Estrutura do DNA

O DNA formado de cido desoxirribonucleico. As fitas de DNA so longos polmeros formados por milhes de nucletidos ligados uns aos outros. Individualmente, os nucletidos so bastante simples, consistindos de trs partes distintas: 1. Uma das quatro bases azotadas 2. Desoxirribose (um acar de 5 carbonos) 3. Um grupo fosfato A imagem abaixo mostra uma representao simplificada de um nucletido. P representa a molcula de fosfato, S representa o acar (desoxirribose), e B representa uma das quatro bases azotadas.

A estrutura do grupo fosfato mostrada abaixo.

1.Bases Azotadas
As quatro bases azotadas so: Adenina Guanina Citosina Timina

A denominao dos nucletidos depende da base azotada que o compe. O nome dos quatro nucletidos do DNA so adenina, guanina, citosina e timina. Eles sero referidos como A, G, C, e T respectivamente. Adenina e guanina so classificadas como purinas, pois elas so molculas compostas por dois anis. Citosina e timina so classificadas como pirimidinas pois elas so molculas formadas por um nico anel. Diagramas estruturais das quatro bases so mostradas na tabela abaixo Nome do nucletido Base Purina/ Pirimidina Adenina Adenina (A) Purina Guanina Guanina (G) Purina Timina Timina (T) Pirimidina Citosina Citosina (C) Pirimidina

Estrutura Qumica *

Representa o Simplificada Base Adenina Guanina Timina Citosina

* C = Carbono, N = Azoto, O = Oxignio. Uma nica linha entre os tomos representa uma ligao simples. Duas linhas entre os tomos representam uma ligao dupla. Uma purina se liga a uma pirimidina no DNA para formar um par de base. Adenina e timina ligam-se uma outra para formar um par de base A-T. Igualmente, guanina e citosina ligam-se uma outra para formar um par de base G-C. As bases permanecem unidas por fracas pontes de hidrognio, e so estas pontes de hidrognio as responsveis pela manuteno da estrutura de dupla hlice do DNA. Uma imagem ilustrando como os pares de base se unem por pontes de hidrognio mostrada abaixo (As linhas azuis representam as pontes de hidrognio).

2. Desoxirribose
Desoxirribose um acar de cinco carbonos, e para compreender inteiramente muitos dos conceitos que sero apresentados a seguir preciso conhecer a estrutura da desoxirribose. Uma representao visual do acar e como se relaciona com os outros dois componentes de um nucletido mostrada na figura abaixo.

Os carbonos da desoxirribose so numerados sequencialmente da direita para a esquerda. O primeiro carbono 1' (l-se como um linha), o segundo 2' (dois linha), e assim sucessivamente. A base azotada liga-se ao carbono 1', e o grupo fosfato ao carbono 5'. O nucletido abaixo ligado covalentemente ao carbono 3'. Isto permite que uma longa fita seja construda. Um exemplo de uma fita nica de DNA mostrada abaixo.

Ao invs de sempre ver um diagrama molecular enorme de uma fita de DNA, o que vemos frequentemente uma sequncia de letras, tais como " ATCTTAG ". Esta

sequncia representa que bases esto em um determinado lado de uma fita de DNA. A sequncia acima (ATCTTAG) representa a fita: adenina-timina-citosina-timina-timinaadenina-guanina." O DNA tem duas fitas. Os nucleotdeos que esto em uma fita, correspondem sequncia dos nucletidos da outra fita devido maneira como ocorre o emparelhamento das bases (A com T, G com C). As duas fitas so complementares. Elas no so idnticas, mas se complementam perfeitamente. Alm disso, deve-se notar que as duas fitas so antiparalelas. Isso significa que correm em sentidos opostos. Uma fita comea com 5' e termina com 3' enquanto a outra comea com 3' e termina com 5'. Por conveno a fita de sentido 5' --> 3 ' colocada na esquerda num desenho bidimensional. A figura abaixo d um exemplo visual deste conceito e tambm mostra como as fitas so complementares.

A imagem seguinte mostra a forma de dupla-hlice do DNA. As duas fitas so claramente visveis, uma azul e a outra verde.

XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Estrutura do DNA
O DNA um dos cidos nuclicos, molculas que contm informaes na clula (o cido ribonuclico, ou RNA, o outro cido nuclico). O DNA encontrado no ncleo de toda clula humana. As informaes no DNA: orientam a clula (junto com o RNA) na fabricao de novas protenas que determinam todos os nossos traos biolgicos passam (so copiados) de uma gerao para outra A explicao para todas essas funes encontrada na estrutura molecular do DNA, conforme descrito por Watson e Crick. Embora possa parecer complicado, o DNA em uma clula simplesmente um padro feito de quatro partes diferentes, chamadas nucleotdeos. Imagine um conjunto de blocos que possui somente quatro formas, ou um alfabeto com apenas quatro letras. O DNA uma longa fileira desses blocos ou letras. Cada nucleotdeo consiste de um acar (desoxirribose) ligado a um lado para um grupo de fosfato e ligado ao outro lado para uma base de nitrognio.

O nucleotdeo o bloco de construo bsico de cidos nuclicos

Existem duas classes de bases de nitrognio chamadas purinas (estruturas aneladas duplas) e pirimidinas (estruturas aneladas simples). As quatro bases no alfabeto do DNA so:

adenina (A) - uma purina citosina (C) - uma pirimidina guanina (G) - uma purina timina (T) - uma pirimidina

Os filamentos do DNA so feitos do acar e das pores de fosfato dos nucleotdeos, enquanto as partes do meio so feitas das bases de nitrognio. As bases de nitrognio nos dois filamentos do par do DNA unem-se, purina com pirimidina (A com T, G com C), e so mantidas juntas por ligaes frgeis de hidrognio.

Watson e Crick descobriram que o DNA tinha dois lados, ou filamentos, e que esses filamentos estavam torcidos juntos, como uma escada caracol - a dupla espiral. Os lados da escada compreendem as pores fosfato-acar dos nucleotdeos adjacentes ligados juntos. O fosfato de um nucleotdeo ligado covalentemente (uma ligao na qual um ou mais pares de eltrons compartilhado por dois tomos) ao acar do prximo nucleotdeo. As ligaes de hidrognio entre os fosfatos fazem o filamento do DNA se torcer. As bases de nitrognio apontam para dentro da escada e formam pares com bases no outro lado, como degraus. Cada par de bases formado por dois nucleotdeos complementares (purina com pirimidina) presos juntos por ligaes de hidrognio. Os pares de base no DNA so adenina com timina e citosina com guanina.

Foto cedida por U.S. National Library of Medicine

O DNA possui uma estrutura semelhante a uma escada caracol. Os degraus so formados pelas bases de nitrognio dos nucleotdeos, onde a adenina forma par com a timina, e a citosina com a guanina.

Ligao de hidrognio
Uma ligao de hidrognio uma ligao qumica frgil que ocorre entre os tomos de hidrognio e os tomos mais eletronegativos, como oxignio, nitrognio e fluorina. Os tomos participantes podem estar localizados na mesma molcula (nucleotdeos adjacentes) ou em molculas diferentes (nucleotdeos adjacentes em diferentes filamentos de DNA). As ligaes de hidrognio no incluem a troca ou compartilhamento de eltrons como ligaes inicas e covalentes. A atrao frgil como a que existe entre os plos opostos de uma m. As ligaes de hidrognio ocorrem a curtas distncias e podem ser facilmente formadas e quebradas. Elas tambm podem estabilizar uma molcula.

O DNA uma molcula longa. Por exemplo, uma bactria tpica, como a E. coli, possui uma molcula de DNA com aproximadamente 3.000 genes (um gene uma seqncia especfica de nucleotdeos do DNA que se codifica para uma protena. Falaremos disso posteriormente). Se alongada, essa molcula de DNA teria cerca de 1 milmetro de comprimento. Entretanto, uma E. coli tpica tem apenas 3 mcrons de

comprimento (3 milsimos de um milmetro). Para encaixar-se na clula, o DNA totalmente enrolado e torcido em um cromossomo circular.

Uma bactria E. coli tpica tem 3 mcrons de comprimento, e seu DNA mais do que 300 vezes mais comprido. Assim, o DNA firmemente enrolado e torcido para caber nela.

