LABORATORIO 9 MICROBIOLOGIA

Se entiende por antibiograma el estudio de la sensibilidad "in vitro" de las bacterias a los antibiticos. Por extensin, se suele incluir el estudio de la sensibilidad a las sulfamidas y otros quimioterpicos. Utilidad: La razn por la cual es conveniente el estudio del antibiograma de una bacteria determinada radica en el hecho de la diferente sensibilidad a los antibiticos de las distintas especies bacterianas y, ms an, en el hecho de que en numerosas especies existen grandes diferencias de sensibilidad a un determinado antibitico entre unas y otras cepas. El antibiograma es un mtodo de diagnstico rpido y preciso Con ayuda del antibiograma se puede escoger el antibitico ms adecuado para el tratamiento de una enfermedad.

Mtodo de la difusin en medio slido.

Se siembra, con el grmen a estudiar, una placa de un medio de cultivo adecuado. Sobre la superficie del medio se colocan discos de papel impregnados con el antibitico o quimioterpico a ensayar. Si el germen estudiado es sensible, en torno al disco se observar un halo, en el cual no hay proliferacin de bacterias. Si el germen es resistente al antibitico, crecer uniformemente y no habr ningn halo de inhibicin en torno al disco de papel.

Preparacin de los discos impregnados de antibitico para realizar un antibiograma.

En las casas de productos de laboratorio pueden adquirir se los discos que se emplean para hacer un antibiograma. Sin embargo, como aprendizaje, y con bastante fiabilidad, es fcil prepararlos a partir de las cpsulas, comprimidos grageados o viales de 250 mg 500 mg de los antibiticos que expenden en las farmacias.

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Para que la concentracin de antibitico que impregna los discos no sea ni excesiva ni insuficiente, y sea posible distinguir los halos de inhibicin, se puede proceder del siguiente modo, realizando un banco de diluciones. La concentracin de 0,1 mg/cl ya es adecuada para trabajar. Para evaluar, aproximadamente, el volumen de una gota se pueden colocar en una probeta graduada 100 gotas calculando el volumen que ocupan; dividiendo por 100 tendremos el volumen que corresponde a una gota. Suponiendo que el volumen hallado para una gota sea de 0,003 ml, la expresin 0,1 x 0,003 nos dar la concentracin de antibitico en mg/ gota. De este modo sabremos la concentracin de antibitico con que impregnamos los discos de papel secante, que se acostumbran a tomar de 6,5 m m de dimetro. Repitiendo la operacin con cpsulas de distintos antibiticos podremos preparar diferentes discos.

Medios de cultivo.
Los distintos microorganismos tienen distintas exigencias tanto en los que se refiere al medio nutritivo en s como a la temperatura de incubacin ya las condiciones atmosfricas. Casi todos los microorganismos pueden cultivarse en medios nutritivos inertes. Hay medios de cultivo lquidos y slidos; de hecho los slidos son medios de cultivo lquidos a los que se adicionan diferentes sustancias, las ms utilizadas son el agar y la gelatina. Agar ordinario peptona 15 gr./l NaCl 5gr/l agar 12gr/l Agar nutritivo Agar nutritivo Agar ordinario ms 10 gr./1 de glucosa

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Los medios de cultivo deben estar ajustados a un pH adecuado. El agar ordinario y el agar nutritivo a un pH = 7,2. El ajuste se realiza con NaOH y/o HCl en soluciones 1 N y 1/10N. Se acostumbra a hacer antes de la esterilizacin, aunque, a veces, debe hacerse despus. La esterilizacin de los medios de cultivo se hace generalmente calentndolos en un autoclave a 121 C ya una atmsfera de presin de vapor, durante 15-30 minutos. Alternativamente puede utilizarse una olla a presin adecuada.

Lectura del antibiograma.

Una vez sembrada una placa de un medio de cultivo adecuado y colocados los distintos discos impregnados de antibitico y una vez colocada a incubacin en la estufa durante unas horas, se procede a la lectura de los resultados, que puede hacerse a intervalos peridicos, basada en la medicin del halo de inhibicin. Segn la amplitud de este halo los grmenes se clasifican en: RESISTENTES, SENSIBLES, MUY SENSIBLES. Debe tenerse presente que el dimetro del halo de inhibicin depende tambin de la difusibilidad del antibitico y, por tanto, no es una medida absoluta de la eficacia. Los datos que proporciona el antibiograma son muy valiosos pero su aplicacin no es tan sencilla. Para la prescripcin correcta de los antibiticos hay que tener en cuenta siempre la naturaleza del proceso infeccioso, la historia clnica del paciente, el mecanismo de accin del antibitico, la toxicidad, las posibles sensibilizaciones del paciente, la va de administracin, etc.

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