MICROPROPAGACIN

El arte y la ciencia de multiplicar plantas in vitro

Agave Aloe

Embriognesis somtica y organognesis

Ambas tecnologas son utilizables como mtodos de micro-propagacin No siempre permiten obtener plantas idnticas entre si y a las progenitoras Su aplicacin ms notable radica en la posibilidad de producir plantas enteras a partir de una o unas pocas clulas

1. Cultivo de meristemas----------> Plantas libres de virus

organgnesis 2. Explantos --------------> vstagos ---> plantas

embriognesis 3. Explantos --------------- Embriones somticos Semillas artificiales

Sistemas de propagacin vegetativa in vitro Regeneracin directa e indirecta

Propagacin vegetativa por embriognesis somtica

Explanto (disco de hoja) Callo

REGENERACIN

Suspensin celular

Embriones somticos GERMINACIN ENCAPSULACIN

GERMINACIN

Semilla artificial

Embriognesis somtica

Factores de induccin embriogenica

Tejidos florales o reproductivos Auxinas (2,4-D) Medios reducidos en nitrogeno

La embriognesis somtica es poco usada como mtodo de propagacin

Alta probabilidad de mutaciones Dificultad metodolgica con algunas especies en particular Prdida de la capacidad regenerativa luego de repetidos subcultivos Los embriones somticos presentan frecuentemente una profunda dormancia

MATERIAL DE PARTIDA SEMILLAS IMADURAS

GERMINACIN

Embriognesis en soja
DESARROLLO INDUCCIN PROLIFERACIN

Embriognesis en vid

Callos embriognicos derivados de cultivos de anteras

Embriones somticos y plntulas de la variedad Sultanina

 Embriones somticos de alfalfa La funcin inductiva es llevada a cabo por auxinas (2,4-D).

Una de las ideas con embriones somticos es producir semillas sintticas o artificiales surge como resultado de la posibilidad de su aplicacin en agricultura.

Encapsulacin
Alginato de sodio cultivo embrionado 4mm

50 mM CaCl2 Cpsules

15-30 min 4.5 - 5.0 mm 0.8 - 1.2 g/cap

Alginato Embrin Nutriente

Morfognesis

Micropropagacin por cultivo de vstagos (Microcutting )

Forma especializada de organognesis Implica la generacin de vstagos a partir de meristemas preexistentes Requiere la ruptura de la dominancia apical

Micropropagacin por cultivo de vstagos

Etapa 1: Establecimiento del sistema asptico

Etapa 2: Multiplicacin de los propgulos por repetidos subcultivos

Etapa 3: Transferencia de las plntulas al suelo

Micropropagacin por cultivo de vstagos Etapa1 ************* plant Etapa 2 Etapa 3

****************** **************** mass production -------> hardening root development

Explant (leaf meristem)

cut ---> subculture transplanting into soil cut ---> subculture Advantitious Acclimatization shoots -------> cut ---> subculture Culture in field

Micropropagacin por cultivo de vstagos Etapa 1: establecimiento del cultivo asptico

Fuentes del explanto * Apices de los vstagos o tallos * Yemas axilares * Yemas florales no desarrolladas

Micropropagacin por cultivo de vstagos Etapa 2: Propagacin

Micropropagacin por cultivo de vstagos Etapa 3: Trasplante

In many commercial labs, rooting in culture (in vitro) is skipped in favor of rooting out of culture (ex vitro). This tray of unrooted microshoots has now been taken out of the sterile environment. The microcuttings, as they are called, are trimmed up and soaked in a rooting hormone (auxin) solution...

Micropropagacin por cultivo de vstagos Etapa 3: Trasplante

...then planted in flats much like young bedding plants. At this point they still have no roots.

Micropropagacin por cultivo de vstagos Etapa 3: Trasplante

Flats of unrooted microcuttings are transferred to a fog chamber within a greenhouse. Directly out of culture, the plantlets need high humidity levels and reduced light (similar to the in vitro environment).

Micropropagacin por cultivo de vstagos Etapa 3: Trasplante

Over the next 10-14 days, fogging is diminished and the tent opened up, until the plants do not need extra protection (ie. the plantlets on the right). This process is known as acclimatization or hardening off.

Micropropagation through shoot tip culture Stage 3: transplanting

The microcuttings have rooted, transplanted into larger cells, and increased greatly in size in only a few weeks.

Micropropagacin por cultivo de vstagos Etapa 3: Trasplante

After all that work, the plants are ready for the field. They are moved to a shade house at least one week before planting to finish the hardening-off process

Inconvenientes * Desarrollo asincrnico * Vitrificacin (hiperhidracin, aspecto vidrioso de los tejidos , los desrdenes fisiolgicos que genera permiten el crecimiento y multiplicacin pero no el enraizamiento) * Contaminacin crnica * Problemas en el enraizamiento * Variaciones genticas

Etapas de la Micropropagacin con enraizamiento in-vitro

Etapa 0 Seleccion & preparacin de la planta madre
Esterilizacin de los tejidos

Etapa I - Iniciacin del cultivo

Disposicin de los explantos en los medios

Etapa II - Multiplicacin
Los vstagos generados son transferidos al medio de desarrollo especfico dnde se dividen constantemente

Etapa III - Enraizamiento

Los vstagos son transferidos al medio de enraizamiento

Etapa IV Transferencia al suelo

Caractersticas de la Micropropagacin
Sistema de reproduccin clonal La etapa de multiplicacin se puede repetir de manera de llegar a un nmero ilimitado de clones Se simplifica el manipuleo de los ciclos productivos
Independencia estacional y ambiental

Posibilidad de produccin de plantas libres de enfermedades (libres de virus)