Universidad Nacional Mayor De San Marcos

(Universidad del Per DECANA DE AMRICA)

Vicerrectorado de Investigacin
Facultad de Farmacia y Bioqumica

Preparacin de Extractos y Estudio Fitoqumico de Plantas Biocidas

Q.F. BERTHA JURADO TEIXEIRA
Lima, 27 de agosto de 2010

Las plantas son un recurso al alcance del ser humano por su utilidad y su bajo costo, ya desde la antigedad se utilizaban para su alimentacin y para la curacin de las enfermedades, estas ltimas denominadas plantas medicinales, que eran muy apreciadas por sus poderes curativos, los cules se transmitieron de generacin en generacin y que constituyen un valioso legado como es la medicina tradicional.

En nuestro pas debido a la riqueza de nuestra flora se utiliza mucho las plantas medicinales, por ello existe gran inters por la investigacin de ellas, para analizar y estudiar los efectos teraputicos de las plantas, as como para determinar los compuestos activos responsables de determinada actividad farmacolgica, separarlos de las plantas que los contienen, determinar su estructura qumica, procurar su sntesis, proponer modificaciones estructurales en la bsqueda de una mayor actividad y dar a conocer a la humanidad los resultados de estos estudios. stos anlisis deben ser producto de un trabajo multidisciplinario con la participacin de botnicos, qumicos, farmacognosistas y farmaclogos.

Asimismo en la actualidad se est promoviendo los cultivos orgnicos, es por ello que se est dando importancia al uso de plantas con actividad biocida para combatir las diferentes plagas que afectan a los cultivos.

Las plantas biocidas son aquellas que producen sustancias qumicas naturales idneas para contrarrestar, neutralizar y ejercer un control sobre cualquier microorganismo considerado nocivo para el cultivo.
Existen muchas plantas biocidas que se usan empricamente, las cuales se estn investigando para comprobar su actividad y elaborar frmulas que pueden incrementar esta actividad biocida.

EXTRACCIN

La extraccin es uno de los procesos ms utilizados desde el punto de vista farmacutico y se refiere conceptualmente a la separacin de las porciones medicinalmente activas a partir de los tejidos de las plantas y animales, de los componentes inertes de los mismos, mediante el uso de solventes selectivos, utilizando procedimientos establecidos y correctamente estandarizados.

Este trmino se diferencia del referido a la disolucin donde toda materia debe ser soluble no quedando en el proceso componentes inertes insolubles.

Existen numerosos mtodos que son usados frecuentemente en la preparacin de extractos, as como tambin para el anlisis de la composicin qumica de las plantas, as como mtodos biolgicos utilizados para la deteccin y seguimiento de una actividad farmacolgica. No todos los componentes qumicos elaborados por las plantas poseen el mismo inters para el farmacutico. El aislamiento de los mismos tiene un doble inters:

principios activos conocidos para su uso teraputico (quinina, digoxina, atropina etc.) . nuevas sustancias activas (a partir de plantas no estudiadas previamente).

Para poder realizar el aislamiento de un principio natural en condiciones ptimas, se debe tener en cuenta una serie de dificultades, inherentes a la propia planta o materia prima como al tipo de compuesto a extraer. Por esta razn la planta se somete a una serie de operaciones previas que facilitan y mejoran el rendimiento de la extraccin.

Comprende 4 etapas bien definidas y son:

a. Recoleccin y clasificacin botnica de la especie en estudio. b. Extraccin, separacin constituyentes qumicos. y purificacin de los

c. Determinacin estructural.
d. Ensayos farmacolgicos. Los ensayos farmacolgicos deben ser realizados a lo largo de todo el anlisis fitoqumico.

La extraccin es un proceso complejo que contempla varios fenmenos por separado o en conjunto como son: la dilisis, la desorcin, la disolucin, la difusin.

Para realizar un proceso de extraccin puede trabajarse con material fresco o seco.
Para evitar las transformaciones enzimticas, la planta se somete a un tratamiento con alcohol o un proceso de desecado provocado por calor.

