2.

Immunohaematology Reaksi Reaksi antigen-Antibodi Berbagai bentuk reaksi antigen-antibodi yang dapat diamati yang dapat terjadi pada serologi golongan darah adalah sebagai berikut 1. Pengelompokan 2. Sensitisasi 3. Hemolisis 4. Netralisasi (Inhibisi) 5. Pengendapan 6. Fiksasi komplemen 7. Immunofluorescence 8. Radioimmunoassary (RIA) 9. Enzim terkait uji immunosorbant (ELISA)

Reaksi paling umum yang diamati di immunohaematology adalah

1. Pengelompokan Hal ini didefinisikan sebagai penggumpalan partikel atau sel darah merah yang memiliki antigen yang sesuai dengan antibodi pada permukaannya. Ini adalah 'jenis yang paling umum reaksi antigen-antibodi terlihat dalam serologi golongan darah dan membentuk titik akhir yang umum dari sebagian besar tes yang melibatkan antigen sel darah merah dan antibodi. Hal ini terjadi dalam dua tahap. a. Lampiran antibodi (sensitisasi) b. Aglutinasi (sebagai akibat tumbukan antara sel-sel merah peka, cross-linking sel terjadi dengan jembatan molekul antibodi yang mengarah ke formasi kisi).

2. Sensitisasi Hal ini didefinisikan sebagai lapisan atau mengikat antibodi pada permukaan sel-sel merah tanpa membawa tentang aglutinasi dalam salin. Karena tidak ada fenomena seperti terlihat aglutinasi atau hemolisis yang dapat diamati dalam reaksi ini, metode alternatif yang digunakan untuk menunjukkan bahwa reaksi antigenantibody telah terjadi.

3. Hemolisis Banyak antibodi ketika mereka bereaksi dengan antigen, mengaktifkan melengkapi da mengikat ke n sel darah merah. Hal ini dapat menyebabkan hemolisis dari sel-sel merah yang dikenali oleh hemoglobin diwarnai supernatan diperoleh setelah centrigugation dari campuran uji. lisis sel Merah menunjukkan adanya reaksi antigen-antibodi dan konsumsi komplemen. Untuk reaksi berlangsung, serum harus segar karena melengkapi cepat denatures dalam sampel darah yang dikumpulkan, antibodi IgM didominasi melengkapi memperbaiki, jarang antibodi IgG mungkin juga mengikat melengkapi. The marah optimal & mendatang untuk hemolisis adalah 37 C dan lebih baik dapat ditunjukkan dalam serum dibandingkan dengan plasma.

3. Reagen Digunakan Dalam Mendeteksi Reaksi Antigen-Antibodi

Saline saline isotonik adalah medium dasar di mana sel-sel ditangguhkan. Aglutinasi karena antibodi IgM dapat terjadi dalam media ini. PH dari medium harus salin 6,8-7,2.

Bovine albumin Keberadaan albumin dalam campuran reaksi mengurangi potensi zeta oleh dispensing ion natrium dan dengan demikian meningkatkan konstanta dielektrik medium. Hal ini menyebabkan sel merah untuk bergerak lebih dekat bersama dan memungkinkan IgG molekul menyebabkan aglutinasi.

Enzim Proteolitik enzim seperti papain, bromelin, tripsin dan ficin telah digunakan untuk meningkatkan aglutinasi. Mereka bertindak dengan membuang asam sialic dari membran sel darah merah, sehingga menyebabkan penurunan muatan permukaan sel darah merah. Hal ini kemudian menyebabkan penurunan potensial zeta dan memfasilitasi aglutinasi oleh molekul IgG. Enzim dikenal untuk menghancurkan M, N, S, Fya dan situs reseptor Fyb dan tidak boleh digunakan ketika tes ini antigen.

Kekuatan ion rendah garam (LISS) solusi Mengurangi kekuatan media suspensi menyebabkan penurunan kekuatan ion sekitar lokasi antigen dan dengan demikian meningkatkan penyerapan antibodi, baik kecepatan serapan serta kuantitas antibodi. Reagen LISS maka membantu dalam fase sensitisasi reaksi aglutinasi dan tidak memiliki efek pada reaksi aglutinasi berikutnya.

Makromolekul potentiating menengah Beberapa media potentiating sintetik telah diuraikan misalnya polivinil pirolidon, dekstran dan akasia gusi. Ini memiliki kecenderungan untuk menyebabkan pembentukan rouleaux dan belum mendapatkan penerimaan umum di laboratorium serologi rutin. Zat-zat bertindak dengan menyebabkan penurunan potensial zeta. Namun, polybrene (bromida hexadimethrine) telah digunakan dengan sukses dalam serologi otomatis.

