QUIMICA ANALITICA ORGANICA Andrea Arma Gisela Luque 1 Cuatrimestre de 2011 Cromatografa Lquida de Alta Performance.

. Objetivos: Determinar la concentracin de una muestra de Cafena utilizando como parmetro otra muestra de concentracin conocida. Introduccin: HPLC es un mtodo de separacin basado en la distribucin de los componentes de una muestra entre dos fases inmiscibles (Fase Mvil y Fase Estacionaria). El tamao de las partculas de la fase estacionaria est en el orden de los micrones, lo que hace necesario utilizar altas presiones para que fluya la fase mvil. Equipo: Cromatgrafo HPLC Perkin Elmer Serie 200 Inyector de 6 Vlvulas Vol de inyeccin 2 lt. Sin precolumna Columna Microbore de 4,6 mm de dimetro y 25 cm de longitud. Rango de trabajo: P = 182-184 bar (se presento tambien un rango de:194-200 bar) T = ambiente hasta 35C pH = 2,2 a 7 Detector: UV FM: Lquida Mezcla de solventes: 80% Acetonitrilo 20% Agua FE: Slido Relleno silica gel unida a grupos funcionales determinados (C18 ) Condiciones de trabajo: Proceso isocrtico (concentracin de solvente constante) Fase Reversa P : 171-173 Bar Flujo = 1,5 lt T = ambiente Vol de muestra inyectado: 2 lt

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Propiedades de las sustancias utilizadas : Compues to Acetonitr ilo Agua PM ( g/mol) 41,05 18 Densida d 3 ( g/cm ) 0,786 1 Punto de Fusin ( C) -45 0 Punto de Eb. (C) 82 100 solubilidad agua i.s alcohol s ter

Procedimiento: 1) Preparamos la muestra que se utilizar como parmetro disolviendo 0,023 gr de una muestra de cafena en acetonitrilo y la llevamos a un volumen final de 50 ml. =>
0,023 gr .sto . = 50 m .soluc l

4,6 . 10-4 gr de sto./ml de soluc

2) Preparamos una mezcla de solventes (80 % acetonitrilo, 20 % agua) que se usar como fase mvil. Se filtra al vaco (para eliminar posibles microorganismos y partculas que puedan daar el equipo) 3) Desgasificamos la muestra en un sonificador (para eliminar posibles gases disueltos ( microburbujas) que podran afectar la bomba o la columna) 4) Conectamos los reservorios con el solvente a los canales A y B del equipo y se comienzan a purgar las bombas, dejando equilibrar el sistema durante 10 min. 5) Primeramente inyectamos la muestra de concentracin conocida (tiempo de corrida 7,13 min.). De esta manera obtenemos un cromatgrama ( anexo 1P<200 RST3A2A.RST) Pico N 1 2 Sumatoria Tiempo [min.] 1,71 2,057 Area [Uv*seg.] 172736.42 1291252,73 1.463.989,15 Altura [Uv] 34121.13 333589,38

6) Purgamos nuevamente el equipo con la mezcla de solventes para eliminar rastros de la muestra anterior. 7) Inyectamos la muestra de concentracin incgnita y de igual manera que en el caso anterior se obtiene un cromatograma ( Anexo 2- P>200 bar RST281F.RST) Pico N 1 2 Sumatoria 3 Tiempo [min.] 1,587 1,930 Area [Uv*seg.] 221057,50 1739338,00 1.950.395,5 Altura [Uv] 33586,71 445214,04

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Tratamiento de Datos: Dado que ambas muestras fueron analizadas bajo las mismas condiciones, podemos utilizar una Regla de Tres Simple para procesar los datos y calcular la concentracin de nuestra muestra incgnita: 1.463.989,15 V. 1.950.395,50 V. -- ------------------------4,60.10-4 gr de sto/ ml de soluc. 6,13.10-4 gr de sto/ ml de soluc.

Rta: Nuestra muestra tiene una concentracin de 6,13.10-4 gr de sto/ ml de soluc.