UNIVERSIDADE ESTADUAL DO OESTE DO PARAN UNIOESTE

CCMF CENTRO DE CINCIAS MDICAS E FARMACUTICAS DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA

Adriana Brianez Diego Marques Pereira Indina Patrcia Balen Jefferson Faria Yen Joo Henrique Nogueira Jos Lucas Junges Carvalho Letcia Pastorelli Bonjorno Pedro Henrique Pelissari Suellen Gonalves Borges

OVARIECTOMIA E ORQUIECTOMIA BILATERAL EM RATOS

Cascavel 2010

Adriana Brianez Diego Marques Pereira Indina Patrcia Balen Jefferson Faria Yen Joo Henrique Nogueira Jos Lucas Junges Carvalho Letcia Pastorelli Bonjorno Pedro Henrique Pelissari Suellen Gonalves Borges

OVARIECTOMIA E ORQUIECTOMIA BILATERAL EM RATOS

RELATRIO DE FISIOLOGIA

Relatrio apresentado como requisito parcial para nota da disciplina de Fisiologia Humana do 2 ano do curso de Medicina da Universidade Estadual do Oeste do Paran. Prof. Dr. Orientadora Maria Lcia Bonfleur

Cascavel
2010

RESUMO

Este trabalho teve por objetivo verificar as alteraes morfofisiolgicas decorrentes da orquiectomia e ovariectomia bilateral realizada em ratos Wistar. Dividiu-se os animais em grupo controle e grupo teste para ambos sexos. Foram estudados em machos as concentraes plasmticas de testosterona livre, espessura do crtex da adrenal e peso da vescula seminal. Em fmeas estudou-se a concentrao plasmtica de estradiol, a quantidade de gordura retroperitoneal, o peso do tero e a espessura do endomtrio. Para ambos sexos analisou-se o peso corporal, glicemia, a densidade ssea do fmur e da vrtebra, a concentrao plasmtica de fsforo, fosfatase alcalina e clcio. Diferenas marcantes foram verificadas quanto expressiva participao do estrognio na absoro e reabsoro ssea e ao efeito anablico proporcionado pela testosterona, principalmente na massa muscular. Discutiu-se tambm, os efeitos de uma hipottica reposio hormonal, bem como as diferenas do comportamento sexual do macho e das concentraes das gonadotropinas em decorrncia da ovariectomia e orquiectomia.

SUMRIO

RESUMO ............................................................................................................. 3 LISTA DE GRFICOS ...................................................................................... 5 LISTA DE FIGURAS ......................................................................................... 6 INTRODUO ................................................................................................... 7 OBJETIVOS ...................................................................................................... 13 MATERIAIS E MTODOS............................................................................. 14 ANLISE DOS RESULTADOS...................................................................... 16 DISCUSSO ...................................................................................................... 24 CONCLUSES ................................................................................................. 29 REFERNCIA BIBLIOGRFICA ................................................................ 30

LISTA DE GRFICOS
GRFICO 1: Testosterona livre, em machos.......................................................................16 GRFICO 2: Peso corporal, em machos .............................................................................16 GRFICO 3: Espessura do crtex adrenal, em machos ....................................................17 GRFICO 4: Glicemia, em machos .....................................................................................18 GRFICO 5: Vescula seminal, em machos ........................................................................18 GRFICO 6: Fosfatase alcalina, em fmeas........................................................................19 GRFICO 7: Fosfatase alcalina, em machos ......................................................................19 GRFICO 8: Fsforo, em fmeas.........................................................................................19 GRFICO 9: Clcio, em fmeas...........................................................................................19 GRFICO 10: Fsforo, em machos .....................................................................................19 GRFICO 11: Clcio, em machos .......................................................................................19 GRFICO 12: Densidade ssea da vrtebra, em machos...................................................20 GRFICO 13: Densidade ssea do fmur, em machos.......................................................20 GRFICO 14: Densidade ssea da vrtebra, em fmeas....................................................20 GRFICO 15: Densidade ssea do fmur, em fmeas........................................................20 GRFICO 16: Estradiol, em fmeas.....................................................................................21 GRFICO 17: Peso corporal, em fmeas.............................................................................21 GRFICO 18: Gordura retroperitoneal, em fmeas..........................................................22 GRFICO 19: Glicemia, em fmeas.....................................................................................22 GRFICO 20: Peso do tero, em fmeas.............................................................................23 GRFICO 21: Espessura do endomtrio, em fmeas.........................................................23

LISTA DE FIGURAS

FIGURA 1 - tero de rata normal logo aps extrao........................................................24 FIGURA 2 - tero de rata ovariectomizada logo aps extrao........................................24

