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Soutenu le 13/07/2021
Devant le jury :
- Pr.A.RAIS
- Pr.A.ELHAKMAOUI
- Pr.K.KHIAT
Résumé
Le rapport de fin d’étude ainsi présenté à fait l’objet d’établir des connaissances sur le
protocole de validation d'une méthode d'analyse en chimie : la détermination du taux de
chlorure dans l’eau par dosage volumétrique.
Les courbes et l’histogramme établi à partir des résultats expérimentaux ont montré que les
concentrations pour trois niveaux sont très proches. La limite supérieure de tolérance est
inférieure à limite supérieure d'acceptabilité et aussi la limite inférieure de tolérance est
supérieur à limite inférieure d'acceptabilité. La validité de l’étude de la limite de
quantification et de l’exactitude sont aussi vérifiées.
L’étude du rendement a donné des valeurs acceptables de 97,6% pour niveau 2 et 98,08%
pour niveau 3. En effet ces valeurs ont été vérifiées comprises entre [90 et 110] %.
Par suite de ces trois études (limite de quantification, l’exactitude et le rendement), la
méthode du dosage volumétrique de chlorure par nitrate mercurique a été validée.
Remerciements
Il m’est agréable de réserver cette page en tant que témoin de reconnaissance à toutes les
personnes qui m’ont soutenu et encadré pour atteindre ce travail, une page qui est certes petite
par son espace, mais grande par les sentiments les plus distingués dont elle est imprégnée.
Je tiens à remercier tout particulièrement Mr. AKLIL Moad, mon superviseur, pour son
accueil et la confiance qu’il m’a accordée dès mon arrivée. Je suis reconnaissante pour le
temps qu’il m’a consacré tout au long de cette expérience enrichissante en répandant à toutes
mes questions ; sans oublier son encadrement et sa participation au cheminement de ce
rapport.
Enfin je tiens également à remercier toutes les personnes ayant apporté leurs aides
et collaborations pour la bonne réussite de mon projet de fin d’études.
Dédicaces
Je dédie ce travail
A mes parents :
Grâce à leurs tendres encouragements et leurs grands sacrifices, ils ont pu créer
le climat affectueux et propice à la poursuite de mes études.
Aucune dédicace ne pourrait exprimer mon respect, ma considération et mes
profonds sentiments envers eux.
Je prie le bon Dieu de les bénir, de veiller sur eux, en espérant qu’ils seront
toujours fiers de moi.
A tous mes amis, Salah, Anas, oussama, Salhi, khaoula, chaimaa, Mallas,
Salma, en témoignage de l’amitié que me partagions.
Sommaire
Résumé
Remerciements
Dédicaces
Sommaire
Liste des figures
Liste des tableaux
Liste des abréviations
INTRODUCTION.....................................................................................................................1
Chapitre 1 : Présentation de l'organisme d'accueil « Laboratoir Chales Nicolle »............2
1.1. Présentation de Laboratoire Charles Nicolle Environnement et Sécurité Alimentaire 3
1.2. Les activités générales du laboratoire LCN ESA.........................................................3
1.3. HISTORIQUE..............................................................................................................3
1.4. COMPÉTENCES.........................................................................................................4
Chapitre 2 : Généralités sur la validation d'une méthode d'analyse en chimie..................5
2.1. Validation d'une méthode d'analyse...............................................................................6
2.2. Protocole de validation...................................................................................................6
2.3. Etude de la limite de quantification................................................................................7
2.4. La fidélité.......................................................................................................................7
2.5. La justesse......................................................................................................................8
2.6. Étude de l'exactitude.......................................................................................................8
2.7. Étude des rendements...................................................................................................10
Chapitre 3 : Détermination du taux du chlorure : Dosage volumétrique par la méthode
au nitrate mercurique.............................................................................................................11
3.1. Dosage volumétrique....................................................................................................12
3.2. Choix de l’indicateur de pH.........................................................................................12
3.3. Détermination du taux du chlorure par méthode volumétrique au nitrate mercurique
...............................................................................................................................................12
3.4. Résultats et discussions...............................................................................................16
Conclusion Générale...............................................................................................................24
Les références bibliographiques............................................................................................25
C : critére calculé
Réf : référence
LQ : limite de quantification
FI : fidélité intermédiaire
Méth : méthode
EN : écart normalisé
pH : potentiel d’hydrogène
Le Chlore , éliment chimique du groupe halogènes le plus abondants dans l’environnement , qui
se trouve principalement sous forme de sels. Le plus répandu est le chlorure de sodium (NaCl)
que l'on trouve dans les mers et dans des gisements terrestres.