Os organismos complexos, como as plantas e os animais, possuem de 50 mil a 100 mil genes em muitos cromossomos diferentes (os seres humanos possuem 46 cromossomos). Nas clulas desses organismos, o DNA enrolado ao redor de protenas semelhantes a bolhas chamadas histonas. As histonas tambm so enroladas firmemente para formarem os cromossomos, que esto localizados no ncleo da clula. Quando uma clula se reproduz, os cromossomos (DNA) so copiados e distribudos para cada clula descendente, ou clula-filha. As clulas no-sexuais possuem duas cpias de cada cromossomo copiado, e cada clula-filha recebe duas cpias (mitose). Durante a meiose, as clulas precursoras possuem duas cpias de cada cromossomo copiado e distribudo igualmente para quatro clulas sexuais. As clulas sexuais (espermatozide e vulo) tm apenas uma cpia de cada cromossomo. Quando o espermatozide e o vulo unem-se na fertilizao, os descendentes possuem duas cpias de cada cromossomo (veja Como funciona a reproduo humana).
RNA (cido ribonuclico)
O RNA o outro cido nuclico. Ele difere do DNA de trs formas principais:

o acar a ribose em vez da desoxirribose h apenas um filamento em vez de

Em uma clula procaritica (sem organelas internas ligadas na membrana, como uma bactria), o DNA e o RNA so encontrados no citoplasma. Em uma clula eucaritica (com organelas internas ligadas na membrana, como os seres humanos), o RNA pode ser encontrado no ncleo e no citoplasma, enquanto o DNA, somente no ncleo.

dois o RNA possui uracila (U) em vez de timina. Assim, os pares de base no RNA so citosina com guanina e adenina com uracila.

O DNA controla toda a atividade celular. Ele possui a receita para o funcionamento de uma clula. Toda vez que uma clula se divide, a receita deve ser passada para as clulas-filhas. Todo o arquivo contendo as informaes sobre o funcionamento celular precisa ser duplicado para que cada clula-filha receba o mesmo tipo de informao que existe na clula-me. Para que isso ocorra, fundamental que o DNA sofra autoduplicao.

A duplicao do DNA
O modelo estrutural do DNA proposto por Watson e Crick explica a duplicao dos genes: as duas cadeias do DNA se separam e cada uma delas orienta a fabricao de uma metade complementar. O experimento dos pesquisadores Meselson e Stahl confirmou que a duplicao do DNA semiconservativa, isto , que metade da molcula original se conserva ntegra em cada uma das duas molculas-filhas.

No processo de duplicao do DNA, as pontes de hidrognio entre as bases se rompem e as duas cadeias comeam a se separar. medida que as bases vo sendo expostas, nucleotdeos que vagam pelo meio ao redor vo se unindo a elas, sempre respeitando a especificidade de emparelhamento:

A com T, T com A, C com G e G com C. Uma vez ordenados sobre a cadeia que est que est servindo de modelo, os nucleotdeos se ligam em seqncia e formam uma cadeia complementar dobre cada uma das cadias da molcula original. Assim, uma molcula de DNA reproduz duas molculas idnticas a ela.

A ao da enzima DNA polimerase Diversos aspectos da duplicao do DNA j foram desvendados pelos cientistas. Hoje, sabe-se que h diversas enzimas envolvidas nesse processo. Certas enzimas desemparelham as duas cadeias de DNA, abrindo a molcula. Outras desenrolam a hlice dupla, e h, ainda, aquelas que unem os nucleotdeos entre si. A enzima que promove a ligao dos nucleotdeos conhecida como DNA polimerase, pois sua funo construir um polmero (do grego poli, muitas, e meros, parte) de nucleotdeos.

DNA polimerase

A mensagem do DNA passada para o RNA

O material gentico representado pelo DNA contm uma mensagem em cdigo que precisa ser decifrada e traduzida em protenas, muitas das quais atuaro nas reaes metablicas da clula. A mensagem contida no DNA deve, inicialmente, ser passada para molculas de RNA que, por sua vez, orientaro a sntese de protenas. O controle da atividade celular pelo DNA, portanto, indireto e ocorre por meio da fabricao de molculas de RNA, em um processo conhecido como transcrio.

RNA: Uma Cadeia (Fita) Simples As molculas de RNA so constitudas por uma seqncia de ribonucleotdeos, formando uma cadeia (fita) simples.

Existem trs tipos bsicos de RNA, que diferem um do outro no peso molecular: o RNA ribossmico, representado por RNAr (ou rRNA), o RNA mensageiro, representado por RNAm (ou mRNA) e o RNA transportador, representado por RNAt (ou tRNA). O RNA ribossmico o de maior peso molecular e constituinte majoritrio do ribossomo, organide relacionado sntese de protenas na clula. O RNA mensageiro o de peso molecular intermedirio e atua conjuntamente com os ribossomos na sntese protica. O RNA transportador o mais leve dos trs e encarregado de transportar os aminocidos que sero utilizados na sntese de protenas.