TIPOS DE EXTRACTOS Y MTODOS PARA SU PREPARACIN

Oficialmente se reconocen slo tres tipos de extractos en cuanto a su forma fsica de presentacin: Lquidos o semilquidos de consistencia siruposa. Masa plstica denominada extracto slido. Extracto pulverizado o polvo seco. Teniendo en cuenta la metodologa empleada para la obtencin del extracto, pueden describirse varios tipos de mtodos relacionados con estos extractos, tales como: Infusin y Decoccin. Maceracin. Digestin Lixiviacin o percolacin.

MTODOS GENERALES DE EXTRACCIN

Con el fin de mejorar el rendimiento de la extraccin y la reproductibilidad de la misma hay que someter el material vegetal en estudio a una serie de operaciones preliminares:

a. Identificacin botnica del material: gnero, especie, origen, etc. b. Seleccin de la parte del vegetal a extraer: hojas, races, flores, semillas, etc. c. Inactivacin de los sistemas enzimticos del vegetal cuando se trabaja con material fresco (hojas y flores), es decir recin recolectado. As se asegura su integridad evitando procesos de degradacin que conlleven a la alteracin de los principios. Ello se consigue sumergiendo el vegetal en alcohol caliente unos minutos.

d. Desecacin de las plantas bajo condiciones controladas para evitar la transformacin qumica de los componentes. El proceso debe ser rpido, con temperaturas moderadas y preferiblemente con aire caliente. Si es correcta, la planta puede ser almacenada durante mucho tiempo antes de ser extrada.

Los principios activos a extraer se encuentran disueltos en el citoplasma de la clula vegetal o formando sales que se encuentran incrustadas en la clula. Para facilitar la extraccin de los mismas, la droga es sometida a proceso de molturacin o troceado que destruye las estructuras que los contienen, facilitando el rendimiento de la extraccin.

ESTUDIO FITOQUMICO DE PLANTAS BIOCIDAS

Es una Ftoqumica aplicada a las drogas naturales y comprende el anlisis de los constituyentes qumicos de las plantas, empleando para esto marchas analticas. Comprende 4 etapas bien definidas y son: a. Recoleccin y clasificacin botnica de la especie en estudio. b. Extraccin, separacin y purificacin de los constituyentes qumicos. c. Determinacin estructural. d. Ensayos farmacolgicos.

Los ensayos farmacolgicos deben ser realizados a lo largo de todo el anlisis fitoqumico.

Tabla 1. Tcnicas generales a aplicar en un estudio fitoqumico

MARCHA FITOQUMICA O SCREENING FITOQUMICO

Existen una serie de mtodos que han sido desarrollados y aplicados para una deteccin de los diferentes constituyentes qumicos en las plantas, basadas en la extraccin de stos con solventes apropiados y en la aplicacin de pruebas de coloracin o precipitacin.

Se han propuesto diversos mtodos de screenings fitoqumicos a travs de los aos, la mayora desde hace ms de 25 aos. Los mtodos ms antiguos no utilizan las tcnicas ms recientes de separacin ni consideran la presencia en las plantas de sustancias interferentes que puedan dar lugar a resultados falsos o positivos. An con el uso de las tcnicas ms modernas de screening puede dar algunos resultados errneos, por ello ninguna planta puede ser estudiada slo en base de estos resultados preliminares y menos an el uso de la planta podra estar basada slo en los resultados de este screening.

REACCIONES DE COLORACIN PARA LA DETECCIN DE COMPUESTOS ORGNICOS

Carbohidratos:

Reaccin de Molisch Gotas de muestra problema + gotas de S. R. de Molisch A (alfa naftol 2% en alcohol), agitar + H2SO4 conc. por las paredes del tubo anillo color violeta. (+) para carbohidratos (azcares). Reaccin de Antrona Gotas de muestra problema + gotas de S.R. de Antrona (antrona en H2SO4 conc. al 2%) anillo verde. (+) para carbohidratos (azcares).