Le taux résiduel optimal en chlore en eau; dans le système d’approvisionnement collectif; est
compris entre 0,2 et 0,5 mg/l. Pour un taux supérieur à ce seuil ; l’eau devient nuisible à la santé.
En effet, la consommation de l’eau avec taux élevé en chlore peut provoquer des douleurs dans
la poitrine, de la rétention d’eau dans les poumons voire des œdèmes pulmonaires.
1
Chapitre 1 :
Présentation de l'organisme d'accueil
« Laboratoire Charles Nicolle »
25
1.1. Présentation de Laboratoire Charles Nicolle Environnement et Sécurité Alimentaire
1.3. HISTORIQUE
LCN ESA, créé en 2007 à casablanca, ils ont 3 départements ( Physicochimie , Microbiologie
et Qualités ), c’est 1er laboratoire au Maroc agréé par l’ONSSA (Office nationale de Sécurité
Sanitaire des produits Alimentaires) en 2013.
25
Accréditation sur l’analyse de Legionella et de Legionnella pneumophila.
• 2013 1er laboratoire agréé par l’ONSSA (Office nationale de Sécurité Sanitaire des
produits Alimentaires) pour le contrôle microbiologique des denrées alimentaires.
• 2014 1er laboratoire accrédité au Maroc pour le contrôle microbiologique des surfaces et
plans de travail, et le contrôle de la qualité de l’air ambiant.
• 2015 Accréditation dans le domaine de la physico-chimie des aliments : Contrôle des
produits de pêche : Histamine (par fluorimétrie) et ABVT.
• 2015 Extension de la portée d’agrément par l’ONSSA (Office nationale de Sécurité
Sanitaire des produits Alimentaires) pour le contrôle microbiologiques des eaux et
physico-chimiques de aliments.
• 2016 1er laboratoire accrédité au Maroc sur les prélèvements d’Air et des surfaces.
• 2017 1er laboratoire accrédité au Maroc pour l’analyse de :
•Histamine par HPLC (Méthode de réfrence)
•L’étiquetage nutritionnel (Groupe 1),
•Le contrôle de la stabilité des conserves alimentaires,
•L’activité de l’eau.
• 2018 1er laboratoire au Maroc agréé par l’ONSSA pour plus de 90% de sa portée
-
d’accréditation dans les domaines :
2021
•Microbiologie des Aliments, Eaux, Air et Surface;
•Physico-chimie des aliments;
•Etiquetage nutritionnel (Groupe 1);
•Test de stabilité.
1.4. COMPÉTENCES
25
Chapitre 2 :
Généralités sur la validation d'une
méthode d'analyse en chimie
25
2.1. Validation d'une méthode d'analyse
2.1.1 But
Le but de l'évaluation d'une méthode d'analyse est de démontrer qu'elle correspond à l'usage
pour lequel elle est prévue, elle correspond à l'ensemble des opérations nécessaire pour
prouver que le protocole est suffisamment exacte et fiable pour avoir confiance dans les
résultats fournis et ceci pour un usage déterminé.
2.1.2 Objet
Pour la validation d'une méthode d'analyse en chimie doit étre décrit les dispositions et les
protocoles afin d'acceder l'exigence de la norme ISO 17025.
Protocole de validation
Etude de la limite de
Etude des rendements
quantification
Etude de l'exactitude
25
2.3. Etude de la limite de quantification
La limite de quantification d’une méthode est la concentration minimale qui peut être
quantifiée à l’aide d’une méthode d’analyse avec une fidélité et une justesse acceptables dans
des conditions expérimentales indiquées.
Les critères de justesse et de fidélité retenus pour fixer cette valeur de LQ doivent être
clairement définis (ex : CV de répétabilité <25%), la valeur peut être déduite à partir de
l’approche globale fondée sur le profil d’exactitude, ou par l’estimation sur une plage d’étude
de ces deux caractéristiques séparément.
2.4. La fidélité
La fidélité exprime l’étroitesse de l’accord entre une série de mesures provenant de multiples
prises d’un même échantillon homogène dans des conditions prescrites. La fidélité fournit une
indication sur les erreurs liées au hasard. La fidélité peut être évaluée à trois niveaux : la
répétabilité, la fidélité intermédiaire (intra laboratoire) et la reproductibilité (inter
laboratoires). La fidélité traduit uniquement la distribution des erreurs aléatoires et n’a aucune
relation avec la valeur vraie ou spécifiée. La mesure de fidélité est calculée à partir de l’écart-
type des résultats d’essais et peut être exprimée sous forme de coefficients de variation (CV).