INTRODUO
O principal hormnio sexual masculino, a testosterona, produzido

principalmente pelos testculos. Essa produo ocorre pela estimulao das clulas de Leydig pelos hormnios hipofisrios luteinizantes (LH) e folculo estimulante (FSH). Os andrgenos so derivados do colesterol, que depois de passar pelas etapas de pregnolona e androstenediona, d lugar a pequenas quantidades de estradiol (estrognio) e hormnios virilizantes, como a testosterona. A testosterona estimula o desenvolvimento e o crescimento dos rgos reprodutores masculinos, bem como o aparecimento das caractersticas secundrias masculinas, alm de desempenhar importante papel anablico no organismo, como aumento da massa protica e elevao da taxa metablica, e manter a viabilidade das glndulas sexuais acessrias. Aproximadamente 98% da testosterona circulante est ligada a protenas plasmticas, sendo que 60% est unida a uma glicoprotena heptica, chamada globulina ligadora de hormnios sexuais ou SHBG (sex hormone binding globulin) e 38 % est ligada a albumina, para tornar-se disponvel quando necessria. A atividade biolgica realizada pelos 2% de testosterona-livre. A enzima 5-alfa redutase, presente nos testculos, metaboliza a testosterona para diidrotestosterona, que o andrgeno ativo nos tecidos. A testosterona tambm pode ser aromatizada e transformar-se em estradiol, que outro metablito ativo. 43 As clulas de Leydig testiculares secretam mais de 95 % do total da testosterona circulante, sendo o restante produzido pelas clulas da zona reticulada das glndulas suprarenais.39 Casquero sugeriu que em camundongos aps a castrao no havia quantidade suficiente de andrgenos na circulao para desempenhar as funes desse hormnio.43 O hormnio hipotalmico de liberao de gonadotropinas (GnRH) atua em receptor especfico na membrana das clulas gonadotrficas da hipfise e estimula a liberao de hormnio luteinizante - LH - e hormnio folculo estimulante FSH que regulam o crescimento testicular, a espermatognese e a esteroidognese. O papel principal do LH estimular as clulas de Leydig a produzirem testosterona. A secreo de hormnio luteinizante controlada pela retroalimentao negativa dos esterides gonadais no hipotlamo e na hipfise. Tanto a testosterona quanto o estradiol provocam essa inibio. 38

A reduo no padro de secreo da testosterona, causada, por exemplo, pelo hipogonadismo, aumenta os riscos do desenvolvimento da osteoporose, osteopenia (precursora da osteoporose), obesidade e hipertenso arterial. 43 Os ovrios produzem o estrognio e a progesterona, os hormnios sexuais femininos. O estrognio responsvel pelo desenvolvimento das caractersticas sexuais primrias e secundrias na mulher. A progesterona relaciona-se com a preparao do endomtrio uterino na nidao. Os hormnios sexuais femininos atuam na remodelao ssea por mecanismos ainda no totalmente esclarecidos. A presena de receptores para o estrgeno nos osteoblastos, ostecitos e nas clulas osteoprogenitoras da medula ssea sugere efeito direto desse hormnio sobre o osso. 36 A menopausa caracterizada por uma involuo dos ovrios, o que leva a uma reduo dos hormnios sexuais femininos, causando uma srie de alteraes no corpo da mulher. Na deficincia de estrgeno, h diminuio da forma ativa da vitamina D. Assim, na ovariectomia, espera-se menor formao da protena ligante de clcio, o que diminui sua absoro intestinal. O resultado disso a hipocalcemia. A menopausa ocasiona suspenso irreversvel da funo ovariana, com declnio da secreo estrognica. A falta desse hormnio leva a alteraes no perfil lipdico, em particular, aumento das lipoprotenas de baixa densidade (LDL), reduo das lipoprotenas de alta densidade (HDL) e aumento na deposio de gordura (WONG et al, 1998). Os efeitos dos esterides sexuais femininos vm sendo pesquisados na literatura, porm devido s suas complexidades, ainda no h consenso sobre a totalidade das funes ovarianas, que necessitam de maiores estudos sobre as diversas interaes endcrinas com o metabolismo corpreo. Vrios trabalhos descreveram perda da funo ovariana devido a procedimentos cirrgicos, radioterpicos e quimioterpicos, alm de quadros infecciosos plvicos graves com comprometimento funcional dos ovrios. A privao dos hormnios ovarianos acarreta distrbios endcrinos e funcionais, tais como disfuno sexual, perda da libido, maior risco de osteoporose e de doenas cardacas, nveis alterados de lipoprotenas, entre outros. 42 O ganho ponderal das ratas ovariectomizadas pode estar relacionado com a privao dos hormnios ovarianos, conforme foi sugerido por Guyard e cols. (1991), tendo em vista que o estrognio aumenta o consumo energtico e, como conseqncia, diminui o peso corporal. Portanto, se houver a privao estrognica, o consumo de energia ser menor e os animais tero aumento de peso. Por outro lado, de acordo com Geary e cols. (1999), ratas

ovariectomizadas tratadas com estradiol engordam menos, enquanto animais que recebem progesterona so at mais magros. O tecido adiposo responsivo ao estrognio e expressa os receptores e para este hormnio em humanos e roedores.
10,30,31,34

O receptor para o estrognio o

responsvel pela modulao da lipognese no tecido adiposo,19 diminuindo a atividade da lipoprotena lpase (LPL), enzima que regula a captao de lipdios pelos adipcitos. Sendo assim, a estimulao do receptor provoca a reduo do acmulo de gordura. 15 O estrognio tambm age sobre o receptor -estrognico, presente no fgado. A estimulao dos receptores -estrognicos leva inibio da lipase heptica, que est envolvida no metabolismo de colesterol HDL, ocasionando seu incremento. 2 O papel inequvoco do estrognio na regulao da gordura corporal foi confirmado em estudos com camundongos deficientes do receptor de estrognio (ER-) ou da aromatase (Aro), enzima responsvel pela biossntese de estrognio, que apresentam aumento do tecido adiposo branco.
19,25

