Cours de Biologie Moléculaire Tissemsilt 2021

[Cours Biologie Moléculaire 3eme Biochimie] Tissemsilt University
Cours de Biologie
Moléculaire
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Structure de l’ADN et l’ARN
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Mutations, mutagénèse et détection

2.1 ORIGINE DES MUTATIONS
Pour survivre et se reproduire, les organismes vivants doivent répliquer fidèlement

leur ADN et le protéger des détériorations physico-chimiques. En effet, des
mutations chez l'homme peuvent par exemple dérégler le contrôle strict de la
division cellulaire, entraîner la prolifération continue de certaines cellules et former
une tumeur cancéreuse. De la même manière si les mutations concernent l’ADN du
spermatozoïde ou de l’ovule des parents, des maladies génétiques peuvent en
résulter chez l’enfant. Des mécanismes moléculaires de correction et de réparation
des défauts de l’ADN minimisent ces risques et agissent à l’instar de filtres, certes
imparfaits, pour éliminer les dommages causés à l’ADN par les erreurs de
réplication ou les agents mutagènes apportés par les nuisances environnementales.
Dans certaines conditions, un taux élevé de mutations peut permettre à certains

organismes d'évoluer avec rapidité et donc de s’adapter plus efficacement à leur
environnement. Un exemple particulièrement éclairant est fourni par les mutations
bactériennes entraînant l'apparition de résistance aux antibiotiques
Les mutations liées à des erreurs de duplication de I' A D N
Les mutations les plus simples portent sur la modification d’une base seulement. Ce
sont les transitions et les transversions (Fig. 2.2). On les nomme aussi mutations
ponctuelles. Elles sont à l'origine de la notion de polymorphisme d'un seul
nucléotide (SNP pour Single Nucleotide Polymorphism). À ce type de mutations se
rattachent aussi les insertions ou les délétions d'un seul nucléotide. Les autres
modifications portent sur des fragments d’ADN de taille plus importante. Elles sont
engendrées généralement par des événements de recombinaison ou de
transposition qui se rangent parfois dans la catégorie des mutations
chromosomiques.
Figure N 2.2 Changements de bases pyrimidiques ou puriques par transition ou

transversion.
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La fréquence des mutations quel que soit leur type varie de 10-6 à 10- 1 1 par cycle de
réplication de l’ADN avec des régions chromosomiques particulièrement instables
où la fréquence est très élevée. Elles sont nommées pour cela points chauds de
mutations. Il faut ranger dans cette catégorie les séquences répétées de deux à
quatre nucléotides, appelées microsatellites. Ce sont des répétitions de bases
cytosine et adénine sur un brin d’ADN qui s'écrivent (CA) n ou en sens inverse sur
l’autre brin (TG) w Lors de la réplication de ces microsatellites, des dérapages de la
machinerie de duplication se produisent fréquemment, entraînant des variations
dans le nombre n de répétitions effectivement copiées. Pour un microsatellite
donné, il est donc fréquent d’observer parmi les individus d'une même espèce, un
fort polymorphisme du nombre de répétitions (c'est-à-dire de la taille du
microsatellite). Compte tenu du nombre très élevé (plusieurs centaines de milliers)
de microsatellites dans le génome des eucaryotes, notamment chez l'homme, le
choix approprié de certains d'entre eux et la combinatoire qui en découle dans leur
polymorphisme de longueur, constitue un moyen technique efficace pour
caractériser tout individu de l’espèce concernée. C'est la technique dite des
empreintes génétiques largement utilisée dans les démarches d’identification des
personnes et de leurs caractéristiques génétiques.
Figure N°2 Deux cycles de réplication sont nécessaires pour qu'une mutation
ponctuelle soit définitivement introduite dans une région de l'ADN fils.
Les mutations provoquées par des agents mutagènes
Outre les erreurs spontanées de réplication, les mutations sont parfois le résultat de
détériorations de l’ADN provoquées par des agents mutagènes divers. Les radiations
ionisantes et ultraviolettes, certaines substances chimiques (agents alkylants,
méthylants, intercalants) sont en cause.
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 L'hydrolyse spontanée de la liaison N-glycosidique unissant les bases

puriques au désoxyribose crée des pseudo-nucléotides sans guanine ou
adénine, dits apuriniques qui bloquent la réplication.
 Les radicaux libres tels O2 ou OH· engendrés à partir de l'oxygène par les
radiations ionisantes ou certains agents chimiques attaquent l’ADN et
provoquent des « adducts » transformant les bases ciblées en sites
hautement mutagènes.
 La lumière ultraviolette de longueur d’onde voisine de 260 nm (proche UV)
est fortement absorbée par les purines et pyrimidines, en raison de leur
système de doubles liaisons conjuguées. Cela peut provoquer tout
particulièrement la fusion photochimique de deux thymines adjacentes et
donner un dimère de thymine qui ne peut pas efficacement s’apparier avec
les adénines complémentaires ce qui bloque l'ADN polymérase lors de la
réplication.
Figure 2.4 Formation et structure d'un dimère de thymine.