L’étude de la répétabilité ne peut être faite seule mais doit prendre en compte la fidélité
intermédiaire et / ou la reproductibilité. Une étude de répétabilité sans prendre en compte ces
sources d’erreur conduit à une estimation biaisée de la répétabilité.
Les calculs sont basés sur les fascicules de la norme ISO 17025. Dans cette norme, le
paramètre de répétabilité estimé est exprimé sous forme :
- De coefficient de variation
25
- De limite de fidélité.
• Reproductibilité : conditions où les résultats sont obtenus par la même méthode sur des
échantillons d’essais identiques dans différents laboratoires, avec différents opérateurs et
utilisant des équipements différents.
2.5. La justesse
25
homogènes. Ce choix sera argumenté.
Pour chacun de ces domaines d'évaluation, une étude d'exactitude sera menée sur des
échantillons jugés représentatifs et disposant d'une valeur de référence.
A chaque valeur de référence attribué à un échantillon étudié, une incertitude-type ou un
écart-type uRéf est associé selon le tableau suivant :
Référence incertitude-type
- uRéf est L'incertitude-type sur la valeur de référence.
RéfMRC
• Soit uRéf provient de l'organisateur de la comparaison
interlaboratoires.
RéfEIL
• Soit uRéf = écart-type de reproductibilité interlaboratoires / p , p étant
le nombre de laboratoires pris en compte pour le calcul de l'écart-type.
- uRéf = écart-type des p résultats obtenus avec une méthode de
RéfMéth
référence / p.
- uRéf = écart-type ou incertitude-type caractérisant la valeur de l'ajout
RéfAjout
du(e) à la préparation, aux matériaux et matériels utilisés.
2.5.2. Organisation
Préparer ou choisir 3 échantillons couvrant le domaine d'application de la méthode en termes
de concentration ou grandeur pour une matrice donnée.
Il faut choisir :
- Un niveau bas correspondant à une limite de quantification présupposée ou une à une limite
basse du domaine d'application de la méthode.
- Un niveau moyen et un niveau haut de domaine d'application de la méthode.
Analyser chaque échantillon dans k≥ 5 série dans des conditions de fidélité intermédiaire et
dans le temps de stabilité de l'échantillon pour la matrice considérée. Si l'échantillon est
instable procéder à plusieurs préparations.
Pour chaque échantillon et dans chaque série, effectuer n≥2 répétition dans des conditions de
répétabilité.
À chaque échantillon est attribuée une valeur de référence (Réf) associée à l'incertitude-type
ou l'écart-type associée à la valeur de référence (uRéf).
25
2.5.3. Interprétation des paramètres d'exactitude
► Interprétation de l'écart normalisé pour un niveau :
|Ź −Réf |
√
Vérifier que l'écart normalisé EN = S FI 2 est inférieure ou égale à 2.
2
+u Réf
n
Ź LQ −2∗S ❑
FI > Réf – EMA
Ź LQ +2∗S ❑
FI < Réf + EMA
Si au moins une des deux inégalités n'est pas vérifiée alors l'exactitude de la méthode sur le
niveau analysé n'est pas vérifié.
Pour l'évaluation de l'exactitude le laboratoire fixe un EMA maximum de 20%*Réf pour les
niveaux de haute concentration ou grandeur, et de 60%*Réf pour les faibles concentrations ou
grandeur.
25
Chapitre 3 :
Détermination du taux en chlorure dans :
Dosage volumétrique au nitrate
mercurique
25
3.1. Dosage volumétrique
Le chlorure est dosé, en milieu acide ( Acide nitrique HNO 3) en présence d'un mélange de
deux indicateurs; diphénylcarbazone et bleu de bromphénol., la solution titrante est le nitrate
mercurique,
le schémadu mode opératoire est représenté sur figure 2:
25
Figure 2 : Schéma de dosage volumétrique
+ + =
diphénylcarbazone bleu de bromophénol alcool l'indicateur du pH
25
3.3.3.2. Préparation de solution d'acide nitrique environ ( N/3)
L’étape de préparation de solution d'acide nitrique environ (N/3) est représenté sur figure 4 :
La solution d'acide nitrique environs N/3 obtenue, à partir l’addition de 23 ml d'acide nitrique
concentré (65%) dans une fiole jaugée de 1000ml doit étre homogène .