A deficincia de estrognio pode estar relacionada

diminuio de receptores de leptina no hipotlamo, o que causaria diminuio da saciedade 28, maior ingesto e consequente ganho de massa corprea. Por outro lado, h tambm possibilidade de diminuio do gasto energtico em fmeas com deficincia de estrognio, fato que facilitaria o ganho de massa corprea 37 Outros trabalhos realizados em fmeas ovariectomizadas, mostraram que o 17estradiol produziu um efeito positivo sobre a capacidade proliferativa de pr-adipcitos subcutneos, mas no de parametriais (DIEUDONNE e cols, 2000). Os efeitos biolgicos dos hormnios esterides so principalmente mediados por seus receptores especficos. Os receptores de estrgenos e andrgenos so expressos em pradipcitos e adipcitos de ratos (PEDERSEN e cols, 1991; DIEUDONNE e cols, 1995) e humanos (MIZUTANI e cols, 1994; MILLER e cols, 1990). Nestas clulas, os nmeros de receptores de estrgenos e andrgenos so variveis de acordo com a origem anatmica, sugerindo (DIEUDONNE e cols, 1995; JAUBERT e cols, 1995) que pr-adipcitos e adipcitos so clulas-alvo para os hormnios sexuais. O osso um tecido metabolicamente ativo que est em constante renovao. Isso mantm sua integridade estrutural e a homeostasia dependentes do equilbrio entre os processos anablico (aposio) e catablico (reabsoro)
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. A perda desse equilbrio altera a

matriz e a mineralizao sseas sseas (BLAND,2000; GU et al., 2001). J a fosfatase Alcalina ssea (FAOS) um marcador bioqumico do metabolismo sseo. A fosfatase alcalina hidrolisa o pirofosfato a fosfato inorgnico (PPi2P) e estimula

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sua entrada na clula do osso. Dentro da clula o fosfato estimula a produo de osteopontina e produo de hidroxiapatita (mineralizao). Nas enfermidades hepatobiliares, as elevaes so encontradas, predominantemente, na obstruo extra-heptica (clculo vesical, cncer de cabea do pncreas). 45 O aumento da fosfatase alcalina encontra-se presente em vrias enfermidades sseas, especialmente naquelas que evoluem com quadro de ostelise. A doena de Paget talvez seja, a doena ssea que apresente as maiores atividades de fosfatase alcalina, com nveis 10 a 25 vezes acima dos limites superiores dos valores de referncia. Discretos aumentos se verificam na osteomalcia, raquitismo, hiperparatireoidismo, fraturas e durante o crescimento sseo. Nveis elevados de fosfatase alcalina so encontrados no sarcoma osteognico. Discreto ou moderados aumentos podem ser observados durante a gravidez, sendo essa fosfatase de origem placentria.45 Acredita-se que nos machos a ao dos andrognios sobre o osso pode depender de aromatizao de andrgenos em estrgenos. In vitro, foram comprovados que ambos os receptores, de estrgeno e andrgenos, esto presentes nos osteoblastos do sexo masculino. Apesar de os andrgenos terem efeitos diretos sobre osteoblastos cultivados, foi constatado que os osteoblastos so capazes de transformar andrognios em estrognios por meio da aromatase. Ambos os andrgenos e estrgenos inibem a degradao ssea diminuindo a produo de interleucina-6 em clulas do estroma da medula ssea. Foi descoberto que tanto um homem com uma deficincia de receptores de estrgeno e outro homem com deficincia de aromatase tero retardado no crescimento do esqueleto e osteopenia. Alm disso, camundongos machos e fmeas knockout para receptores de estrognios podem ter uma diminuio da densidade ssea.19 Estudos demonstraram tambm que os osteoblastos produzem TGF (Fator de transformao de crescimento ) e sua sntese aumentada por andrgenos. TGF est presente na matriz ssea e liberado na sua reabsoro. Ele atua no esqueleto aumentando sua formao, inibindo sua reabsoro e formao de osteoclastos, atua como quimiocina para osteoblasto e est envolvido na induo e reparao ssea. Foi notada que a perda de osso esponjoso est relacionada com a deficincia de testosterona. Um estudo similar em ratas fmeas comprovou que, aps a ovariectomia, a concentrao de TGF de extratos sseos reduziu em torno de 50%, e essa reduo foi prevenida com a administrao de 17-estradiol. Isso ressalta a importncia do TGF no metabolismo sseo, tanto de machos quanto de fmeas. 35

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Os hormnios sexuais femininos atuam na remodelao ssea por mecanismos ainda no totalmente esclarecidos. A presena de receptores para o estrgeno nos osteoblastos, ostecitos e nas clulas osteoprogenitoras da medula ssea sugere efeito direto desse hormnio sobre o osso (Gaumet et al 2000). O estrgeno regula, nos osteoblastos, a expresso dos genes que codificam o colgeno tipo I, a fosfatase alcalina, osteopontina, osteocalcina e osteonectina. Ele aumenta a diferenciao dos osteoblastos e exerce efeito estimulatrio sobre a sntese e mineralizao da matriz ssea. O estrgeno parece inibir indiretamente a reabsoro ssea. 36 Acredita-se tambm que o estrgeno iniba a ao do PTH, sugerindo que o aumento da reabsoro ssea na ovariectomia tambm seja mediado pelo PTH (ORIOMO et al., 1972). Na deficincia dos esterides sexuais, a diminuio da massa ssea tambm parece ser decorrente da reduo da absoro intestinal do clcio. H uma ao direta do estrgeno sobre a mucosa intestinal e uma ao indireta, mediada pela vitamina D. Na deficincia de estrgeno, h diminuio dos receptores da vitamina D no intestino e menor converso renal do 25-hidroxicolecalciferol em 1,25 diidroxicolecalciferol (D3), a forma ativa da vitamina D. Logo, na ovariectomia, espera-se menor formao da protena ligante de clcio, o que diminui sua absoro intestinal. O resultado disso a hipocalcemia, pelo menos em algum momento da deficincia dos hormnios sexuais. Por ser o clcio o principal regulador da atividade da paratireide, na hipocalcemia h aumento da secreo de PTH e conseqente aumento da reabsoro ssea para restabelecimento da isocalcemia. De fato isso que parece ocorrer, pois algum tempo depois de instalada a hipocalcemia na ovariectomia h pronta compensao dos valores plasmticos de clcio. 36 O estrgeno possui ao insulinotrpica (GONZALEZ et al., 2002), j que esse hormnio tem a capacidade de ativar a enzima glicognio sintetase (BECKET et al., 2002; GONZALEZ et al., 2002). Dessa forma, fica evidente a participao dos hormnios

