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Estudo Dirigido 1) O que so hibridomas?

Hibridomas resultam da fuso de duas clulas afim de formar uma nica clula com um s ncleo. Na tecnologia de hibridomas essa fuso ocorre entre o linfcito B e clula de mielcito. 2) Explique como so produzidos os hibridomas. Os hibridomas so produzidos a partir da fuso de clulas do bao de um camundongo (nude) imunizado com antgeno X com uma linhagem mutante de mieloma (incapaz de crescer em meio HAT e no produz anticorpo). Esses hibridomas so selecionados em meio HAT, onde apenas clulas fundidas crescem. Posteriormente, as clulas so clonadas ( de tal modo que cada cuba contenha a prognie de uma clula) e os sobrenadantes que contm o anticorpo anti-X so triados e clonados. 3) Qual o mecanismo de funcionamento da resposta imune humoral? A imunidade humoral mediada por linfcitos B, que secretam anticorpos e bloqueiam infeces e eliminam microorganismos. 4) O idiotipo de um anticorpo determinado pela seqncia: a) da regio da constante da cadeia L. b) da regio varivel da cadeia L. c) da regio constante da cadeia H d) das regies constantes das cadeias H e L e) das regies variveis das cadeias H e L 5) As interaes do Ag com o Ac envolvem todos os itens abaixo exceto: a) Fora de Van der Walls b) Foras hidrofbicas c) Foras eletrostticas d) Ligaes covalentes e) Um encaixe bem prximo 6) Aps 10min depois de ter sido picado por uma vespa, um jovem ficou com tonteira e sentiu coceira na axila e no couro cabeludo. Quando apareceu urticria e, ele sentiu um aperto no trax. No caminho do hospital ele desmaiou. Ao chegar na emergncia do hospital seu pulso era quase indetectvel e ele recebeu uma dose de epinefrina injetvel e depois se recuperou. O que aconteceu com o organismo dele? Houve uma reao de hipersensibilidade do tipo I, onde a exposio ao patgeno estimula a troca de classe IgE nas clulas B, ocorrendo a produo de IgE, que, se liga ao mastcito promovendo as sua desgranulao. 7) A imunodeficincia pode resultar de: a) Uma falha no desenvolvimento do LB b) Uma falha no desenvolvimento das clulas da medula ssea c) Uma falha na funo fagoctica d) Uma falha na funo do complemento e) Todas as anteriores. 8) Cite e explique 3 tcnicas envolvendo a utilizao de anticorpos.

Na imunoprecipitao usa-se um anticorpo ligado minsculas esferas agarose (que uma resina) para precipitar o antgeno. Geralmente esta ligao entre anticorpo e agarose feita atravs de uma protena A, mas tambm pode ser feita atravs de outras pontes como a biotina/estreptoavidina. AGLUTINAO DIRETA: Neste teste, o antgeno faz parte naturalmente da clula, e haver aglutinao dessas clulas promovida por anticorpo contra esses antgenos (antgeno naturalmente insolvel). AGLUTINAO INDIRETA: Esse mtodo emprega a absoro de anticorpos ou antgenos proticos solveis na superfcie de micropartculas inertes (suporte). As principais partculas usadas como suporte so o ltex, hemcias e gelatina.. IMUNOENSAIOS DE AGLUTINAO: Vantagens da tcnica de imunoaglutinao: Baixo custo Elevada sensibilidade Leitura visual Facilidade de execuo. Desvantagens da tcnica de imunoaglutinao: Reprodutibilidade dos lotes de reagentes. Acessibilidade molecular para interao Ag-Ac Estabilidade da ligao do Ag/Ac no suporte. Os Radioimunoensaios utilizam anticorpos conjugados com radioistopos para quantificar os ensaios. Os radioistopos podem ser: Iodo 125 ou 131, Cobalto, Trcio. Uma quantidade conhecida de antgenos marcados e Antgenos da amostras so misturadas e reagem competitivamente com uma quantidade fixa de Anticorpos fixos na fase slida. Depois que a reao imune atinge o equilbrio, a mistura lavada para remover os conjugados no reativos, que so separados do complexo imune preso na fase slida. A concentrao do analito inversamente proporcional ao sinal emitido. Mtodo do sanduche, onde um anticorpo ligado a fase slida forma um imunocomplexo. Um segundo Anticorpo conjugado se liga ao imunocomplexo. feito uma lavagem para retirar os anticorpos conjugados no reativos. E em seguida feita a lavagem. ENZIMOIMUNOENSAIO (EIA) Baseia-se na imobilizao de um dos componentes, em fase slida, e na utilizao de um conjugado ligado a uma enzima. Como o substrato forma um produto colorido, a alterao de cor monitorada visualmente ou por meio de espectrofotmetro que relaciona a quantidade de substncia dosada intensidade de cor. MEIA Microparticle Enzyme Immuno Assay: A tecnologia MEIA tem como princpio o uso de micropartculas sensibilizadas com anticorpos ou antgenos (dependendo da finalidade do produto), sendo sua tcnica utilizada para testes qualitativos e quantitativos. O fato de utilizar micropartculas como fase slida aumenta a superfcie de contato entre as partes da soluo, aumentando a sensibilidade e a especificidade do mtodo e diminuindo o seu tempo de incubao. IMUNOFLUORESCENTES: Os testes de imunofluorescncia podem ser classificados de acordo com o componente marcado (antgeno ou anticorpo), pelo mtodo (competitivo ou no competitivo), por serem homogneos ou heterogneos, ou ainda pela realizao em fase slida ou lquida. A principal aplicao da imunofluorescncia direta na imunocitoqumica (doenas imunolgicas renais e de pele). A imunofluorescncia indireta amplifica o sinal e aumenta a sensibilidade do teste. Alm disso, pode ser empregado na pesquisa de antgenos (plasmdio em hemcia) e de anticorpos (sfilis, toxoplasmose, rubola, citomegalovrus, vrus do herpes simples, doena de Chagas, malria, etc). IMUNOENSAIO QUIMIOLUMINESCENTE: Esses teste utilizam como conjugados molculas geradoras de quimioluminescncia como os derivados do luminol, steres acridinium, derivados de nitrofenil oxalato ou rutenium tri-bipridyl com tripropilamina(TPA). Esta reao hidrolisa o substrato quimiluminescente gerando um

