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Qual o efeito da activao de receptores muscarnicos na Narcolepsia?

MIEB NEUROFARMACOLOGIA RUI MIGUEL MORGADO VENNCIO, 2007112092

ndice
Introduo ................................ ................................ ................................ ............................... 3 Materiais e Mtodos ................................ ................................ ................................ ................ 4 Animais ................................ ................................ ................................ ................................ 4 Substncias ................................ ................................ ................................ .......................... 4 Tcnicas ................................ ................................ ................................ ............................... 4 Bibliografia................................ ................................ ................................ ............................... 6

Introduo
A narcolepsia uma desordem neuronal que tem como principais caractersticas o EDS, a cataplexia e intruses patolgicas de sono NREM e REM quando acordados. Estudos indicam que esta causada devido a baixos nveis do neuropptidoorexina (tambm conhecid por a hipocretina) no SNC. Existem dois tipos de orexina, a A e a B (hipocretina 1 e 2 respectivamente). Existem dois receptores para a orexina, o OX1R e o OX2R. O OX1R tem maior afinidade para a orexina A, no entanto o OX2R tem igual afinidade para ambas as orexinas. Ambos esto acoplados a protenas G, no entanto o OX1R est acoplado a uma Gq/11, uma classe de protenas G, que resultam na activao da fosfolipase-C. J o OX2R est acoplado a uma Gi (inibitria). Os neurnios produtores de orexina, esto exclusivamente localizados na rea perifornical e nas reas lateral e posterior do hipotlamo, isto em ratos. Estes neurnios projectam para todo o crebro excepto para o cerebelo. Ou seja, esta estrutura anatmica sugere que os neurnios orexinognicos influenciam variadas reas do crebro. Pensa que a maioria -se destes neurnios so glutamargicos mas no GABArgicos. Tal como outros neurnios no crebro, os neurnios de orexina recebem muitas entradas inibitrias e excitatrias, projectando depois a resposta para outras partes do crebro, como foi dito anteriormente. Sabe-se que estes neurnios desempenham um papel crucial na regulao da fome e do sono/viglia. Sabe-se que existem 5 tipos de receptores muscarnicos (ligam acetilcolina), M1-5. Os M1, M3 e M5 esto acoplados a protenas G do tipo Gq/11 , enquanto que os M2 e M4 esto acoplados a protenas G do tipo Gi/o. Actualmente sabe-se que a activao do receptor M2 agrava a cataplexia, mas ainda no se sabe o que acontece quando se activa o receptor M . 3 Por isso, ser que ao activarmos os receptores muscarnicos, estes vo influenciar alguma coisa na narcolepsia?

Materiais e Mtodos
Animais: Vo ser utilizados ratos transgnicos orexin-ataxin-3, que expressam ataxina-3. A expresso da ataxina-3 nos neurnios que expressam orexina causa morte celular, com mais de 99% de perda destes neurnios. Para alm destes ratos, sero utilizados ratos normais. Os ratos sero colocados em locais cuja temperatura (21-23C) e humidade (40-60%) sero controladas com um ciclo dia/noite de 12h-12h. No que toca comida e bebida, tero acesso total.

Substncias: Iro ser utilizadas duas substncias para agonizar e antagonizar os receptores muscarnicos, a methyl 1-methyl-3,6-dihydro-2H-pyridine-5-carboxylate (arecolina) que um agonista e a [(1S,5R)-8-methyl-8-azabicyclo[3.2.1]octan-3-yl]3-hydroxy-2phenylpropanoate (atropina) que um antagonista.

Tcnicas: Dividem-se os 2 tipos de ratos em 5 grupos. O grupo controlo, o grupo ao qual vai ser injectado o agonista e vai ser monitorizado com o EEG, o grupo que vai ser injectado com o agonista e vai ser morto, o grupo que vai ser injectado com o antagonista e vai ser monitorizado com o EEG e o grupo que vai ser injectado com o antagonista e vai ser morto. A injeco vai ser efectuada na LHA, maior densidade de neurnios de orexina. Para a colocao dos elctrodos de EEG, os ratos vo ser anestesiados com Pentobarbital (C11H18N2O3). Apenas os ratos que vo ser monitorizados vo receber os elctrodos. A seguir monitoriza-se o seu comportamento atravs de uma cmara de infravermelhos, durante 24 horas, simulando o ciclo dia/noite, e contam-se os episdios de narcolepsia. Ao mesmo tempo regista-se o EEG. Estes vo servir como controlo e vo ser comparados com os ratos injectados com o agonista e com o antagonista. A injeco do antagonista e do agonista, vai ser realizada ao mesmo tempo que se inserem os elctrodos. Aps isso, realizam-se os mesmos procedimentos que se realizaram com os controlos. Contam-se os episdios de narcolepsia e registam-se os EEG, comparando no final com os resultados controlo.

Os ratos que vo ser sacrificados,so-no ao fim de 2 horas, aps a administrao do agonista ou antagonista, com hidrato de cloral. -lhes removido o crebro, localizado o LHA sendo este cortado em fatias. A seguir marcam-se essas fatias com um marcador para os receptores de orexina, o #AOR-002 um anti-orexin receptor 2 antibody (AlomoneLabs) e o #AOR-001 que um anti-orexin receptor 1 antibody (AlomoneLabs). Por fim comparam-se os resultados com os resultados obtidos com os ratos aos quais no foram injectados com o agonista e antagonista.

Bibliografia
(s.d.). Obtido em 20 de Maio de 2011, de The PubChem Project: http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ Ehlert, F. J. (2003). Contractile role of M2 and M3 muscarinic receptors in gastrointestinal, airway and urinary bladder smooth muscle. Life Sciences 74, 355-366. Eric J. Nestler, S. E. (s.d.). Molecular Neuropharmacology: A Foundation for Clinical Neuroscience.McGraw Hill. Muscarinic acetylcholine receptor. (s.d.). Obtido em 19 de Maio de 2011, de Wikipedia: http://en.wikipedia.org/wiki/Muscarinic_acetylcholine_receptor Richard M. Chemelli, J. T. (1999). Narcolepsy in orexin Knockout Mice: Moleular Genetics of Sleep Regulation. Cell, Vol. 98, 437-451. Sakurai, N. T. (2009). Orexin/Hypocretin: A Neuropeptide at the Interface of Sleep, Energy Homeostasis, and Reward System. Pharmacological Reviews, 162-176. Shengwen Zhang, J. M. (2007). Sleep/wake fragmentation disrupts metabolism in a mouse model of narcolepsy. Journal Physiology, 649-663. Tadahiro Nambu, T. S. (1999). Distribution of orexin neurons in the adult rat brain. Brain Research 827, 243-260. Yamanaka, A. (s.d.). Afferent System of Orexin Neurons. Contemporary Clinical Neuroscience: The Orexin/Hypocretin System: Physiology and Pathophysiology, 61-70.