Transcrio da informao gentica

A sntese de RNA (mensageiro, por exemplo) se inicia com a separao das duas fitas de DNA. Apenas uma das fitas do DNA serve de molde para a produo da molcula de RNAm. A outra fita no transcrita. Essa uma das diferenas entre a duplicao do DNA e a produo do RNA.

As outras diferenas so: os nucleotdeos utilizados possuem o acar ribose no lugar da desoxirribose; h a participao de nucleotdeos de uracila no lugar de nucleotdeos de timina. Assim, se na fita de DNA que est sendo transcrita aparecer adenina, encaminha-se para ela um nucleotdeo complementar contendo uracila;

Imaginando um segmento hipottico de um filamento de DNA com a seqncia de bases: DNA- ATGCCGAAATTTGCG O segmento de RNAm formado na transcrio ter a seqncia de bases: RNA- UACGGCUUUAAACGC

Em uma clula eucaritica, o RNAm produzido destaca-se de seu molde e, aps passar por um processamento, atravessa a carioteca e se dirige para o citoplasma, onde se dar a sntese protica. Com o fim da transcrio, as duas fitas de DNA seu unem novamente, refazendo-se a dupla hlice.

O cdigo gentico
A mensagem gentica contida no DNA formada por um alfabeto de quatro letras que correspondem aos quatro nucleotdeos: A, T, C e G. Com essas quatros letras preciso formar palavras que possuem o significado de aminocidos. Cada protena corresponde a uma frase formada pelas palavras, que so os aminocidos. De que maneira apenas quatro letras do alfabeto do DNA poderiam ser combinadas para corresponder a cada uma das vinte palavras representadas pelos vinte aminocidos diferentes que ocorrem nos seres vivos.

Uma proposta brilhante sugerida por vrios pesquisadores, e depois confirmada por mtodos experimentais, foi a de que cada trs letras (uma trinca de bases) do DNA corresponderia uma palavra, isto , um aminocido. Nesse caso, haveria 64 combinaes possveis de trs letras, o que seria mais do que suficiente para codificar os vinte tipos diferentes de aminocidos (matematicamente, utilizando o mtodo das combinaes seriam, ento, 4 letras combinadas 3 a 3, ou seja, 43 = 64 combinaes possveis). O cdigo gentico do DNA se expressa por trincas de bases, que foram denominadas cdons. Cada cdon, formado por trs letras, corresponde a um certo aminocido. A correspondncia entre o trio de bases do DNA, o trio de bases do RNA e os aminocidos por eles especificados constitui uma mensagem em cdigo que passou a ser conhecida como cdigo gentico.

Mas, surge um problema. Como so vinte os diferentes aminocidos, h mais cdons do que tipos de aminocidos! Deve-se concluir, ento, que h aminocidos que so especificados por mais de um cdon, o que foi confirmado. A tabela abaixo, especifica os cdons de RNAm que podem ser formados e os correspondentes aminocidos que especificam.

Dizemos que o cdigo gentico universal, pois em todos os organismos da Terra atual ele funciona da mesma maneira, quer seja em bactrias, em uma cenoura ou no homem. O cdon AUG, que codifica para o aminocido metionina, tambm significa incio de leitura, ou seja, um cdon que indica aos ribossomos que por esse trio de bases qe deve ser iniciada a leitura do RNAm. Note que trs cdons no especificam nenhum aminocido. So os cdons UAA, UAG e UGA, chamados de cdons e parada durante a leitura (ou stop cdons) do RNA pelos ribossomos, na sntese protica. Diz-se que o cdigo gentico degenerado porque cada palavra (entenda-se aminocido) pode ser especificada por mais de uma trinca.

Traduo: Sntese de Protenas

Traduo o nome utilizado para designar o processo de sntese de protenas. Ocorre no citoplasma com a participao, entre outros, de RNA e de aminocidos.

Quem participa da sntese de protenas? Cstron (gene) o segmento de DNA que contm as informaes para a sntese de um polipeptdeo ou protena. O RNA produzido que contm uma seqncia de bases nitrogenadas transcrita do DNA um RNA mensageiro.

