Replicao do DNA

Nuclease uma enzima capaz de quebrar as ligaes entre os nucleotdeos, que so subunidades do cido nucleico. Exonucleases so enzimas que trabalham pela clivagem de nucleotdeos um de cada vez a partir do final de uma cadeia de polinucleotdeos. A reao de hidrlise, que quebra as ligaes fosfodister, ocorre no final da extremidade 3 ou da 5 '. Seu parente prximo a endonuclease que cliva ligaes fosfodister no meio de uma cadeia de polinucleotdeos. Eucariontes e procariontes tm trs tipos de exonucleases envolvidos no volume de negcios normal do mRNA : 5-3 'exonuclease', que uma protena destampamento dependentes, 3 '5' exonuclease, uma protena independente, e poli (A) especfico 3 '5' exonuclease. Nas arqueobactrias e eucariotos, uma das principais vias de degradao do RNA realizada pela protena multi- exosome complexo, que consiste basicamente de 3 '5' exoribonucleases . Importncia para polimerase RNA polimerase II conhecida por estar em vigor durante a terminao da transcrio, que trabalha com uma 5 'exonuclease (Xrn2 gene humano) para degradar a transcrio recm-formada a jusante, de deixar o local de poliadenilao e, simultaneamente, o tiro da polimerase. Este processo envolve a exonuclease da captura at a pol II e que encerra a transcrio. Pol I sintetiza nucleotdeos do DNA no lugar do primer de RNA que tinha acabado de remover. DNA polimerase I tambm tem 5 'para 3' exonuclease atividade, que usado na edio e reviso de erros do ADN. A helicase ou DNA helicase uma enzima que promove a abertura da hlice de DNA, separando-o em duas fitas simples para que possa sofrer replicao[1]. A helicase quebra as ligaes de hidrognio entre as bases azotadas (purinas ou pirimidinas) de ambas as cadeias de DNA, fazendo com que estas se separem. Esta enzima move-se ao longo da cadeia dupla de DNA utilizando energia da hidrlise de ATP para separar as duas cadeias da molcula.

Esquema da forquilha de replicao de DNA. Ao funcionarem durante o processo de replicao do DNA, as helicases recebem "ajuda" da enzima DNA-girase (ou topoisomerase), que desenrola a cadeia, diminuindo a tenso medida que as helicases avanam, facilitando assim o seu trabalho. Depois

de aberta, a dupla cadeia de DNA no se volta a ligar devido aco das protenas ligadoras de fita simples, que mantm a cadeia aberta, para poder ser replicada. Replicao do DNA Origem: Wikipdia, a enciclopdia livre.

Figura 1: Clssico esquema da replicao, demonstrando o modelo de replicao semi-conservativo. Obs.: foi omitido as enzimas que participam do processo

A replicao o processo de duplicao de uma molcula de DNA de dupla cadeia. Os mecanismos de replicao dos procariotos e eucariotos no so idnticos. Como cada cadeia de DNA contm a mesma informao gentica, qualquer uma delas podem servir como molde. Por isso a replicao do DNA dita semi-conservativa. A replicao deve acontecer antes da diviso celular. Em procariotos a replicao ocorre entre as divises celulares, enquanto que nos eucariotos ocorre na fase S da interfase (para maiores detalhes, veja ciclo celular). A replicao tambm pode ser reproduzida em laboratrio atravs de um ensaio conhecido como PCR. O DNA no se replica sozinho Para que o processo de replicao se inicie, necessria a atuao de uma enzima, a DNA helicase. A enzima liga-se cadeia de DNA e desliza sobre esta, quebrando as ligaes entre as duas cadeias de nucletidos - ligaes de hidrognio - ficando ento as duas cadeias de DNA separadas. Em seguida, os nucleotdeos livres existentes no ncleo ligam-se, por complementaridade de bases, cadeia de DNA. De uma cadeia original de DNA formam-se duas. A replicao do DNA o processo de auto-duplicao do material gentico, mantendo o padro de herana ao longo das geraes. Cada cadeia do DNA duplicada formando uma fita hbrida, isto , a cadeia velha pareia com a cadeia nova formando um novo DNA; de uma molcula de DNA formamse duas outras iguais a ela. Cada DNA recm formado possui uma das cadeias da molcula-me, por isso o nome semi-conservativa.

