EXTRAO, CARACTERIZAO E HIDRLISE DO AMIDO PRESENTE EM TUBRCULOS NAS AULAS PRTICAS DE BIOQUMICA

Carina Carneiro de Melo Moura1, Priscila Alexsandra de Aguiar Freitas2, Helena Simes Duarte3 e Janana de Albuquerque Couto4

Introduo
Principal tipo de reserva vegetal, e alm de ser considerado importante carboidrato da dieta humana, o amido composto de amilose e amilopectina, sendo encontrado na forma de grnulos nos cloroplastos das folhas, em gros, tubrculos e nas frutas [1,2]. Sua sntese est localizada em estruturas vegetais denominadas plastdeos, e resulta de reaes de polimerizao da glicose atravs da fotossntese [3]. Entre as peculiaridades deste polissacardeo, est diferena entre as molculas que o compe, a amilose alm de apresentar estrutura linear, mais hidrossolvel que a amilopectina, a qual apresenta altamente ramificada. Deste modo torna-se possvel a separao destes componentes aps aquecimento [1]. O amido pode ser caracterizado por alguns testes que indiquem a presena de carboidratos, entre eles a reao de Molisch e reao com iodo, que respectivamente identifica a presena de carboidrato, e a presena de amido [4]. A hidrlise enzimtica do amido ocorre naturalmente no incio da digesto, durante a mastigao, onde liberada a enzima alfaamilase salivar que atua catalisando a hidrlise de algumas ligaes do amido na boca, resultando em molculas menores, comumente conhecidas por oligossacardeos [2]. Para a identificao destas molculas resultantes da hidrlise enzimtica do amido, utiliza-se o iodo, que ao entrar em contato com a amilose e a amilopectina, caracterizado pela formao de complexos, evidenciado respectivamente pelas coloraes azul-escura e vermelho-violcea [1]. O acompanhamento da hidrlise tambm pode ser feito pelo teste de Benedict, o qual baseia-se na identificao de substncias redutoras [4]. Comumente, as prticas de bioqumica demandam de reagentes e equipamentos de alto custo, dificultando sua realizao nas Instituies de Ensino. Tendo em vista a realizao de uma aula prtica acessvel e de baixo custo, o presente trabalho tem como objetivo a realizao da extrao e caracterizao do amido e sua posterior hidrlise enzimtica, a partir de tubrculos.

Material e mtodos
A. Local da Aula Os experimentos foram realizados no Laboratrio de Bioqumica e Biofsica, pertencente ao Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal da Universidade Federal Rural de Pernambuco. B. Tubrculos utilizados Foram utilizados como fonte de amido trs espcies de tubrculos: Solanum tuberosum (batata inglesa), Ipomoea batatas (batata doce) e Colocasia esculenta (inhame). C. Planejamento da aula prtica No incio da aula foi entregue a cada aluno um protocolo contendo todos os procedimentos a serem seguidos, bem como uma breve explanao terica a respeito do experimento a ser realizado. A realizao dos experimentos pelos alunos foi acompanhada durante toda a aula, a qual foi finalizada com as discusses a respeito dos resultados observados. D. Extrao do amido A extrao do amido de tubrculos foi iniciada pelo fracionamento dos tubrculos, seguida da adio de 50 mL de gua destilada, e posterior agitao durante 5 minutos. Aps a agitao, cada mistura foi filtrada, e a cada filtrado, foi adicionado mais 50 mL de gua destilada fervente, em constante agitao com auxlio de basto de vidro, at que houvesse a formao de uma soluo opalescente, sendo ento obtido o extrato de amido de cada tubrculo. E. Caracterizao dos extratos Aps a extrao, foi iniciado o processo de caracterizao das amostras preparadas. Em trs tubos de ensaio previamente identificados em A, B e C, foram colocados respectivamente 1,0 mL do extrato de batata inglesa, 1,0 mL do de batata doce e 1,0 mL de inhame. Em seguida, foi realizada uma caracterizao de carboidratos atravs do teste de Molisch, que consistiu na adio de 3 gotas de alfa-naftol e 2,0 mL de cido sulfrico.em cada tubo. A caracterizao do amido foi feita pelo teste do

________________ 1. Aluna do Curso de Bacharelado em Cincias Biolgicas e Monitora de Bioqumica do Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros, s/n, Dois Irmos, CEP 52171-900, Recife/PE , E-mail: carinacarneiro@yahoo.com.br 2. Aluna do Curso de Licenciatura em Cincias Biolgicas e Monitora de Bioqumica do Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros, s/n, Dois Irmos, CEP 52171-900, Recife/PE 3. Professora Titular do Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, rea de Bioqumica e Biofsica, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros, s/n,Dois Irmos,CEP 52171-900, Recife,PE 4. Professor Assistente do Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, rea de Bioqumica e Biofsica, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros, s/n-Dois Irmos- CEP: 52171-900- Recife/PE