ovarianos na regulao da homeostasia glicmica, gerando mudanas expressivas na sensibilidade das clulas beta pancreticas. Assim o estrgeno influencia na homeostasia glicmica indiretamente, modulando a secreo de insulina e a populao de receptores dos tecido-alvo (BURT-PICHAT et al., 2004). A ao do 17-estradiol em promove um aumento na sensibilidade insulina, translocao de transportadores de glicose GLUT4 potencializando a captao da hexose, ativao das vias ligadas ao insulnica,

principalmente com relao enzima glicognio sintetase, convergindo para a formao das reservas de glicognio (Campbell e Febraio, 2001; McClun et al., 2006). Em vista disso,

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possvel inferir que a falta, ou carncia do estrgeno no organismo das ratas ovariectomizadas provoca um aumento da glicemia plasmtica, assim como menor reserva de glicognio muscular. A performance muscular um importante determinante da capacidade funcional da musculatura esqueltica, assim, estudos da integrao funcionais entrem a molcula da insulina e o estradiol, reforam a importncia do estradiol para o equilbrio energtico das fibras musculares, uma vez que, tem sido relatado reduo na fora muscular em mulheres menopausadas. (SKELTON et al., 1999; PATRONE et al., 2006)

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OBJETIVOS
Avaliar as alteraes morfofisiolgicas em ratos Wistar submetidos a ovariectomia e orquiectomia.

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MATERIAIS E MTODOS

OVARIECTOMIA As ratas foram separadas em dois grupos; controle e ovariectomizado. O grupo ovariectomizado, era composto de 8 ratas, as quais foram submetidas aos procedimentos com a retirada dos ovrios. O grupo controle, continha 8 ratas, as quais foram submetidas aos mesmos procedimentos, porm no houve a retirada dos ovrios. Antes de qualquer procedimento as ratas devem ser pesadas e a partir da coleta e observao do esfregao vaginal, se obter a fase do ciclo estral. importante que os procedimentos de pesagem e identificao da fase do ciclo estral da rata sejam feitos todos os dias.

Material e tcnica do esfregao vaginal em ratas: Material: conta-gotas, soluo salina fisiolgica, lmina de vidro, microscpio ptico. Tcnica: prepara-se um conta-gotas, previamente lavado com gua destilada e de calibre adequado para ser usado com esses animais, colocando nele um pequeno volume de soro fisiolgico. Segurar a rata, de uma maneira da qual ela fique de decbito dorsal, no possuindo condies de morder ou ferir o membro do grupo que esteja manipulando o animal no momento. Introduzir a ponta do conta-gotas, contendo uma pequena quantidade de soro fisiolgico, na vaginal da rata, liberando o soro e depois sugando juntamente com o fluido vaginal. Deve-se colocar o fluido retirado da rata em uma lmina de vidro, lavada e sem gordura, e por ltimo observ-la em um microscpio ptico em aumento mdio. Partindo desse ponto deve ser identificada a fase do ciclo estral da rata a partir dos dados apresentados abaixo. Esse procedimento deve ser feito em todas as ratas.

Material e tcnica da ovariectomia Material: instrumental cirrgico, placa de cortia, anestsico (ter ou tiopental), polivinil-pirrolidona-iodo (povidine). Tcnica: anestesiar a rata com ter ou tiopental (0,1 ml para cada 100g de peso corporal), monitorando a funo respiratria para evitar depresso acentuada. Em seguida deve ser colocada em uma mesa cirrgica, em decbito lateral e realizar a tricotomia na regio dorsal entre o rebordo costal inferior e a coxa, fazendo a assepsia desta regio com PVPI. Fazse a inciso de aproximadamente trs centmetros na pele e tecido celular subcutneo a cerca de um centmetro lateralmente linha mediana. Divulsionar a parede muscular at ter acesso a

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cavidade abdominal, localizando o ovrio em meio a uma massa gordurosa. A retirada do ovrio deve ser realizada aps ligadura da extremidade da tuba uterina, seccionando entre a ligadura e o ovrio. Aps esse procedimento, recolocar o tero na cavidade abdominal suturando a parede muscular e, em seguida, a pele. Repetir todo o procedimento contralateralmente para a retirada do segundo ovrio. Encerrada a retirada do segundo ovrio, repetir a assepsia e mant-la durante todo o experimento. As ratas do grupo controle tiveram somente seus ovrios identificados e expostos cirurgicamente, sendo a seguir reposicionados para posterior sutura da musculatura e pele previamente excisadas. Essas ratas, portanto, foram submetidas falsa-ovariectomia.