No citoplasma, ele ser um dos componentes participantes da sntese de protenas, juntamente com outros dois tipos de RNA, todos de fita simples e produzidos segundo o mesmo processo descrito para o RNA mensageiro: RNA ribossmico, RNAr. Associando-se a protenas, as fitas de RNAr formaro os ribossomos, orgnulos responsveis pela leitura da mensagem contida no RNA mensageiro;

RNAs transportadores, RNAt. Assim chamados porque sero os responsveis pelo transporte de aminocidos at o local onde se dar a sntese de protenas junto aos ribossomos. So molculas de RNA de fita

simples, de pequeno tamanho, contendo, cada uma, cerca de 75 a 85 nucleotdeos. Cada fita de RNAt torce-se sobre si mesma, adquirindo o aspecto visto na figura abaixo. Duas regies se destacam em cada transportador: uma o local em que se ligar o aminocido a ser transportado e a outra corresponde ao trio de bases complementares (chamado anticdon) do RNAt, que se encaixar no cdon correspondente do RNAm.

Anticdon o trio de bases do RNAt, complementar do cdon do RNAm.

RNA - Traduo passo a passo

A traduo um processo no qual haver a leitura da mensagem contida na molcula de RNAm pelos ribosomo, decodificando a linguagem de cido nuclico para a linguagem de protena. Cada RNAt em soluo liga-se a um determinado aminocido, formando-se uma molcula chamada aminoacil-RNAt, que conter, na extremidade correspondente ao anticdon, um trio de cdon do RNAm. Para entendermos bem este processo, vamos admitir que ocorra a sntese de um peptdeo contendo apenas sete aminocidos, o que se dar a partir da leitura de um RNAm contendo sete cdons (21 bases hidrogenadas). A leitura (traduo) ser efetuada por um ribossomo que se deslocar ao longo do RNAm.

Esquematicamente na sntese protica teramos:

Um RNAm, processado no ncleo, contendo sete cdons (21 bases hidrogenadas) se dirige ao citoplasma. No citoplasma, um ribossomo se liga ao RNAm na extremidade correspondente ao incio da leitura. Dois RNAt, carregando os seus respectivos aminocidos (metionina e alanina), prendem-se ao ribossomo. Cada RNAt liga-se ao seu trio de bases (anticdon) ao trio de bases correspondentes ao cdon do RNAm. Uma ligao peptdica une a metionina alanina. O ribossomo se desloca ao longo do RNAm. O RNAt que carregava a metionina se desliga do ribossomo. O quarto RNAt, transportando o aminocido leucina, une o seu anticdon ao cdon correspondente do RNAm. Uma ligao peptdica feita entre a leucina e a alanina. O ribossomo novamente se desloca. O RNAt que carregava a alanina se desliga do ribossomo. O quarto RNAt, transportando o aminocido cido glutmico encaixa-se no ribossomo. Ocorre a unio do anticdon desse RNAt com o cdon correspondente do RNAm. Uma ligao peptdica une o cido glutmico leucina. Novo deslocamento do ribossomo. O quinto RNAt, carregando a aminocido glicina, se encaixa no ribossomo. Ocorre a ligao peptdica da glicina com o cido glutmico. Continua o deslocamento do ribossomo ao longo do RNAm. O sexto RNAt, carregando o aminocido serina, se encaixa no ribossomo. Uma liogao peptdica une a serina glicina. Fim do deslocamento do ribossomo. O ltimo transportador , carregando o aminocido triptofano, encaixa-se no ribossomo. Ocorre a ligao peptdica do triptofano com a serina. O RNAt que carrega o triptofano se separa do ribossomo. O mesmo ocorre com o transportador que portava a serina. O peptdeo contendo sete aminocidos fica livre no citoplasma. Claro que outro ribossomo pode se ligar ao RNAm, reiniciando o processo de traduo, que resultar em um novo peptdio. Perceba, assim, que o RNAm contendo sete cdons (21 bases nitrogenadas) conduziu a sntese de um peptdeo formado por sete aminocidos

ADN recombinante
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DNA recombinante (rDNA) uma seqncia de DNA artificial que resulta da combinao de diferentes seqncias de DNAs. Essa tcnica surgiu a partir da engenharia gentica.

