo. Rifampicina - Ligao RNA polimerase DNA-dependente, bloqueando a transcrio. d. Inibio da traduo (Sntese protica) So geralmente bastante seletivos. Correspondem a um dos principais grupos de agentes antimicrobianos, uma vez que a sntese protica corresponde a processo altamente complexo, envolvendo vrias etapas e diversas molculas e estruturas. Estreptomicina e gentamicina - Liga-se subunidade ribossomal 30S, bloqueando-a e promovendo erros na leitura do mRNA. Interferem com a formao do complexo de iniciao. Tetraciclina - Liga-se subunidade ribossomal 30S (stio A), impedindo a ligao do aminoacil-tRNA. Cloranfenicol - Liga-se subunidade ribossomal 50S e inibe a ligao do tRNA e da peptidil transferase, inibindo a elongao. Eritromicina - Liga-se subunidade ribossomal 50S e inibe a elongao. e. Antagonismo metablico Geralmente ocorre por um mecanismo de inibio competitiva. Sulfas e derivados - Inibio da sntese do cido flico, pela competio com o PABA. Trimetoprim - Bloqueio da sntese do tetrahidrofolato, inibindo a dihidrofolato redutase. Isoniazida - Afeta o metabolismo do NAD ou piridoxal, inibe a sntese do cido miclico - "fator corda". Isolamento e Identificao de bactrias produtoras de antibiticos Para explicar o processo de utilizao dos microrganismo nos antibiticos vamos considerar documento de CASAL: Prospeco de bactrias produtoras de antibiticos. CASAL d nfase s bactrias actomicetas do gnero Streptomyces, por considerar a mais utilizada para esse fim. As bactrias actomicetas do gnero Streptomyces so produtoras por exemplo dos antibiticos tetraciclina e nistatina entre outros. E tem como mecanismo de ao a interferncia nos mecanismos de sntese proteica Os meios de cultura e sua composio so: Meio Amido-Casena (AC ) ou agar de Mueller-Hinton(extrato de carne, casena hidrolisada , amido, agar, gua destilada. Ph 7,4) e Meio Nutriente Agar (NA) (extrato de carne, peptona, agar, gua destilada)

Para o isolamento da bactria, obtida uma amostra de solo arenoso, onde so encontradas mais facilmente. Dessa amostra mistura-se 1g com 1g CaCO3 numa caixa Petri. Incuba-se temperatura ambiente ( 25C) durante uma semana. Adiciona-se 0,1g dessa mistura a 100ml de H2O desmineralizada esterilizada. Agita-se vigorosamente. Aps deve-se inocular utilizando a tcnica de espalhamento em superfcie, 100 l da suspenso anterior numa placa de meio Amido-Casena (AC). Essas placas devem ficar incubadas durante 6 a 7 dias a 28C. Ento identifica-se as colnias de bactrias actinomicetas atravs da sua morfologia tpica, ou seja, suas caractersticas. Na identificao de estirpes produtoras de antibiticos, so transferidas 3 colnias distintas de actonomicetas isoladas para 2 placas com meio Nutrient Agar (NA). Incuba-se as placas a 25C durante 4 ou 5 dias. Nessas placas, pipetado uma suspenso de microrganismos teste (Escherichia coli ou Bacillus subtilis) com gua. Faz-se ento mais algunas procedimentos e deixa solidificar para encubar as placas durante uma noite por 37C. Da regista-se a presena de halos de inibio do crescimento de E. coli e B. subtilis, na vizinhana das massas celulares das bactrias actinomicetas selecionadas. O teste de Kirby-Bauer ou antibiograma um dos mtodos utilizados com este objetivo. Este mtodo consiste na colocao de discos com concentraes conhecidas de determinado antibitico, na superfcie de uma placa contendo um meio slido apropriado e previamente inoculada com o microrganismo cuja suscetibilidade se pretende testar. O antibitico difunde-se a partir do disco para o meio circundante, formando um gradiente de concentrao que decresce desde o permetro do disco at distncias mais elevadas. A eficcia de um antibitico determinada preliminarmente pelo dimetro do halo de inibio de crescimento observado. Mtodo de produo dos antibiticos Para cada tipo de antibitico h um mtodo de produo, que em sua maioria realizada por meio da fermentao. Como exemplo podemos citar a penicilina que produzida utilizando processos submersos em tanques fermentadores de 40 a 200 mil litros. Utiliza-se fermentadores aeroelevados. Trata-se de um processo aerbico em que o microrganismo Penicillium chrysogenum cresce num meio orgnico complexo contendo acares e em regime de adio de substrato (para manter o microrganismo a crescer durante mais tempo). A penicilina, como a maior parte dos antibiticos, um produto do metabolismo secundrio. Na fase inicial da fermentao assegura-se o crescimento rpido do microrganismo e em seguida, numa segunda fase, otimiza-se a produo de penicilina. Durante a fase de produo fornece-se continuamente glucose sendo necessrio regular a sua concentrao a um certo nvel para evitar efeitos de represso catablica originados a concentraes de acar maiores. Na fermentao tpica de penicilina h uma fase de crescimento de aproximadamente 40 horas, com um tempo de duplicao de 6 horas, durante o qual se forma a maior parte da massa celular. Alimentando o meio com diferentes componentes, a fase de produo pode estender-se at 120-160 h. Aproximadamente 65% da fonte de carbono metabolizada utilizada para os gastos energticos, 25% para crescimento e somente 10% para a produo de penicilina. Meio de cultivo tpico da penicilina Melaco, gorduras animais, gua de milho farinha de soja, extrato de levedura, soro de leite e lactose.