Ao mesmo tempo em que a DNA helicase vai abrindo a molcula de DNA, outra enzima chamada polimerase liga um grupo de nucleotdeos que se pareiam com os nucleotdeos da molcula-me. Alm da capacidade de duplicao, o DNA tambm responsvel pela sntese de outro cido nucleico muito importante para a clula: o cido ribonucleico ou RNA. Da mesma forma que o DNA, o RNA tambm uma molcula grande, formada por vrias partes menores chamadas nucleotdeos. Por isso diz-se que tanto DNA como RNA so polinucleotdeos. Etapas da polimerizao do DNA A replicao inicia-se numa zona da cadeia denominada tripleto de iniciao. Neste local as helicases comeam a abrir a cadeia para ambos os lados da origem quebrando as ligaes de hidrognio existentes entre as bases complementares e dando origem a uma bolha de replicao que constituda por duas forquilhas de replicao. Em seguida liga-se s cadeias de DNA a enzima RNA primase que sintetiza um primer, que consiste numa sequncia de bases de RNA que iniciam a sntese, visto que a DNA polimerase III no tem a capacidade de o fazer pela ausncia de grupos hidroxila -OH expostos. Aps a sntese do primer, a DNA polimerase III vai continuar o processo que ocorre no sentido da extremidade 5' para a extremidade 3' da nova cadeia. Como a DNA polimerase vai atuar para ambos os lados da origem de replicao, por cada cadeia simples de DNA existente, uma parte da nova cadeia ser sintetizada na direo da replicao. Esta cadeia sintetizada de modo contnuo e denomina-se cadeia contnua. Existe uma outra parte da cadeia em que a direo da replicao contrria direo da sntese, esta cadeia sintetizada descontinuamente, isto , a RNA primase vai sintetizar vrios primers ao longo da cadeia, inicialmente prximo da origem de replicao e posteriormente a maior distncia. Os fragmentos formados so denominados fragmentos de Okazaki. Entre estes fragmentos existem os primers que sero removidos e substitudos por DNA, pela ao de uma outra DNA polimerase, a DNA polimerase I. Como a DNA polimerase no consegue estabelecer a ligao entre esses nucletidos e os que se encontram nas extremidades dos fragmentos de Okazaki, formam-se lacunas entre o grupo fosfato de um e o carbono 3' do outro. Esses nucletidos so posteriormente ligados pela DNA ligase. A esta cadeia chama-se cadeia descontnua. As partes finais da cadeia de DNA denominadas telmeros so sintetizadas pela RNA telomerase por um processo de transcrio inversa, isto , esta enzima sintetiza DNA tendo por molde RNA. Durante todo o processo de replicao atuam outras enzimas entre elas as SSB e as topoisomerases que tm como funo evitar o enrolamento da cadeia durante a sntese.

Trs hipteses tentaram explicar a replicao do DNA e foram testadas por Mathew Meselson e Franklin Stahl em 1958: - teoria conservativa: Cada fita do DNA sofre duplicao e as fitas formadas sofrem pareamento resultando num novo DNA dupla fita, sem a participao das fitas "parentais". Assim, fita nova com fita nova formam uma dupla hlice e fita velha com fita velha formam a outra dupla fita; - teoria semi-conservativa: Cada fita serve de molde para replicar uma nova fita complementar, produzindo duas molculas de DNA filhas. Cada molcula filha contm duas fitas de DNA com orientao antiparalela. Este processo chamado de replicao semi-conservativa, porque o par parental separado em duas metades. A nova molcula filha contm apenas uma fita parental intacta (CHAMPE, 1996);

- teoria dispersivo: Haveria quebras continuadas na espinha-dorsal de acarfosfato e subseqente reconstituio aps a duplicao que poderia resultar numa mistura de segmentos velhos e novos na mesma fita (Bonato, 2003).