+ =
acide nitrique L’eau distillée acide nitrique
environ N/3
L’étape de préparation de solution étalon de chlorure de sodium NaCl (N/3)est représenté sur
figure 5 :
La solution aqueuse de chlorure de sodium (N/3) est préparée à partir l’introduit du 5,85g
dans un ballon jaugé de 1L.
+ =
chlorure de sodium L’eau distillée solution étalon de
chlorure de sodium
25
Figure 5 : Préparation de solution étalon de chlorure de sodium NaCl
- Peser 17,13 g de nitrate mercurique, l'introduire successivement dans une fiole jaugée de 1L.
+ + =
solution de nitrate
nitrate mercurique acide nitrique L’eau distillée
mercurique
.... 2
....
Expression des résultats Dosage de chlorure
Pour une prise d’essai de 100 • Titrer au nitrate mercurique
ml : V × 3,55 × 10 donne la jusqu’à apparition de la
teneur en mg de chlorures .............. première teinte violet foncé
contenu dans un litre d’eau de persistant ;
l’indicateur de pH. • Titrer alors lentement en
3 agitant vigoureusement .
25
Figure 7 : Schéma de mode opératoire
25
En calcul la masse de NaCl pour chaque niveau par cette relation :
m = M(NaCl)/M(Cl) × C × V
Résultats
Aprés l’ajout 0,5ml de l’indicateur du pH dans 100ml solution de NaCl, ce dernier il devient
entre couleur bleu à violet plus clair, ça dépend la quantité de NaCl, en suite on ajoute gout à
gout acide nitrique jusqu’à d’une couleur jaune foncé, et dernièrement , titré la solution par
nitrate mercurique jusqu’à apparitions de premier teinte violet foncé, c’est le point
d’équivalence.
25
Figure 8 : Dosage de chlorure par nitrate mercurique
En analysant 2 fois par jour pendant 5 jours, on retrouvent les concentrations suivants par
cette relation : V × 3,55 × 10
25
Interprétation les moyennes des concentrations , sous forme des courbes :
Courbe de niveau 3
50.8
50.4
Concentration de l’exactitude
50
49.6
49.2
48.8
J1 J2 J3 J4 J5
À partir les courbes, on remarque que les concentrations que nous avons trouvé trés proches
que les concentrations de l’exactitude 2mg/l, 10mg/l et 50mg/l, alors ils sont vérifié.
25
Les statistiques pour chaque niveau :
Nombre de séries 5 5 5
25
Le CV de répétabilité pour chaque niveau , il est inférieure à 25%, donc les statistiques
précédentes sont vérifiés.
Pour validé l’étude de l’exactitude , il faut calculer les limites d’acceptabilité et de tolérance
pour chaque niveau , et on présente les résultats sous forme histogramme et tableau :
60
50
40
30
20
10
0
Niveau 1 Niveau 2 Niveau 3
À partir le figure, les deux inégalités suivantes : Z - 2 × SFI > REF -EMA et Z + 2 × SFI <
REF + EMA sont vérifiés pour chaque niveau de concentration.
25
L'écart normalisé EN de chaque niveau :
Niveau 1 : EN= 1,31 , Niveau 2 : EN = 1,04 , Niveau 3 : EN = 1,78 ==> vérifiée < 2
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4 0 50 49,93 47,23 99,86 94,46 97,16 14,58
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Conclusion Générale
La détermination du taux en chlorure dans l’eau a été réalisés par dosage volumétrique .
La solution nitrante est le nitrate mercurique.
Différents types de résultats ont été analysés notamment des études de statistiques,
limites d’acceptabilité et de tolérance. La confrontation de ces résultats a montré la
conformité de la méthode par les normes ISO17025 et par la vérification de l’étude de
la limite de quantification , de l’exactitude et de rendement.
Ainsi par cette présente étude; on conclu que la méthode de détermination du taux en
chlorure dans l’eau par dosage volumétrique a été validée.
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Les références bibliographiques
https://uel.unisciel.fr/chimie/solutaque/solutaque_ch08/co/apprendre_ch8_01.html
https://www.mindomo.com/fr/mindmap/controle-de-la-qualite-par-dosage-
cec06bb213a64c63a15203b3c81be6ab
http://lcnesa.ma
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