ORQUIECTOMIA Os animais foram anestesiados com tiopental (0,1 ml para cada 100g de peso corporal). Durante todo o perodo de anestesia, foram observadas as freqncias cardaca e respiratria, alm da movimentao voluntria dos ratos, com vista a detectar o nvel da anestesia e possveis complicaes anestsicas. Com o animal na mesa cirrgica, em decbito ventral, com as patas presas na mesa, localizou-se os testculos na bolsa escrotal. Se os testculos no fossem encontrados na bolsa escrotal, deveria-se pressionar o abdome do animal com os dedos, trazendo os testculos para a bolsa escrotal. Faz-se ento, uma inciso mediana anterior do escroto, abertura da tnica vaginal e exteriorizao dos testculos. Os funculos espermticos foram ligados com fio de seda e seccionados. Os testculos e os epiddimos foram removidos e a bolsa escrotal foi suturada. Posteriormente, suturam-se, com fio cirrgico os planos mais profundos e por fim a pele do escroto. Todos os ratos dos grupos controle submetidos gonadectomia fictcia foram submetidos ao mesmo procedimento cirrgico feito nos ratos castrados, porm seus testculos no foram removidos. Esses ratos foram estudados na mesma poca ps-operatria dos ratos gonadectomizados.

Avaliao aps sacrifcio Aps oito meses do procedimento cirrgico, os animais foram sacrificados por decapitao (aps 12 h de jejum). O sangue total foi coletado para posteriores anlises bioqumicas. Alguns rgos foram coletados e pesados.

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ANLISE DOS RESULTADOS

Testosterona livre A orquiectomia bilateral reduz abruptamente os nveis de testosterona circulante (Grfico 1), sendo por isso uma opo no tratamento do adenocarcinoma avanado de prstata. Outras indicaes de orquiectomia so trauma testicular grave, neoplasia testicular e epididimal, toro testicular prolongada e orquite sptica grave e refratria a tratamento conservador.

Grfico 1 Testosterona livre, em machos

Peso Corporal A diminuio acentuada dos nveis sricos de testosterona implica em vrias alteraes na composio corporal, como diminuio da massa muscular e aumento da massa gordurosa, menos densa (Grfico 2). Os ratos orquiectomizados obtiveram menor ganho ponderal em relao aos no orquiectomizados. A orquiectomia bilateral contribui para o menor ganho ponderal em ratos, independente do tempo de sua realizao.A existncia de modificaes de peso corpreo influenciadas pelos nveis de testosterona, ainda um assunto controverso.

Grfico 2 - Peso corporal, em machos

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Espessura do crtex da Adrenal A histoarquitetura da zona reticular do crtex da glndula supra-renal foi semelhante em ambos os grupos. Logo, a orquiectomia bilateral no gerou hipertrofia compensadora da glndula supra-renal na ausncia do hormnio testicular masculino (Grfico 3). De acordo com a literatura, a reduo da testosterona livre pode relacionar-se com alteraes na morfologia da glndula adrenal. No entanto, neste trabalho, as espessuras das camadas corticais da adrenal no se modificaram aps a orquiectomia. Cherry et al, em animais com hipogonadismo, e Parker et al., em indivduos falecidos por trauma, tambm no encontraram diferena na espessura total do crtex dessa glndula aps hipogonadismo, mas detectaram reduo proporcional da zona reticular em relao s demais zonas corticais. Considerando que a testosterona produzida nos testculos e nas adrenais, necessrio esclarecer se a glndula adrenal assume papel compensatrio endcrino aps orquiectomia. Quanto espessura do crtex adrenal, o teste t de Student no encontrou diferena significativa entre os grupos.

Grfico 3 Espessura do crtex adrenal, em machos

Glicemia O tratamento anti-andrognico pode afetar o metabolismo da glicose, mediado por alteraes da composio corporal, especialmente acmulo de gordura visceral. Smith et al encontraram hiperinsulinemia com glicemia normal em homens com cncer de prstata castrados, semelhana de pacientes diabticos com aumento da resistncia insulina. A glicemia dos ratos, neste trabalho, praticamente no foi alterada aps a castrao (Grfico 4). No entanto, apenas esse dado insuficiente para estabelecer uma relao definitiva entre o hipogonadismo masculino e a glicemia. Cabe estudar essa relao por meio de curva

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glicmica, hemoglobina glicosada, nveis de insulina srica ou mesmo utilizar outro modelo animal como Ajayi et al que encontraram reduo da glicemia de ratos diabticos castrados.

Grfico 4 Glicemia, em machos

Vescula Seminal Os ratos castrados sem reposio hormonal tiveram suas vesculas seminais extremamente diminudas, pois os hormnios andrognicos agem desenvolvendo e mantendo uma funo elevada da vescula seminal. O peso das vesculas seminais cai imediatamente aps castrao. A quantidade de frutose presente nas vesculas reduzida para metade no prazo de 24h da castrao e esse acar no detectvel aps alguns dias.

Aps a castrao de microscopia eletrnica revela que em vescula seminal o volume do epitlio seja reduzido progressivamente e do retculo endoplasmtico e aparelho de Golgi tornam-se menos bem organizados e visveis. Dessa forma, a falta de andrgeno (testosterona) nos ratos induz atresia das vesculas seminais (Grfico 5).

Grfico 5 Vescula seminal, em machos

Fosfatase alcalina Tanto no grupo orquiectomizado quanto no ovariectomizado observou-se diminuio dos nveis sricos de fosfatase alcalina. Na ausncia de testosterona e estrognio

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ocorre predomnio da atividade reabsortiva osteoclstica e diminuio da mineralizao da matriz ssea necessitando, assim, de menor suprimento celular de fosfato (Grfico 6 e 7).

