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Inmovilizacin Enzimtica Con la inmovilizacin de las enzimas se han podido superar inconvenientes, permitiendo que el proceso enzimtico sea

econmicamente rentable. Los biocatalizadores disueltos en buffers, usualmente se conocen como enzimas solubles o nativas. El trmino enzimas inmovilizadas, fijas o no-solubilizadas denota aquellas unidas a un soporte. El material al que se encuentran unidas se conoce como: portador, soporte o matriz. El agente encargado de la unin enzima-soporte se conoce como brazo de entrecruzamiento, agente bifuncional, o activador-portador.

Se Confina o localiza a la enzima en una regin definida del espacio Los grados de libertad de movimiento dependen de las molculas de enzimas por su unin a un soporte

Metodos pueden ser de Retencion Fisica o Union Quimica

Retencion Fisica . Atrapamiento, atrap en gel, Micelas Reversas, Microencapsulado Retencin fsica de la enzima en los espacios intersticiales de un gel polimrico entrecruzado, inicialmente soluble en agua, despues del entrecruzamiento, la enzima queda inmovilizada por atrapamiento fisico. Geles: alginato, agar, k-carragenina, poliacrilamida, etc. Una variante de sta tcnica implica el uso de enzimas inmovilizas en fibras sintticas, muy comn en industria farmacutica para la produccin de antibiticos.

Retencion Fisica . Atrapamiento: atrap en gel, Micelas Reversas, Microencapsulado Las enzimas estn confinadas en membranas semipermeables que permiten el libre paso de sustratos y productos (bajo peso molecular), pero no de enzima (alto peso molecular). Membranas pueden ser::: Permanentes: originadas por polimerizacin interfacial (dextrinas). No permanentes: generadas por surfactantes (micelas reversas).

Retencion Fisica . Atrapamiento: atrap en gel, Micelas Reversas, Microencapsulado Las molculas de surfactantes pueden formar micelas de modo inverso a como ocurre en fase acuosa, cuando se forman en solventes orgnicos, donde la porcin hidrofbica se sita hacia afuera por afinidad con el solvente.

Retencion Fisica . Inclusion de membranas: Bioreacctores de membrana y Membranas fibra hueca Los reactores de membrana cumplen dos funciones simultneas: biocatlisis y separacin.

Union Quimica: Union a Soportes Mtodos de inmovilizacin ms utilizados, se dispone de una mayor informacin, eleccin del soporte y del tipo de enlace resultan determinantes en el comportamiento de la enzima. Matrices organicas: Polimeros naturales y sintticos (alginato colgeno) Matrices Inorganicas: Minerales y Minerales Sinteticos (arcillas, vidrio) Un buen soporte para inmobilizacin debe cumplir con las siguientes propiedades: Gran rea superficial y alta permeabilidad Suficientes grupos funcionales para el anclaje de enzimas en condiciones no desnaturalizantes. Carcter hidroflico Insolubilidad en agua Estabilidad qumica y trmica Resistencia mecnica Alta rigidez y forma de partcula variable Resistencia al ataque microbiano Regenerabilidad Baja toxicidad Precio razonable

Union Quimica: Union Ionica Emplear resinas de intercambio inico, las cuales contienen grupos funcionales cargados electroqumicamente Enlaces inicos, mas fuertes que la adsorcin fsica por fuerzas de van der Waals.

Union Quimica: Union Covalente La unin covalente es quiz el mtodo de inmovilizacin ms utilizado en la industria estabilidad de la unin. Los aminocidos que se emplean para la formacin de enlaces con el soporte son: Principalmente: lisina, cistena, tirosina e histidina En menor medida: metionina, triptfano, arginina, cido asprtico y glutmico

Union Quimica: Inmovilizacin Bioespecfica Inmovilizacin empleando anticuerpos monoclonales

Union Quimica: Reticulado puro Entrecruzamiento o cross-linking, es una tcnica que ha sido ampliamente utilizada en la estabilizacin de muchas enzimas Reactivos bifuncionales: dialdehdos, diaminosteres, etc.

El resultado del reticulado son enzimas con enlaces intermoleculares irreversibles capaces de resistir condiciones extremas de pH y temperatura. Co-reticulado Es el entrecruzamiento de las enzimas con una protena sin actividad enzimtica y rica en residuos de lisina (por ejemplo, la albmina bovina). es comn que se utilice en combinacin con un soporte como una resina o membrana, donde las enzimas adsorbidas fisicamente son entrecruzadas en la superficie Seleccin del Metodo La seleccin debe tomar en cuenta: Las condiciones de la reaccin. El tipo de sustrato y producto que tengan que ser procesados. El tipo de reactor que se vaya a utilizar En muchas ocasiones el presupuesto y recursos disponibles Effectos de Inmovilizacion La enzima inmovilizada es un sistema heterogneo en el cual todos los componentes que intervienen en el proceso cataltico se encuentran en interface entre el medio de reaccin y la fase constituida por el soporte con la enzima. La inmovilizacin altera significativamente el comportamiento de las enzimas, sobre todo la estabilidad y la actividad enzimtica. Effecto de Estabilidad Enzimatica Se observa un incremento en la estabilidad de las enzimas debido a: Estabilizacin conformacional: Debida a las uniones multi-puntuales enzima-soporte.

La estructura terciaria de la enzima adquiere una mayor rigidez y se hace ms resistente a la desactivacin trmica o qumica. Autoproteccin en el caso de enzimas proteolticas: Se ha visto que la unin de proteasas a un soporte elimina su capacidad auto-proteoltica.

Effectos sobre actividad La prdida total de la actividad enzimtica se puede deber a: La unin al soporte se produce de tal forma que la unin del sustrato al centro activo est impedido. Los grupos reactivos del soporte reaccionan con algn aminocido que forme parte del centro activo o que sea esencial para la actividad cataltica de la enzima. La inmovilizacin puede originar un cambio conformacional que da lugar a una forma inactiva. Las condiciones del proceso de inmovilizacin causan la desnaturalizacin o desactivacin de la enzima.