Laboratrios de Microbiologia

2008/2009

Instituto Superior de Engenharia de Coimbra

Engenharia Biolgica

Caracterizao Fisiolgica e Bioqumica de Bactrias

Inicio do trabalho:11/11/08 Final do trabalho:12/11/08 Data de entrega:19/11/08

Trabalho elaborado por : Joo Mendes Mariana Ferreira (L3 Grupo3)

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Sumrio:
O objectivo deste trabalho era a identificao de alguns microrganismos previamente dados pela professora com base em testes fisiolgicos e bioqumicos. Depois da realizao desses testes obtemos, como principais resultados : - O teste da catalase com o microrganismo E.coli deu positivo; - No teste da reduo de nitratos com a E.coli foi positivo enquanto que com a Pseudomonas sp. foi negativo; - No teste da amilase tanto o teste com a E.coli como com o Bacillus cereus deu negativo; - No teste da hidrolise da ureia com o microrganismo E.coli deu negativo enquanto que com o Proteus sp. deu positivo; - No teste da produo de sulfuretos com o microrganismo E.coli deu negativo assim como com o Proteus sp.; - No teste de produo de indol com a E.coli deu positivo e com a Enterobacter sp. deu negativo, - No teste do vermelho de metilo o teste tanto com a E.coli como com a Enterobacter deu negativo; - No teste Voges-Proskauer com a E.coli deu negativo e com a Enterobacter deu positivo; - No teste do citrato com a E.coli deu negativo e com a Enterobacter deu positivo.

Observaes experimentais e resultados:

Teste da catalase observou-se a formao de bolhas gasosas de oxignio molecular libertado na reaco da enzima; Teste da reduo de nitratos:
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E.coli observou-se a mudana de cor do meio para vermelho Pseudomonas no se observou mudana de cor do meio nem aps a adio de zinco

Teste da amilase em ambos os microrganismos o meio corou de violeta aps a adio de soluo de lugol Teste da hidrlise da ureia :
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E.coli observou-se a separao de uma parte rosa (correspondia ao teste positivo) e outra parte onde estava presente a cor original do meio (correspondia ao teste negativo) Proteus sp. observou-se a mudana de cor do meio para rosa

Teste da produo de sulfuretos em ambos os microrganismos observou-se o escurecimento do meio formando um depsito negro; Teste da produo de indol :
y y

E.coli observou-se a formao de um anel vermelho Enterobacter no se observou a formao de um anel

Teste do vermelho de metilo em ambos os microrganismos no se observou qualquer alterao; Teste da Voges-Proskauer:
y y

E.coli no se observou qualquer alterao Enterobacter sp. houve mudana de cor do meio para vermelho

Teste do citrato:
y y

E.coli no houve qualquer alterao Enterobacter sp. houve mudana do meio para cor azul 3

Discusso dos resultados e concluses:

Teste da catalase determinou-se a presena da enzima catalase atravs da formao de bolhas de oxignio libertadas na reaco da enzima, visto que a catalase se encontra em todos os microrganismos (como o caso da E.coli), que decompem o perxido de hidrognio segundo a seguinte reaco: 2H2O2 ---------> 2H2O + O2

Teste da reduo de nitratos determinou-se o modo como os nitratos so utilzados por um microrganismo. Na E.coli o meio (que continha a soluo de cido sulfanilico e dimetilnaftilamina) corou de vermelho devido presena de nitritos. No caso da Pseudomonas mesmo aps a adio de indicadores no se observou a mudana de cor para vermelho o que indicou que j no existiam nitritos no meio. Adicionou-se ento zinco (redutor) mas mesmo assim no ocorreram mudanas de cor pois j no existiam nitratos para serem reduzidos a nitritos, ou seja, esses nitratos j tinham sido reduzidos a azoto gasoso e libertados para o ar.

Teste da amilase determinou-se a ausncia da amilase atravs da mudana de cor do meio para violeta, o que indica tambm a ausncia de amido, visto que a amilase degrada o amido.

Teste de produo do indol observou-se a capacidade da E.coli degradar o triptofano produzindo indol visto que a E.coli possui a enzima triptofanase. A presena de indol determinou-se atravs do reagente de Kovac que corou de vermelho o meio. O mesmo no aconteceu com a Enterobacter visto que no possua a enzima triptofanase logo no conseguia metabolizar o triptofano.

Teste vermelho de metilo este teste permite evidenciar a capacidade de alguns microrganismos produzirem cidos. No caso da Enterobacter no houve qualquer mudana do meio visto que este microrganismo no metabolizou o meio de modo a acidifica-lo. J na E.coli apesar do teste ser negativo (possvel contaminao devido ao pouco tempo a incubar), o meio deveria ter mudado de cor para vermelho visto que a E.coli acidifica o meio e na presena de vermelho de metilo a pH cido fica dessa cor.

Teste de Voges-Proskauer determinou-se a presena de acetoina no caso da Enterobacter que corou de vermelho devido presena do indicador naftol. No caso da E.coli o mesmo no sucedeu visto que no existia acetoina no meio.

Teste de utilizao do citrato na Enterobacter determinou-se a utilizao do citrato como uma nica fonte de carbono, o que pde ser evidenciado pela alcalinizao do m (que eio 4

continha azul de bromotimol) que cora de azul a pH alcalino. No caso da E.coli no houve mudana de cor para azul visto que a E.coli metaboliza o meio de modo a acidifica-lo.

Teste da hidrlise da ureia No caso da E.coli o meio no corou de rosa pois a E.coli no produz urease enquanto que com o Proteus determinou-se a utilizao da ureia atravs da capacidade deste microrganismo (que contem urease) hidrolisar ureia produzindo amonaco e dixido de carbono.

Teste da produo de sulfuretos este teste permitiu distinguir espcies capazes da produo de sulfuretos como o Proteus sp.. Ou seja houve precipitao de sulfureto de ferro provocando um escurecimento do meio devido produo de sulfureto de hidrognio por reduo de compostos inorgnicos e/ou por desassimilao de compostos orgnicos sulfurosos. Com a E.coli o resultado foi semelhante devido a contaminaes do meio.

Anexos:

[Imagem 1 Escherichia Coli ao ME, ampliada 10.000 x ]

[Imagem 2 Pseudomonas sp]

[Imagem 3 Proteus]

[Imagem 4 - Enterobacter sp. W1 (SEM)]

Bibliografia:
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Protocolo do trabalho 4 da disciplina de Laboratrios de Microbiologia Wikipdia (imagens)