Anti-manusia globulin serum Aglutinasi sel peka dapat disebabkan oleh penambahan serum glob ulin anti-manusia. AFIG membuat jembatan antara molekul IgG melekat pada sel-sel merah dan membawa aglutinasi. Ini adalah metode yang paling umum digunakan dalam immunohaematology untuk mendeteksi antigen antibodi (IgG) reaksi

4. Faktor yang Mempengaruhi Reaksi Antigen-Antibodi Suhu

Kebanyakan antibodi memiliki rentang termal, kisaran temperatur di mana mereka akan menggabungkan dengan antigen dan optimal termal, suhu di mana antibodi bila dicampur dengan antigen akan bereaksi keras. Umumnya antibodi IgM lebih reaktif pada suhu rnaging dari 4 -27 C dan antibodi IgG pada suhu berkisar antara 30 C-37 C

pH Pada pH di luar kisaran 5,5-8,5, reaksi antigen-antibodi dapat terpengaruh. reaksi terbaik diamati pada pH antara 6,5-7,5. Buffered saline pada pH 7,2 direkomendasikan untuk digunakan untuk semua investigasi irnmunohaernatologic.

Waktu inkubasi waktu inkubasi bervariasi dengan antibodi yang berbeda tetapi pekerja paling memungkinkan antara 30 menit dan 60 menit untuk reaksi antigen-antibodi terjadi. Waktu inkubasi dapat diturunkan 5-15 menit dengan mengurangi kekuatan ion dari media misalnya dengan LISS.

Pengaruh kekuatan ion Dalam NA salin normal dan Cl cluster ion sekitar dan menetralisir sebagian biaya pada reaksi antigenantibodi terjadi. Waktu inkubasi dapat diturunkan 5-15 menit dengan mengurangi kekuatan ion dari media misalnya dengan LISS.

Pengaruh sentrifugasi Sentrifugasi fasilitas aglutinasi dengan membawa sel darah merah peka bersama. Waktu dan kecepatan centrigation harus memadai untuk menghasilkan tombol sel dengan sel kemasan jelas supernatan tetapi tanpa terlalu ketat kalau tidak akan sulit untuk mengeluarkan tombol sel. Overcentrifugation dapat menyebabkan reaksi positif palsu.

Antigen-antibodi rasio Hal ini penting untuk menggunakan rasio benar antigen dan antibodi untuk reaksi yang optimal. Biasanya 2 volume serum dan 1 volume 2-5 suspensi sel% digunakan. Untuk sel tersuspensi dalam medium LISS, gunakan 1 1 rasio sel dan serum digunakan.

Sifat antigen antigen darah yang berbeda memiliki berbagai kelompok sejumlah situs antigen dan bahkan dalam sistem golongan darah tertentu, seseorang mungkin homozigot atau heterozigot. Individu-individu

homozigot telah jauh m9re antigen pada sel merah daripada heterozigot dan antibodi bisa menunjukkan pola yang berbeda reaksi, ini disebut pengaruh dosis antigen. Sistem yang menunjukkan pengaruh dosis adalah M, N, J, K dan sistem golongan darah Rhesus.

Sifat antibodi Kelas imunoglobulin, ukuran dan kekuatan antibodi adalah yang terpenting. Sebagai IgM molekul jauh lebih besar dalam ukuran, ini dapat situs antigen mengikat yang upto 35 nm terpisah dan menyebabkan aglutinasi, sedangkan antibodi IgG bisa menjembatani kesenjangan l4nm upto.

Antigen-Antibodi Reaksi in vivo Sebuah sel darah merah yang dilapisi antibodi pada permukaan adalah bertanggung jawab untuk kerusakan dengan salah satu cara berikut. 1. hemolisis Intravascular karena untuk melengkapi aktivasi. 2. hemolisis ekstravaskuler karena sensitisasi oleh melengkapi komponen dan terperosok berikutnya oleh makrofag jaringan. 3. hemolisis ekstravaskuler karena sensitisasi oleh antibodi IgG dan reseptor Fc mengikat dengan makrofag jaringan dan fagositosis 4. antibodi non-spesifik sel menyebabkan pengikatan disaring selama sirkulasi melalui sinusoid dari limpa dan hati.