UNIVERSIDAD DE SONORA

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud. Departamento de Ciencias Qumico Biolgicas.

Reporte 1: Catalasa. Bioqumica II. Alumnos: Encinas Valenzuela Brenda. Reyes Guillen Juan Saul. Tllez Escobedo Daniela Grissel.

Hermosillo, Sonora, a 13 septiembre del 2010.

INTRODUCCIN. El subgrupo 1.11. de la Clasificacin de las Enzimas incluye protenas que utilizan el Perxido de Hidrogeno como oxidante. La CATALASA (E.C.1.11.1.6.) (Perxido de Hidrgeno: perxido de hidrgeno Oxidoreductasa) es un enzima ampliamente distribuida en la naturaleza y muy importante pues su funcin es la destruccin del Perxido de Hidrgeno producto de varias oxidaciones biolgicas. Es muy semejante en estructura y funcin a la peroxidasa. La descomposicin del perxido de hidrgeno se puede considerar como la oxidacin de una molcula por otra de ah la siguiente ecuacin describa la reaccin. H2O2 + H2O2 ----------> O2 + 2 H2O Catalasa. La Catalasa del Hgado adems del perxido de hidrgeno puede utilizar como substrato, alquilos de perxido de hidrgeno, (R-O-O-R) y como segunda molcula puede utilizar varias sustancias orgnicas, como donadores de hidrgeno. Por ejemplo etanol, formato, cido nitroso, compuestos tiol y pirogalol. La enzima comnmente distribuida en las clulas aerobias tiene un peso molecular de 250, 000 con cuatro grupos heme y un tomo de hierro en el centro de cada heme. El mecanismo de reaccin es a travs de la formacin de un complejo catalasa-perxido de hidrgeno. OBJETIVO. Observar y comprobar la actividad e inhibicin de la enzima catalasa, utilizando sangre diluida 1:50. H2O2 + H2O2 ----------> O2 + 2 H2O Catalasa. Se utilizarn inhibidores de las enzimas, tales como metales pesados, CN- y altas temperaturas. MATERIALES Y MTODOS. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Gradilla Vaso de precipitados de 500 ml. Vaso de precipitados de 250 ml. 4 pipetas de 5 ml. 9 tubos de ensaye de 15x150. Pinzas para tubo de ensaye. Mechero. Tripi. Tela de asbesto.

Procedimiento. 1. 2. 3. 4. 5. En una gradilla coloque cuatro tubos de ensaye numerados del 1 al 4. Pipetee 2.0 ml. de Perxido de Hidrgeno al 3% a cada uno de los cuatro tubos. Agregue 5 goas de Cianuro de Sodio al 5% al tubo No. 3. Agregue 5 gotas de Nitrato de Plomo al 5% al tubo No. 4. En un tubo de ensaye aparte, tome 3 ml. de sangre diluida 1:50, y calintelos en agua hirviendo por 5 minutos. Agrguelo al tubo No.2. 6. Aada 3 ml. de sangre diluida a los tubos 1, 3 y 4. 7. Agite suavemente pero rpidamente y lleve los tubos a bao de agua a 37oC. 8. Djelos estar por 5 minutos, haga sus observaciones y anote sus resultados.

Nota: como la reaccin es muy rpida, la observacin no debes descontinuarse desde el momento de aadir la sangre, hasta dar por terminada la reaccin al cabo de 5 minutos. RESULTADOS. La sangre se oscureci, tornndose a un color grisceo verdoso esto fue al calentar la sangre. -Despus al agregar la sangre caliente al tubo num.2 no cambio de color. -En el tubo num.1 la reaccin fue rpida y cambio de color a amarillo -En el tubo num.3 el tubo fue mucho ms rpido en comparacin al tubo num.1 -En el tubo num.4 tardo mucho en hacer reaccin cambio de color a rojo claro CONCLUSIONES. En esta prctica se pudo comprobar la actividad de la enzima catalasa en la sangre y como funciona como antioxidante en el cuerpo concluyendo as que es de vital importancia para el cuerpo humano porque es el encargado de eliminar residuos qumicos de productos que consumen con frecuencia algunas personas pero que perjudican la salud (ejemplo: tabaco).

CUESTINARIO. 1. Cul es el efecto del Cianuro en la reaccin de la Catalasa, y cmo se explica el fenmeno? Tiene un efecto inhibidor que se debe a la combinacin de este con el hierro que contiene la catalasa. 2. Qu inhibidor es mejor, el Cianuro o el Nitrato de Plomo? El cianuro porque hizo menos espuma y eso significa que inhibi a las enzimas desde su sitio activo. 3. Escriba la Reaccin de la Catalasa, y diga a qu se deben las burbujas cuando se aade sangre al vaso de reaccin? H2O2 + H2 O2 ----------> O2 + 2 H2O Catalasa. El efecto de las burbujas es por la liberacin de O2.

4. Cul es la fuente de la Catalasa en la reaccin hecha en el laboratorio? Los glbulos rojos de la sangre diluida 1:50 utilizada en esta prctica. 5. Cul es la funcin normal de la Catalasa en el organismo humano? La conversin del perxido de hidrogeno en agua que se genera como producto secundario de las reacciones oxidativas de los peroxisomas. Tambin utiliza al perxido de hidrogeno para oxidar otros sustratos.

INVESTIGACIN.

Investigar qu es el Estrs Oxidativo y como la enzima Catalasa participa en este fenmeno.

El estrs oxidativo es causado por un desequilibrio entre la produccin de oxgeno reactivo y la capacidad de un sistema biolgico de detoxificar rpidamente los reactivos intermedios o reparar el dao resultante. Todas las formas de vida mantienen un entorno reductor dentro de sus clulas. Este entorno reductor es preservado por las enzimas que mantienen el estado reducido a travs de un constante aporte de energa metablica. Desbalances en este estado normal redox pueden causar efectos txicos a travs de la produccin de perxidos y radicales libres que daan a todos los componentes de la clula, incluyendo las protenas, los lpidos y el ADN. En el ser humano, el estrs oxidativo est involucrado en muchas enfermedades, como la aterosclerosis, la enfermedad de Parkinson y la enfermedad de Alzheimer y tambin puede ser importante en el envejecimiento. Sin embargo, las especies reactivas de oxgeno pueden resultar beneficiosas ya que son utilizadas por el sistema inmunitario como un medio para atacar y matar a los patgenos. Las especies reactivas del oxgeno son tambin utilizadas en la sealizacin celular. Esta es denominada sealizacin redox. La enzima catalasa es un antioxidante encargado de re alizar un equilibrio en el organismo, ayudando al estrs oxidativo.

BIBLIOGRAFA.
y

Prcticas de Bioqumica Metablica y Enzimologa. Vejar Rivera, Eva Irma. Pg. 1-3.