Grfico 6 Fosfatase alcalina, em fmeas

Grfico 7 Fosfatase alcalina, em machos

Fsforo e Clcio No grupo ovariectomizado observou-se diminuio dos nveis sricos de clcio e fsforo, j no grupo orquiectomizado, ocorreu a diminuio do nvel srico de fsforo, mas a diminuio do nvel srico de clcio no foi expressiva (Grficos 8-11). Essas redues indicam possvel aumento na excreo destes pelo rim.

Grfico 8 Fsforo, em fmeas

Grfico 9 Clcio, em fmeas

Grfico 10 Fsforo, em machos

Grfico 11 Clcio, em machos

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Densidade ssea da vrtebra e do fmur Tanto no grupo orquiectomizado quanto no ovariectomizado observou-se diminuio da densidade ssea da vrtebra e do fmur devido ao incremento da atividade osteoclstica na ausncia de testosterona e estrognio, respectivamente. A diminuio da densidade mais evidente na vrtebra em comparao ao fmur devido maior presena de osso esponjoso na primeira associado ainda pela maior quantidade de osso compacto no ltimo (Grficos 12-15).

Grfico 12 Densidade ssea da vrtebra, em machos

Grfico 13 Densidade ssea do fmur, em machos

Grfico 14 - Densidade ssea da vrtebra, em fmeas

Grfico 15 Densidade ssea do fmur, em fmeas

Estradiol Observa-se uma grande variao de estradiol aps a ovariectomia das ratas. O estradiol consiste em um hormnio da famlia dos estrgenos e a produo de ambos se d pelos ovrios. Dessa forma, a retirada de tal rgo, mediante a ovariectemia, faz com que a produo do estradiol seja minimizada. A pequena concentrao desse hormnio ainda presente no plasma deve-se ao crtex adrenal, uma vez que esse produz uma quantidade mnima do estradiol (Grfico 16).

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Grfico 16 Estradiol, em fmeas

Peso corporal O resultado mostra que o peso corporal das ratas que sofreram ovariectomia teve certo aumento, contrastando com uma relativa constncia no peso corporal da rata controle. Como o estrgeno no mais produzido, os receptores alfa para o hormnio no so mais estimulados, e dessa forma, h uma acmulo de gordura. A falta de estimulo ao receptor -estrognico, responsvel pela inibio da lipase heptica, altera o metabolismo do colesterol, aumentando ainda mais o acmulo de gordura corporal (Grfico 17).

Grfico 17 Peso corporal, em fmeas

Gordura retroperitoneal A gordura retroperitonial pose ser o reflexo do aumento do peso, uma vez que a anlise desse acmulo de gordura uma forma de verificar a massa de tecido adiposo no corpo. O procedimento da retirada dessa gordura no peritnio a forma mais fcil de se quantificar, proporcionalmente, o ganho de peso corporal (Grfico 18).

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Grfico 18 Gordura retroperitoneal, em fmeas

Glicemia Como o estrgeno possui ao insulinotrpica, j que esse hormnio tem a capacidade de ativar a enzima glicognio sintetase, ele gera mudanas expressivas na sensibilidade das clulas beta pancreticas. Assim, o estrgeno influencia na homeostasia glicmica indiretamente, modulando a secreo de insulina e a populao de receptores dos tecidos-alvos. A ao do 17-estradiol em promove um aumento na sensibilidade insulina, translocao de transportadores de glicose GLUT potencializando a captao da hexose, ativao das vias ligadas ao insulnica, principalmente com relao enzima glicognio sintetase, convergindo para a formao das reservas de glicognio. Em vista disso, possvel inferir que a falta, ou carncia do estrgeno no organismo das ratas ovariectomizadas provoca um aumento da glicemia plasmtica, assim como menor reserva de glicognio muscular (Grfico 19).

Grfico 19 Glicemia, em fmeas

Peso do tero O estrgeno responsvel por estimular o crescimento das clulas estromais e das glndulas do endomtrio. Dessa forma, com a retirada dos ovrios, a sua produo no

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organismo cessa. Assim, a carncia desse hormnio no organismo promoveu uma gradativa involuo do endomtrio e, conseqentemente, reduo e do volume e peso do tero em comparao com as ratas controle (Grfico 20).

Grfico 20 Peso corporal, em fmeas

Espessura do endomtrio No grupo ovariectomizado observou-se a diminuio da espessura endometrial (como esperado), j que no ocorrem proliferao e diferenciao das clulas na ausncia de estrognio e progesterona (Grfico 21).

Grfico 21 Espessura do endomtrio, em fmeas

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DISCUSSO
Aspecto do tero das ratas ovariectomizadas Quanto ao aspecto do tero das ratas, vrios estudos histomorfolgicos comparativos realizados em ratas Wistar ovariectomizadas (bilateralmente) e no ovariectomizadas deixam claro que a espessura do endomtrio uterino, alm dos cornos e do peso do tero daquelas, em relao a estas, apresentam caractersticas atrficas. 27,40 A principal funo do estrgeno consiste em determinar o crescimento e proliferao celular de tecidos e rgos sexuais, alm de outros tecidos relacionados com a reproduo. Promove o crescimento do tero durante a fase de amadurecimento sexual puberdade com aumentos acentuados do estroma endometrial e das glndulas do endomtrio uterino, alm de equilibrar os nveis de gordura no sangue e de exercer o controle do colesterol - HDL/LDL. H evidncias da atuao deste hormnio na preveno de danos musculares. 22 A progesterona, por sua vez, promove alteraes secretoras e o espessamento do endomtrio uterino na preparao para a nidao do vulo devidamente fecundado e prepara as glndulas mamrias para a amamentao. Ainda, estimula o fluxo sanguneo uterino para o recebimento do vulo, diminui a frequncia e a intensidade das contraes desse rgo e tem influncia na preveno da osteoporose. 22 Com efeito, percebe-se que a manobra cirrgica da ovariectomia bilateral est intimamente relacionada atrofia uterina, observada pelos estudos histomorfolgicos, devido consequente inibio na produo dos hormnios sexuais estrgeno e progesterona responsveis pelo estmulo e funcionamento normal deste rgo. 27,40

Fig. 1. tero de rata normal logo aps extrao.

