Universidade Federal de Gois Instituto de Qumica Laboratrio de Preparaes

Cromatografia em Coluna (CC)

Orientador: Prof. Dr. Luciano Morais Lio. Acadmicos: Eli Silveira Ales Jnior. Bruna Ferreira Silva. Larissa Carvalho Silva.

Goinia, de maio de 2009.

Ser abordada neste relatrio a aula de Cromatografia em Coluna tendo como adsorvente slica em gel; aula realizada no dia 27 de abril de 2009 sob a orientao do Prof. Dr. Luciano Morais Lio.

Introduo:
Cromatografia uma tcnica utilizada para analisar, identificar ou separar os componentes de uma mistura. A cromatografia definida como a separao de dois ou mais compostos diferentes por distribuio entre fases, uma das quais estacionria e a outra mvel. Introduzida pelo pesquisador russo Michael Tswett em 1906, quando separou clorofila de uma mistura de pigmentos de plantas, atravs de uma coluna cheia de carbonato de clcio em p, fazendo a lavagem com ter de petrleo. Conforme a amostra descia pela coluna, apareciam bandas separadas e cores distintas. Palavra de origem grega, onde cromo significa cor e grafia significa escrita, ou seja escrita em cores. Mas a cromatografia pode separar os componentes sem nenhum aparecimento de cor. A cromatografia preliminarmente uma ferramenta analtica para a separao de misturas, combinada com anlises qualitativas e quantitativas das substncias separadas. uma poderosa e muito usada tcnica de separao dos componentes de uma amostra. Os componentes das amostras so distribudos entre duas fases, uma das quais permanece estacionria, enquanto a outra elui entre os interstcios ou sobre a superfcie da fase estacionria. O movimento da fase mvel resulta numa migrao diferencial dos componentes da amostra. O mecanismo envolvido nesta migrao diferencial vai depender do tipo da fase mvel e estacionria utilizado. Pela escolha apropriada da fase fixa e da fase mvel, alm de outras variveis, pode-se fazer com que os componentes da mistura sejam arrastados ordenadamente. Aqueles que interagem pouco com a fase fixa so arrastados facilmente e aqueles com maior interao ficam mais retidos. Os componentes da mistura adsorvem-se com as partculas de slido devido a interao de diversas foras intermoleculares. O composto ter uma maior ou menor adsoro, dependendo das foras de interao, que variam na seguinte ordem: formao de sais > coordenao > pontes de hidrognio > dipolo-dipolo > Van der Waals. Dependendo da natureza das duas fases envolvidas tem-se diversos tipos de cromatografia: - slido-lquido (coluna, camada fina, papel); - lquido-lquido; - gs-lquido. Os mtodos cromatogrficos possuem uma faixa de aplicao ilimitada. Podem ser usadas para separao de molculas menores, como H2 e D2, at as maiores, como protenas etc. Quantidades na ordem de picogramas podem ser separadas e detectadas por cromatografia gasosa combinada com espectrometria de massa, e quantidades em multigramas podem ser separados e isolados por mtodos de coluna preparativa. A cromatografia em coluna uma tcnica de partio entre duas fases, slida e lquida, baseada na capacidade de adsoro e solubilidade. O slido deve ser um material insolvel na fase lquida associada, sendo que os mais utilizados so a slica gel (SiO2) e alumina (Al2O3), geralmente na forma de p. A mistura a ser separada colocada na coluna com um eluente menos polar e vai-se aumentando gradativamente a polaridade do eluente e conseqentemente o seu poder de arraste de substncias mais polares. Uma seqncia de eluentes normalmente utilizada a seguinte: ter de petrleo, hexano, ter etlico, tetracloreto de carbono, acetato de etila, etanol, metanol, gua e cido actico. O fluxo de solvente deve ser contnuo. Os diferentes componentes da mistura mover-seo com velocidade distintas dependendo de sua afinidade relativa pelo adsorvente(grupos polares interagem melhor com o adsorvente) e tambm pelo eluente. Assim, a capacidade de um determinado eluente em arrastar um composto adsorvido na coluna depende quase diretamente da polaridade do solvente com relao ao composto.