Reaccin de Fehling Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Fehling A + gotas S. R. Felhing B + calor por 5-7 minutos en bao mara pp color rojo ladrillo. Reaccin de Benedict Gotas de muestra problema + gotas de S.R. de Benedict + calor por 5-7 minutos en bao mara pp color rojo ladrillo. Reaccin de Brown Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Hidrxido de sodio al 10% + calor hasta obtener coloracin amarilla, luego agregar 1 gota de + cido pcrico 2%, se obtendr una coloracin parda por formacin de cido picrmico.

 Compuestos Fenlicos:

Reaccin de Cl3Fe Gotas de muestra problema + gotas de Cl3Fe (Sol. al 1% en agua o alcohol) color verde o azul. (+) presencia de compuestos fenlicos, taninos.
Taninos: Reaccin de Gelatina Gotas de muestra problema + gotas de S.R. gelatina pp blanco (+) Taninos Reaccin de Agua de Bromo Gotas de muestra problema + gotas de agua de bromo pp. taninos condensados y no pp taninos hidrolizables.

 Grupos aminas:

Reaccin de Ninhidrina Gotas de muestra problema + S.R. de Ninhidrina (Ninhidrina al 1% en etanol) color violceo. (+) para aminocidos libres y amino grupos (calentar en algunos casos). Flavonoides:
Reaccin de Shinoda Gotas de muestra problema + S.R. Shinoda (Mg metlico + gotas de HCl conc) color rojo. (+) presencia de flavonoides, chalconas, auronas; catequina e isoflavona no dan.

 Esteroides o Triterpenoides:

Reaccin de Lieberman-Burchardat Gotas de muestra problema + S.R. de Lieberman-Burchardart (gotas de cloroformo + gotas de anhdrido actico + gotas de H2SO4 conc) color verde, azul, naranja, rojo. (+) presencia de esteroides o triterpenoides. Grupos Quinonas:

Reaccin de Borntrager Gotas de muestra problema + S.R. Borntrager (gotas de hidrxido de sodio 5%) color rojo. (+) naftoquinonas, antronas y antranonas.

 Alcaloides:

Reaccin de Bouchardat o Wagner Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Bouchardat pp pardo oscuro (+) alcaloides

Reaccin de Mayer Gotas de muestra problema + gotas de R. Mayerpp. blanco. (+) alcaloides

Reaccin de Dragendorff
Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Dragendorff pp naranja o rojo naranja (+) alcaloides (medio ligeramente cido).

 Reaccin de Popoff Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Popoff pp amarillo (+) alcaloides Reaccin de Bertrand Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Bertrand pp blanco (+) alcaloides Reaccin de Sonnenschein Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Sonnenschein pp amarillo verdoso (+) alcaloides

Reaccin de Rosenheim

Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Rosenheim (S.R. Yodo Yodurada) rojo oscuro. (+) antocianinas y flavonoides catquicos.

Reaccin de Hidroxilamina

Gotas de muestra problema + gotas de S.R. hidroxilamina pp coloreado (+) presencia de grupo carbonilo.

Reaccin para Saponinas 1 g de muestra problema + 10 mL de agua destilada. Agitar fuertemente por 1 minuto produccin de espuma por 15 minutos de 0.5 a 1 cm

 Glicsidos:

Reaccin de Vainilln sulfrico Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Vainilln sulfrico color rojizo violceo en anillo de interfase. (+) Glicsidos.
Los resultados de las marchas fitoqumicas o screening fitoqumico nos dan una referencia de la composicin qumica de un planta que se est investigando, lo cul nos ayudar a profundizar en la investigacin al realizar el fraccionamiento y el aislamiento de los constituyentes qumicos; asimismo deber complementarse estos anlisis con las respectivas cromatografas. Al realizar las marchas fitoqumicas es necesario hacer una marcha de solubilidad para conocer que solventes se utilizarn para el fraccionamiento y el correspondiente aislamiento de los constituyentes qumicos que se desee investigar.