Fig. 2. tero de rata ovariectomizada logo aps extrao.

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Terapia de reposio hormonal A Terapia de Reposio Hormonal (TRH), em ratos Wistar, tem surtido efeito significativo na correo dos efeitos causados pela ovariectomia e orquiectomia em fmeas e machos, respectivamente. No entanto, a dosagem administrada, o intervalo de tempo entre cada aplicao hormonal e a origem dos hormnios geralmente, sintticos usados nestes experimentos, parece influenciar efetivamente a eficcia deste tipo de terapia. 32 As dosagens dos hormnios (estrgeno e progesterona em fmeas e testosterona em machos) administrados nos estudos com TRH em animais que tiveram suas gnadas removidas prximas s secretas fisiologicamente em ratos com gnadas ntegras, tm produzido resultados mais significativos em relao s hiperdosagens ou hipodosagens. Temse observado tambm, que a administrao dos hormnios com intervalos entre uma dose e outra, pode maximizar os benefcios e limitar os efeitos colaterais encontrados em TRH, quando comparada exposio constante a eles. No obstante, os hormnios sintticos, mais comumente utilizados neste tipo de estudo, tm apresentado certa limitao em relao ao funcionamento timo do organismo de ratos no ovariectomizados ou orquiectomizados. 21 Especula-se que esteja havendo algum grau de incompatibilidade desses hormnios sintticos com seus receptores nos organismos dos animais estudados, ou ainda, a readaptao da homeostase do ciclo hormonal relacionada sua privao provisria, no tem sido completa. 21 Os resultados obtidos em pesquisas com ratas ovariectomizadas e ratos orquiectomizados, ultimamente, tm mostrado uma reverso dos processos de atrofia uterina, em ratas, e prosttica, em ratos. Observa-se, ainda, recuperao das funes glandulares destes rgos, mesmo que parciais. 43

Comportamento sexual do macho Em relao ao desenvolvimento do comportamento sexual dos machos, notou-se a necessidade da presena de andrgenos . Estes contribuem para motivao, desempenho, so necessrios e suficientes para manter a cpula. O principal andrgeno a testosterona, secretada pelas clulas de Leydig dos testculos e metabolizado nas clulas-alvo, em 17-betaestradiol (por aromatizao) ou em dihidrotestosterona (DHT, pela 5-redutase).Estes medeiam a funo da testosterona no comportamento sexual. 7,20 O comportamento copulador, bem como a cpula prevista, eleva os nveis plasmticos de testosterona e LH em ratos do sexo masculino, exibindo um tipo de feedback neuroendcrino. 3,20,24

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O aumento nos nveis de testosterona mais acentuado em machos sexualmente ativos do quem em machos inativos. No entanto, o significado fisiolgico de tamanha elevao nos nveis de testosterona associada ao contato heterossexual no totalmente conhecido. 5,6 Os receptores para o feedback esto localizados no hipotlamo e na hipfise anterior, mas o mesmo receptor no precisa necessariamente estar envolvido na resposta aos aumentos e diminuio dos andrgenos.Os efeitos andrognicos sobre o comportamento predominantemente no sentido de aumentar a probabilidade de que um macho responda a uma fmea em cio dando incio a copula, e de diminuir a latncia para o incio do acasalamento, bem como a retomada do acoplamento aps a pausa ejaculatria.16 O comportamento sexual de ratos machos segue um padro estereotipado. Mostra vrias montagens e intromisses antes da ejaculao, e todos estes eventos ocorre recorrentemente em tal maneira que um macho pode alcanar diversos eventos ejaculatrio em um nico encontro sexual. O aumento na frequncia da ejaculao eleva a concentrao plasmtica da testosterona, assim, a funo ertil mantida por uma vasta gama de nveis de testosterona sistmica que pode ser to baixa quanto 10% a 12% das concentraes plasmticas normais fisiolgicas. Abaixo dessas concentraes, a funo ertil significativamente e positivamente correlacionada com os nveis de testosterona no plasma de forma dose-dependente. 12, 17, 20,23 No est claro por que a funo sexual e, em particular funo ertil pode ocorrer com um limite mais baixo de testosterona do que os necessrios para a funo fisiolgica de outros tecidos-alvos, como o rgos acessrio de reproduo. Uma possibilidade discutida por Giuliano et al (1993) em que prope que o local de ao do andrgeno ao o gnglio plvico regulando a resposta ertil. 12,16,23 Foi demonstrado por Rowena et al que o Vcsa1 (variable coding sequence A1) modula a funo ertil, sendo sua expresso no tecido muscular liso controlada testosterona em ratos com medula seccionada.6 A partir dos estudos do comportamento copulatrio bem sabido que a ocorrncia de ejaculao em ratos machos desaparece gradualmente aps a castrao, um efeito facilmente revertido, ou impedimento, pelo tratamento com de testosterona. No entanto, o desaparecimento taxa de ejaculaes aps a castrao, segue de perto o de intromisses em que a ejaculao no ser alcanada pela falta de estmulos adequados. Durante este perodo uma srie de mudanas ocorre no comportamento do animal incluindo diminuio da pela

testoterona. Hart mostrou que certos reflexos genitais, incluindo a ereo, so estimuladas por