produto instvel o qual aps estabilizao gera emisso de ftons de luz (amplificados) que medida atravs de um fotomultiplicador, que tem a funo de transformar a luz emitida pelos ftons em impulsos eltricos. Estes impulsos so lidos em contagens de luz por segundo (cps). ECLIA: A eletroquimioluminescncia ocorre quando aplicada uma corrente eltrica em um eletrodo de platina, cria um campo eltrico que fazendo com que todos os materiais nesse campo reajam. Complexo que gera a luminescncia: Rutnio(II)tri(bipiridil) + Tripropilamina [Ru(bpi)3]2 (TPA) O rutnio e o TPA so estveis quando no aplicada a voltagem. 9) Uma criana sofreu um ferimento profundo e tomou soro antitetnico. Por que recebeu soro e no vacina? Qual a diferena entre soro e vacina? A criana recebeu soro, pois o mesmo contm anticorpos especficos quele antgeno, desencadeando uma resposta imunolgica imediata. O soro confere imunidade temporria pela administrao de anticorpos para combater um organismo invasor, em que a durao da imunidade determinada pela quantidade de anticorpos e a frequncia da administrao. A vacina visa a administrao de antignios de agentes patognicos atenuados, afim de gerar memria imunolgica. 10) Caracterize resposta imune inata e adaptativa. A imunidade inata a defesa inicial contra infeces. Possui especificidade para Ags microbianos, no possui memria. seus componentes so barreiras epiteliais, substncias antimicrobianas, sistema complemento, fagcitos e clulas NK. A imunidade adquirida refere-se proteo que um organismo desenvolve contra certos tipos de micrbios ou substncias estranhas. especfica para Ags microbianos e nomicrobianos, possui memria, auto-tolerante, seus componentes so os linfcitos e anticorpos. 11) Qual a diferena entre resposta imune humoral e celular? A imunidade humoral mediada por linfcitos B, que secretam anticorpos e bloqueiam infeces e eliminam microorganismos. A imunidade celular mediada por linfcitos T. Os linfcitos T helper so responsveis pela ativao do macrfago e os linfcitos T citotxicos eliminam clulas infectadas. 12) Explique a resposta imune primria e secundria no contexto da vacinao. Na resposta primria, as clulas B naves so ativadas gerando clulas de memria. Na resposta secundria as clulas B ativadas, gerando uma reposta maior do que a primeira, e produzindo mais clulas de memria. 13) Explique como anticorpos com idnticas propriedades ligantes com o antgeno podem ter diferentes funes efetoras (atividades biolgicas). A regio C da cadeia pesada interage com outras molculas efetoras e clulas do sistema imunolgico, participando, assim, como mediadora das principais funes dos anticorpos. Alm disso a poro carboxiterminal das cadeias pesadas ancora os Acs ligados membrana nas membranas plasmticas dos linfcitos B.