 Les radiations ionisantes (rayons-y et rayons X), seules ou associées à des
agents eux-mêmes ionisables en espèces réactives, provoquent des cassures
aléatoires de la double hélice d’ADN qui conduisent souvent à la mort
cellulaire. Bien maîtrisé, leur emploi thérapeutique sert à limiter la
prolifération des cellules tumorales dans le traitement de certains cancers.
LES DIFFÉRENTS TYPES DE MUTATIONS MODI FIANT OU NON LA FONCTION

Les mutations géniques
Ce sont tout d'abord les mutations ponctuelles, comme les insertions, les délétions
et les substitutions qui appartiennent à la catégorie des transitions et des
transversions (voir Figure 2.2). Quand elles interviennent au sein d'une séquence
génique codant une protéine, trois principales conséquences peuvent en résulter :
 La mutation sera dite « silencieuse » si l'acide aminé n'est pas modifié ce qui
est souvent le cas si le changement de base concerne la 3e position du codon
 La mutation sera dite « faux sens » si l’acide aminé est différent de celui
normalement codé.
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 La mutation sera dite « non sens » si un codon stop est formé, ce qui aboutit à
une protéine tronquée.
 Les mutations « faux sens » par substitution de bases, ainsi que les mutations «
non sens », respectueuses du cadre de lecture, à l'origine de maladies humaines,
sont les plus fréquentes (59 %). Les délétions représentent 22 % et les
insertions/duplications, 7 %. Les mutations modificatrices des sites d’épissage
et celles présentes dans les régions régulatrices des gènes, représentent environ
11 %
Figure 2.6 Délétion de trois bases dans la séquence ADN du chromosome 7 humain
(gène CFTR pour Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator).
Cette délétion, très fréquente chez les patients atteints de mucoviscidose, élimine une
phénylalanine de la séquence polypeptidique avec comme résultat d'inactiver la protéine
qui contrôle le passage des ions chlore à travers la membrane des tissus sécréteurs ce qui
bloque leur fonctionnement normal par un encombrement dû aux mucosités et autres
sécrétions qui ne sont pas évacuées.
Les mutations chromosomiques : amplifications, délétions, translocations,
inversions, perte d'hétérozygotie
Les mutations peuvent intéresser des régions entières de chromosomes. Ce sont des
événements qui se produisent au moment de la division cellulaire lorsque des
recombinaisons ont lieu, particulièrement au moment de la méiose donnant
naissance aux gamètes. Ces derniers transmettront à la descendance la mutation
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chromosomique dont ils sont porteurs. Comme pour les mutations ponctuelles, les
mutations chromosomiques se présentent sous la forme de duplications (ou
amplifications) et de délétions de régions entières qui amènent souvent la fusion de
gènes à l'origine séparés. Dans un organisme qui présente deux allèles différents
pour un même gène (état hétérozygote), la délétion ou un événement de
recombinaison spécifique peuvent conduire à la perte de l'un des deux allèles et à la
perte de l'hétérozygotie.
Figure 2.7 Les cinq principaux types de mutations chromosomiques.
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 Le gène lacZ code l'enzyme β-galactosidase, qui décompose le lactose (en

galactose et glucose)
 Le gène lacY code la galactosidase perméase, une protéine de transport pour
le lactose.
 Le gène lacA code la thiogalactoside acétyltransférase.
 Le gène lacI (gène adjacent n’appartenant pas à l’opéron) code un répresseur
qui bloque la transcription de l’opéron lactose.
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Épissage alternatif :
• Le génome humain compte entre 20 000 et 30 000 gènes
• Le protéome correspond à l’ensemble des protéines codées par l’ensemble
des gènes
• Le protéome humain compte plus de 100 000 protéines, selon les auteurs
• L’ADN est organisé en gènes. L’ensemble des gènes forme le génome d’un
organisme. La discipline qui a comme champ d’action l’étude des gènes est
appelée génomique
• La plupart des gènes codent pour des protéines. L’ensemble des protéines
exprimées par un organisme est appelé son protéome
• La discipline qui a comme champ d’action l’étude des protéines est appelée
protéomique
• En faisant une comparaison entre le nombre de gènes et de protéines, on
trouve qu’il y’a 20000 à 30000 gènes pour plus de 100000 protéines. Comment
expliquer cette différence
• Dans les cellules des follicules thyroïdiens on isole:
- l’ARN pré-messager - les ARN messagers à l’origine de la synthèse de la
calcitonine et de la CGRP
• L’ARN pré-messager résultant de la transcription du gène Calc-1 est constitué de:
6 exons et 5 introns
• L’utilisation de sondes spécifiques de chaque intron et exon permet de connaître

la constitution des ARN messagers de la calcitonine et de la CGRP

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Mutations, mutagénèse et détection

Pour survivre et se reproduire, les organismes vivants doivent répliquer fidèlement

Dans certaines conditions, un taux élevé de mutations peut permettre à certains

Les mutations liées à des erreurs de duplication de I' A D N

Figure N 2.2 Changements de bases pyrimidiques ou puriques par transition ou

Les mutations provoquées par des agents mutagènes

 L'hydrolyse spontanée de la liaison N-glycosidique unissant les bases

Figure 2.4 Formation et structure d'un dimère de thymine.

LES DIFFÉRENTS TYPES DE MUTATIONS MODI FIANT OU NON LA FONCTION

Figure 2.7 Les cinq principaux types de mutations chromosomiques.

 Le gène lacZ code l'enzyme β-galactosidase, qui décompose le lactose (en

• L’utilisation de sondes spécifiques de chaque intron et exon permet de connaître

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