iodo, onde coletamos 2,0 mL de cada extrato, e adicionamos de 3 gotas de lugol ( soluo de iodo com iodeto de potssio) em cada amostra. F. Hidrlise enzimtica Para hidrlise enzimtica das solues de amido utilizou-se como enzima a amilase salivar diluda em tampo fostato (pH 7,0). Para o preparo da soluo de amilase salivar, diluda 10%, utilizou-se 0,1 mL de saliva em 4,9 mL do tampo fosfato, sendo ento adicionado a trs tubos de ensaio identificados 2,0 mL de cada soluo de amido, 1,0 mL da soluo de amilase salivar, seguida de aquecimento em Banho Maria por 15 minutos. A hidrlise enzimtica foi acompanhada por reaes especficas, por meio do teste do Iodo e de Benedict. No primeiro, observamos as alteraes na colorao num intervalo de tempo que variou de 15 a 45 minutos. No segundo, a presena de carboidratos redutores foi indicada pela modificao na cor do reativo de Benedict.

A hidrlise enzimtica do amido foi acompanhada pelo teste de iodo, no qual observamos que cada colorao apresentada nos tubos de ensaio fazia referncia a uma etapa da hidrlise, variando desde a observao da amilodextrina (colorao roxa) at a identificao da acrodextrina (colorao amarelada), mais evidente quando no extrato de Colocasia esculenta (Figura 1-B). Com a realizao do teste de Benedict, observamos a presena de acar redutor nos trs extratos a partir da mudana na colorao, a qual passou de azul para vermelho-tijolo, devido hidrlise promovida pela amilase salivar (Figura 1- B, C e D) [5]. A partir desta aula prtica, foi possvel trabalhar contedos abordados nas aulas tericas sobre os carboidratos, o que torna o assunto mais atrativo, como tambm proporciona ao aluno a oportunidade de formular hipteses e interpretar os resultados obtidos. A vantagem desta prtica pode ser atribuda baixa complexidade metodolgica, a qual no requer habilidades especficas, associada a um baixo custo nos seus materiais.

Resultados e Discusses
Nas trs amostras de extratos preparados a partir dos tubrculos estudados, observamos a formao do anel de colorao violeta na zona de separao dos dois lquidos (figura 1-A), por meio do teste de Molisch, caracterizando a possvel presena de carboidratos na soluo. Esta reao ocasionada pela formao de furfural ou derivado, resultante da desidratao da molcula de amido pelo cido sulfrico e posterior formao de um complexo de furfural com o alfa-naftol [5]. A caracterizao do amido na soluo a partir do teste do iodo evidenciou a presena deste polissacardeo, visto que em todas as solues houve a formao de um complexo de colorao azul escuro. Esta colorao resultado da interao do iodo com o amido [5]. (Figura 1- B, C e D)

Agradecimentos
Os autores agradecem a Universidade Federal Rural de Pernambuco, em especial ao Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal.

Referncias
[1] [2] [3] [4] [5] PETKOWICS, C.L.O. 2007. Bioqumica: Aulas Prticas/ Universidade Federal do Paran. 7 ed. Curitiba: Editora UFPR, 188 p. CHAMPE, A.L.; HARVEY, R. A.; COX, M.M. 2006. Bioqumica Ilustrada. 3Ed. Porto Alegre: Editora Artmed, 533 p. VOET, D.; VOET, J. G. 2006. Bioqumica. 3 ed. Rio de janeiro: Editora Guanabara Koogan, 716 p. SILVA, L.M.A.; 1988. Bioqumica: aulas prticas, 2.ed. Curitiba: Editora Scientia et Labor, 116 p. REMIO, J.O.R; SIQUEIRA, A.J.S; AZEVEDO, A.M.P. 2003. Bioqumica; guia de aula prticas. Porto Alegre: Editora EDIPUCRS.

Figura 1. (A) Teste de Molisch: tubo 1, extrato de Ipomoea batatas (batata doce); tubo 2, extrato de Colocasia esculenta (inhame); tubo 3, extrato de Solanum tuberosum (batata inglesa). (B) Teste de Iodo usando extrato de Colocasia esculenta (inhame): tubo 1, colorao caracterstica do teste de iodo; tubos 2, 3 e 4, hidrlise enzimtica com variao de tempo em Banho Maria, respectivamente 15, 30 e 45 minutos; tubo 4, colorao amarelada caracterstica da acrodextrina; tubo 5, teste de Benedict. (C) Teste de Iodo usando extrato de Ipomoea batatas (batata doce): tubo 1, colorao caracterstica do teste de iodo; tubo 2 e 3, hidrlise enzimtica com variao de temperatura de 15 a 45 minutos; tubo 4, teste de Benedict. (D) Teste de Iodo usando extrato de Solanum tuberosum (batata inglesa): tubo 1, colorao caracterstica do teste de iodo; tubos 2, 3 e 4, hidrlise enzimtica com variao de tempo em Banho Maria, respectivamente 15, 30 e 45 minutos; tubo 5, teste de Benedict.