Kromatografi Pertukaran Ion

kromatografi pertukaran Ion memisahkan senyawa berdasarkan muatan permukaan bersih Molekul diklasifikasikan sebagai anion (memiliki muatan negatif) atau kation (yang bermuatan positif). Beberapa molekul (misalnya, protein) mungkin memiliki kedua kelompok anionik dan kationik. Sebuah dukungan bermuatan positif (anion exchanger) akan mengikat suatu senyawa dengan keseluruhan biaya negatif. Sebaliknya, dukungan negatif bermuatan (kation penukar) akan mengikat suatu senyawa dengan muatan positif secara keseluruhan. matriks pertukaran Ion dapat dikategorikan lebih lanjut sebagai kuat atau lemah. matriks kuat pertukaran ion ini dibebankan (terionisasi) di berbagai tingkat pH. matriks penukar ion yang lemah terionisasi dalam rentang pH yang sempit.

Pall menawarkan resin pertukaran ion, pra-dikemas kolom, dan membran. Di banyak daerah, resin kromatografi merupakan media pilihan untuk kromatografi aplikasi, namun dalam beberapa kasus di mana berbasis metode resin memiliki keterbatasan (misalnya, pemurnian virus atau molekul besar) membran telah terbukti menjadi, kuat, dan alternatif ekonomi. Membran bekerja dengan baik dalam aplikasi seperti karena tarif mereka lebih cepat dibandingkan aliran resin

Apa Flow Rate Gunakan?

Mustang membran kromatografi perangkat dirancang untuk berjalan pada tingkat aliran sedikitnya 10 volume kolom per menit. optimasi awal seleksi buffer, pH, kapasitas, dan kondisi elusi semua bisa dilakukan di laju aliran. Cepat aliran Tingkat equilibrium, loading, dan mencuci akan memberikan throughput yang lebih baik, sebuah laju aliran lambat selama elusi mengikat dan dapat memberikan resolusi yang lebih baik untuk beberapa proses. Struktur terbuka membran Mustang tidak memerlukan difusi ke dalam pori-pori, dan karena itu biasanya izin tingkat aliran tinggi.

Apa Buffer Gunakan?

Biasanya, pertukaran ion kromatografi matriks dimuat dalam buffer rendah kekuatan ion. Dengan kondisi tersebut, makromolekul dibebankan akan disimpan oleh fase diam membawa muatan yang berbeda. Makromolekul bantalan biaya sama dengan fase diam hanya akan mengalir melalui tanpa mengikat. Pertukaran ion matriks dicuci dengan kekuatan tambahan

buffer ion rendah untuk sepenuhnya mencuci terikat spesies yang tersisa, dan spesies terikat adalah diferensial dielusi oleh buffer mengandung meningkatnya jumlah garam. Sebagai kekuatan ion meningkat fase gerak, ion garam bersaing untuk mengikat biaya pada pertukaran ion matriks, menggusur makromolekul terikat, dan memungkinkan mereka untuk mengelusi dari matriks. Untuk menghindari kesulitan, gunakan anionik (negatif-dibebankan) buffer untuk pertukaran kation (Mustang S membran), dan kationik (positif-dibebankan) buffer untuk pertukaran anion (Mustang Q membran).

Apa pH Gunakan?
Meskipun pH tidak mempengaruhi biaya pertukaran ion yang kuat matriks, maka akan mempengaruhi muatan pada makromolekul dalam larutan. PH beroperasi pada pertukaran ion kromatografi dipilih untuk memaksimalkan resolusi molekul target dari latar belakang kontaminan. Dalam beberapa kasus, pH dipilih untuk menyediakan maksimum mengikat molekul target dan minimum mengikat dari kontaminan (mode positif). Elusi dari molekul target dicapai dengan peningkatan konsentrasi garam. Dalam kasus lain, pH dipilih untuk menyediakan maksimum mengikat dari kontaminan dan minimal atau tidak mengikat molekul target (mode negatif). Molekul Target berakhir di air mengalir, dan kontaminan dipisahkan jauh dengan mengikat matriks. Melalui seleksi yang cermat baik pertukaran ion matriks dan pH operasi, baik hasil dan kemurnian dapat dimaksimalkan untuk satu langkah. Namun, tidak pernah mungkin mencapai kemurnian 100% dalam satu langkah, yang mengapa beberapa langkah harus diurutkan bersama untuk mengambil keuntungan dari berbagai perbedaan kimia antara molekul target dan kontaminan latar belakang.

Apa Garam Gunakan untuk Elusi?

Setelah mengikat, garam konsentrasi untuk elusi yang dipilih sehingga molekul target tidak coelusi dengan kontaminan yang juga terikat pada pertukaran ion matriks. Ion garam eluting harus menggantikan molekul lain dari kelompok dibebankan pada fase diam dengan baik gradien atau langkah dalam rentang M 0-1,0. Efektivitas pengungsian untuk digunakan kation umum adalah: Ca 2 +> Mg 2 +> Na +> K +> NH 4 + Urutan efektivitas perpindahan untuk digunakan anion umum: PO 4 3 - SO> 4 2 - COO> -> Cl Peringkat ini berkorelasi dengan seri Hofmiester, dan garam eluting terkuat tidak selalu yang terbaik. Idealnya, beberapa garam harus diuji, dan menemukan kondisi elusi optimum sering melibatkan trial and error. Kebanyakan user akan mulai dengan baik NaCl atau KCl hanya karena mereka tersedia di laboratorium. Untuk beberapa protein, garam mereka mungkin benarbenar berakhir menjadi pilihan yang lebih baik. Terlepas dari eluting seleksi garam, efek terhadap stabilitas, kemurnian, dan aktivitas dari molekul target akan harus dinilai.