[editar] Histrico
No ano de 1944 o pesquisador Oswald Avery, enquanto estava pesquisando a cadeia molecular do cido desoxirribonucleico (DNA), descobriu que este o componente cromossmico que transmite as informaes genticas e que este o principal constituinte dos genes. Em 1961 os pesquisadores Franois Jacob e Jacques Monod estudaram o processo de sntese de protenas nas clulas de bactrias e descobriram que o principal responsvel por essa sntese o DNA. Em 1972 o pesquisador Paul Berg realizou a primeira experincia bem sucedida onde foram ligadas duas cadeias genticas diferentes: ele ligou uma cadeia de DNA animal com uma cadeia de DNA bacteriana. No ano de 1978 os pesquisadores Werner Arber, Daniel Nathans e Hamilton Smith ganharam o Prmio Nobel de Fisiologia e Medicina por terem isolado as enzimas de restrio, que so enzimas normalmente produzidas por bactrias e que so capazes de cortar o DNA controladamente em determinados pontos levando produo de fragmentos contendo pontas adesivas que podem se ligar a outras pontas de molculas de DNA que tambm tenham sido cortadas com a mesma enzima. Juntamente com a ligase, que consegue unir fragmentos de DNA, as enzimas de restrio formaram a base inicial da tecnologia do DNA recombinante.

[editar] Utilizao
Esta tcnica tem sido cada vez mais desenvolvida e usada com muitas finalidades. Algumas destas finalidades so:
A produo da insulina, os interferonas, a interleucina. A produo de algumas protenas do sangue: a albumina e o fator VIII. A produo do hormnio do crescimento. A produo de alguns tipos de ativadores das defesas orgnicas para o tratamento do cncer, como o fator necrosante de tumores. A criao de vacinas sintticas contra: malria e hepatite B. A criao e desenvolvimento de biotecnologias para a pesquisa segura de substncias cuja manipulao envolve alto risco biolgico: vacinas que se preparam com vrus infecciosos, onde pode existir o risco de vazamento incontrolado. Para a Clonagem. Vida sinttica. Na transgnese, em que se introduz numa espcie uma parte do DNA de outra. Teste de paternidade

A tecnologia do DNA recombinante

Cada fragmento de DNA, que foi clivado e separado do resto do material gentico, contm um ou mais genes. Lembre-se que cada gene origina uma protena, portanto ao estudarmos o gene estamos estudando a protena que ele codifica. Mas o que devemos fazer para estudar o gene? Devemos introduzi-lo no material gentico (no DNA) de um hospedeiro para que ocorra a transcrio do gene, em mRNA, e a traduo em protena. O hospedeiro um organismo que se multiplica (se reproduz) rapidamente, como por exemplo, as bactrias. Quando as bactrias se reproduzem por bipartio elas transmitem ao seus filhos o seu material gentico, portanto se neste material conter o fragmento de DNA de estudo, em pouco tempo teremos milhes de bactrias com o gene.

O plasmdio o material gentico circular no ligado ao cromossomo que fica espalhado pelo hialoplasma das bactrias. Ele sofre o mesmo processo do DNA cromossomal de transcrio e traduo, alm de, se multiplicar a cada diviso celular, passando uma cpia para cada clula filha.

O plasmdio retirado das clulas bacterianas para que se possa inserir o gene de estudo, para depois recoloc-lo na bactria.

Para entendermos melhor vamos conhecer esse processo passo a passo (acompanhe na figura): 1. Os pesquisadores querem estudar um gene humano que produz uma protena que no se sabe a funo. 2. Os pesquisadores recortam (utilizando enzimas de restrio), do DNA humano, o gene de interesse. 3. Esse fragmento de DNA contendo o gene multiplicado por PCR para obtermos vrias cpias do mesmo fragmento (ou da mesma informao). 4. A mesma enzima que clivou o gene do DNA humano utilizada para clivar o plasmdio bacteriano. Lembre-se que o fragmento de DNA, ao ser clivado, gera pontas adesivas que so complementares ao plasmdio se este for clivado com a mesma enzima. 5. A seguir o plasmdio clivado misturado com os fragmentos de DNA (contendo o gene) e uma enzima chamada ligase cola os fragmentos ao plasmdio, produzindo o chamado DNA recombinante. Isso feito, o DNA recombinante introduzido em uma bactria hospedeira. 6. A bactria hospedeira colocada em um meio nutritivo seletivo, apenas aquelas que possuem o DNA recombinante crescem, formando colnias. Aps muitas geraes de bactrias, o produto da expresso dos genes, as protenas humanas, so purificadas das bactrias (so separadas das protenas das bactrias).

Esse mtodo produz uma grande quantidade de protenas humanas possibilitando assim, seu estudo.