 medida que os compostos da mistura so separados, bandas ou zonas mveis comeam a ser formadas; cada banda contendo somente um composto. Em geral, os compostos apolares passam atravs da coluna com uma velocidade maior do que os compostos polares, porque os primeiros tm menor afinidade com a fase estacionria. Se o adsorvente escolhido interagir fortemente com todos os compostos da mistura, ela no se mover. Por outro lado, se for escolhido um solvente muito polar, todos os solutos podem ser eludos sem serem separados. Por uma escolha cuidadosa das condies, praticamente qualquer mistura pode ser separada Outros adsorventes slidos para cromatografia de coluna em ordem crescente de capacidade de reteno de compostos polares so: papel, amido, aucares, sulfato de clcio, slica gel, xido de magnsio, alumina e carvo ativo. Ainda, a alumina usada comercialmente pode ser cida, bsica ou neutra. A alumina cida til na separao de cidos carboxlicos e aminocidos; a bsica utilizada para a separao de aminas.

Materiais e Mtodos:
Materiais Coluna cromatogrfica, algodo, funil, bquer, pipeta, slica-gel em p, ter de petrleo, acetona, amostra (maceramento de folha em acetona resultando em uma mistura de cor verde). Mtodos Em uma coluna cromatogrfica contendo um pequeno algodo na ponta mediu-se 5 cm de slica-gel em p e transferiu-se a slica para um bquer. Por ser conhecida a polaridade dos solventes que sero utilizados, a slica foi misturada em ter de petrleo, que menos polar que a acetona e ser o primeiro solvente a ser utilizado no procedimento de separao. Com a ajuda de um funil, a slica foi colocada na coluna cromatogrfica e o excesso de ter de petrleo foi retirado. Utilizando uma pipeta colocou-se a amostra dentro da coluna de forma a no criar rachaduras. Abriu-se novamente a ponta da coluna at que a amostra estivesse toda em contato com a slica (sem haver lquido sobrando sobre o final da coluna). Lentamente adicionou-se o ter de petrleo at a visualizao de duas fases distintas. A fase amarela foi descendo enquanto a verde permanecia no topo da coluna. Aps observar essa separao das fases encheu-se a coluna com ter de petrleo e colheu-se toda a fase amarela da amostra em um bquer, restando somente a fase verde no topo da coluna. Removeu-se tambm o restante de ter de petrleo que restou na coluna. Ao incio da eluio com acetona a coluna criou rachaduras em seu interior e para removlas colocou-se algodo umedecido com clorofrmio por fora da coluna, cobrindo todos os pontos de rachadura. O clorofrmio esfria o ar presente na coluna facilitando sua retirada (diferena de presso a presso da coluna sobre a rachadura maior). Aps a coluna voltar a ficar uniforme continuou-se a adio de acetona at a coleta de toda banda verde em outro bquer.

Resultados e Discusso:
O mtodo de cromatografia de coluna permitiu a separao de duas bandas visveis do extrato de folhas, a banda amarela que uma mistura de carotenos e a banda verde que uma mistura de clorofilas, devido interao de cada banda com o solvente. A banda amarela interagiu com o ter de petrleo, pois ela mais apolar do que a banda verde. A banda verde interagiu com a acetona, pois ela era mais polar. Os aspectos que alteram a eficincia de uma coluna cromatogrfica so o empacotamento da slica-gel que compe a coluna e a aplicao da mistura sobre a coluna. O empacotamento deve ser o mais uniforme possvel, sem a presena de bolhas e rachaduras no interior da coluna, pois estas atrapalham a separao das bandas. A aplicao da mistura sobre a coluna deve ser pequena para que as bandas possam se separar completamente antes que a coluna termine.

Concluso:
A separao de misturas contendo substncias com diferentes polaridades atravs da cromatografia de coluna eficiente, pois possvel separar completamente essas substncias devido sua interao com o solvente utilizado. Elas devem ser analisadas posteriormente para que haja certeza de que existe somente aquele determinado composto da mistura. Isso pode ser feito atravs da cromatografia de camada delgada.

Bibliografia:
ECO-QUMICA, Portal de Qumica e Meio Ambiente Qumica Fcil Qumica Orgnica Experimental. Disponvel em: <http://ube-164.pop.com.br/repositorio/4488/meusite/qorganica experimental/cromatografia.htm>. Acessado em 30/04/2009.