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freqncia de intromisso e latncia da ejaculao. A testoterona no plasma indetectvel dentro de 24 horas aps a castrao. As glndulas sexuais acessrias mostram mudanas regressivas e so marcadamente atrfica dentro de dias, no entanto, o comportamento sexual diminui gradualmente, podendo ser mantido por um determinado tempo ainda. 12,16,20 A privao de testosterona tem um impacto negativo forte sobre o tecido peniano causando um conjunto diversificado de alteraes na bioqumica, estrutural e

nvel fisiolgico. Algumas das mudanas bioqumicas que se acredita terem um grande impacto na fisiologia da ereo so uma reduo da enzima xido ntrico sintase, fosfodiesterase, e aumento da apoptose, afetando o msculo liso. Ocorre tambm diminuio da expresso Vcsa-1, interferindo na funo na ertil. 6,12 O fato de ocorrer produo de andrognios pela glndula adrenal no compensa a perda de andrognios testiculares, como demonstrado em ratos orquiectomizados que no mudaram padro de comportamento mesmo aps a adrenalectomia.7,16 Conclumos que com a remoo de ambos os testculos, desaparecem as funes reprodutivas do macho, pela ausncia do gameta, como tambm somem os efeitos sexuais e metablicos produzidos pelos hormnios andrgenos, sendo o principal a testoterona. Isso ocorre porque a gnada masculina responsvel pela secreo de hormnios andrognico e produo de espermatozides.

Concentraes plasmticas das gonadotrofinas Em machos a funo reprodutora dos tbulos seminferos e funo endcrina das clulas de Leydig so controladas pela hipfise anterior, atravs das gonadrotofinas FSH para o epitlio germinativo e LH para as clulas as clulas de Leydig. A funo gonadotrfica da adeno-hipfise controlada pelo hipotlamo, atravs do GnRH (hormnio liberador de gonadotrofina). Este estimula a liberao do FSH e LH da hipfise que age sobre as estruturas testiculares. 12,17 Os andrognios por sua vez ligam-se aos receptores andrognicos hipotalmicos, deprimindo do desta maneira a liberao de GnRH. Deste modo, ao aumentar a taxa sangunea de andrgenos por maior secreo testicular, ou por administrao exgena, produz-se uma reduo na secreo de GnRH e de gonadotrofinas por feedback negativo. Por outro lado, havendo reduo da concentrao sangunea de andrgenos como ocorre na castrao, apresenta-se aumento da secreo do GnRH, com conseqente aumento de FSH e LH por falta de inibio ao nvel hipotalmico. 12,17

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Em fmeas, o LH age nas clulas tecais e nas clulas intersticiais, promovendo sua diferenciao e a secreo de hormnios esteroidais; atua tambm nas clulas granulosas dos folculos mais desenvolvidos, e no corpo lteo, promovendo a ovulao e luteinizao de clulas que foram previamente expostas as FSH, aumentando o tamanho destas clulas. 12,17 O FSH estimula o desenvolvimento do folculo, com conseqente produo de estradiol. A ao de dos estrognios, desencadeando a resposta de feedback negativo, parece dar-se ao nvel do hipotlamo como da hipfise. Por outro lado, a ao de feedback positivo (anterior a ovulao) parece ocorrer preferencialmente na hipfise. Assim como em machos castrados, fmeas que sofreram ovariectomia tambm apresentaro altos nveis de FSH e LH por falta de inibio ao nvel hipotalmico. 12, 13,17 Esse aumento significativo das gonadotrofinas foi observado por Goldman et al em ratos recm-nascidos em um dia aps a castrao, indicando uma resposta sensvel e presente desde o nascimento. Foi encontrada tambm uma diferena entre os sexos no que diz respeito ao tempo necessrio para o aumento das gonadotrofinas aps a

castrao/ovarariectomia. Notou-se um tempo de resposta muito maior em ratas adultas que machos para o LH. 3,7,13 Alm disso, este atraso na resposta do LH parece aumentar com a idade. Swerdloff et al. relataram um aumento significativo no de FSH e LH no plasma 8 h aps a ovariectomia de ratos aos 21 dias de idade. Eldrige et al encontrou uma resposta significativa somente aps24-48 h. 3,7,13 Sugere-se que este aumento deva-se a um sistema de feedback mais sensvel em animais mais jovens, quando pequenas concentraes de hormnios sexuais podem inibir poderosamente o sistema hipotlamohipfise. A sensibilidade supressora diminui na vida adulta, aumentando a secreo de GnRH e gonadotrofinas, um regime operante atravs de feedback positivo, produzindo-se maior estimulao gonadal e sexual. 7,13 Tapper et al. encontraram diferentes respostas ovariectomia, dependendo da fase do ciclo quando a cirurgia foi realizada. Fases do ciclo com nveis mais altos de estrognio mostraram aumento muito lento LH aps a ovariectomia, perodos com baixa concentrao de estrgeno baixo, mostrou uma comparativamente uma resposta rpida, com aumento de LH.13

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CONCLUSES
Aps a discusso e anlise dos resultados, pode-se concluir que tanto machos orquiectomizados, quanto fmeas ovariectomizadas tiveram alteraes morfofisiolgicas, no entanto, para certos parmetros foram mais expressivos para uns do que para outros. Alm disso, foi possvel elucidar o papel dos hormnios esterides (testosterona, estrognio e progesterona) na regulao da homeostasia do organismo e no desenvolvimento e manuteno dos aparelhos reprodutivos, imprescindveis na perpetuao da espcie.

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