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EXPLORATION DE LA THROMBODYNAMIQUE (FIBRINOLYSE) INTRODUCTION : La fibrinolyse est un processus physiologique complexe de dissolution des caillots sanguins (constitus de fibrine)

par la plasmine. Ce processus clture la coagulation sanguine afin de repermabiliser les vaisseaux sanguins rpars et sert empcher la formation de thromboses. Les premires descriptions de la fibrinolyse ont t faites par Albert Dartre en 1893 chez le chien comme modle exprimental. Description dtaille le plasminogne sanguin (synthtis par le foie) possde une affinit pour la fibrine et est incorpor dans le caillot lors de sa formation (ce qui permettra de le dgrader plus tard) la pro-urokinase est active en urokinase par la kallicrine et la plasmine (amplification de la fibrinolyse) l'activateur tissulaire du plasminogne (t-PA) est scrt par l'endothlium vasculaire plusieurs jours aprs lsion de celui-ci le plasminogne est activ en plasmine au niveau du caillot par l'urokinase et l'activateur tissulaire du plasminogne la plasmine (qui est une protase) dgrade la fibrine en fragments (produits de la dgradation de la fibrine dont les Ddimres) qui se dissolvent dans la circulation.

Le processus est rgul pour s'interrompre : la plasmine est inactive par lalpha 2-antiplasmine. Lurokinase et le t-PA sont inhibs de par les inhibiteurs de lactivateur du plasminogne (PAI-1 et PAI-2). Pathologies Des dfauts de fibrinolyse mnent une thrombophilie responsable de la formation excessive de caillots sanguins. Un excs de fibrinolyse (par dficit en alpha 2-antiplasmine ou en inhibiteur de lactivateur du plasminogne) est responsable d'hmorragies. 1,2 Le dosage sanguin des D-dimres (produits de la dgradation de la

fibrine) peut tre utile pour le diagnostique d'une thrombose (thrombose veineuse profonde par exemple). Mdicaments associs Les thrombolytiques acclrent le processus et sont prescrits en cas de thrombose (infarctus, AVC, embolie pulmonaire). L'acide tranexamique au contraire inhibe la fibrinolyse en inhibant la plasmine et est utilise en cas d'hmorragie
1-

Rtraction du caillot : prlvement sanguin comme pour le temps de coagulation sanguin.

les tubes bouchs et remis au bain marie 37 c . L volution du caillot est rgulirement surveille jusqua dissolution du caillot. Rsultats : le temps normal de lyse de caillot de sang total est > 72h ;il est <1h dans une fibrinolyse aigue. -si le sang ne se coagule pas du tout, en ajoute au prlvement un excs de trombine ;il sagit de dfibrination in vivo. 2- Test de lyse du caillot plasmatique (SOLUBILITE DU CAILLOT) :le temps de lyse du caillot plasmatique est lgrement plus sensible que le temps de lyse du caillot sanguin. Mode opratoire : le sang est prlev sur citrate de sodium 3,8% puis le plasma est obtenu par centrifugation faible vitesse pendent 5mn. On procde comme le temps de coagulation plasmatique : 0,5ml P.R.P, plac dans un tube hmolyse 37c . On ajoute 0,5ml cacl2 0,025m, aprs coagulation du plasma les tubes sont maintenus 37c jusqua dissolution du caillot. Rsultats : le temps de lyse du caillot est 48h, il est < 1h dans la lyse aigue.

Remarque : dans le cas de fibrinolyse aigue, le plasma est incoagulable, dans ce cas, on peut tudier son activit fibrinolytique sur un plasma normal, aprs mlange parts gales de plasma tmoin et de plasma tester .On procde comme avant.

Mise en Evidence dun an Ticoagulant Circulant : Principe :- la prsence dun anticoagulant circulant se traduit par linhibition exerce par le plasma test sur un systme de coagulation normale. -en pratique courante , on utilise ler temps de cphaline Kaolin le T.Q et le temps de thrombine. Mode opratoire : Tube au Bain marie 37c Plasma tmoin en ml Plasma tester en ml 0.4 0 0.3 0.1 0.2 0.2 0.1 0.3 0 0.4

Incuber 2 heures
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A partir de chaque dilution, faire un T.C.K, T.Q et T.T Rsultats : On compare lcart compris entre le temps de c du tube 1 (tmoin seule) et celui des diffrents dilutions. Il ya prsence danti coagulant circulant sil ya un cart : Dau moins 15 s pour le T.C.K entre tmoin pur et le tube 3 (mlange au ). Dan moins 5 s pour le temps de thrombine entre le tmoin pur et le tube tmoin.

D au moins 3s pour le T.Q, il faut remarquer quun allongement d un T.Q, modification importante des facteurs V, VI, X, et II suggre la prsence d un inhibiteur l gard de la formation de la prothrombinase exogne .L cart est d autant plus important que la thrombplastine est dilue. Dosage du plasminogne : Principe : en prsence d un excs de strptokinase : On transforme le plasminogene en complexe (plasminogene activit amidolytique).

Si dans un 2eme temps, on fait agir le complexe sur un substrat chromogne appropri, il ya hydrolyse du peptide de synthse et libration de radical color lintensit de coloration mesure par spectrophotomtries 405 Um est directement prportionnelle a la consontration de plasminogene. Ractifs :
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Plasma test pauvre en plaquettes. Plasma tmoin pauvre en plaquettes. Substrat chromogne (52261).

- Strepto kinase. - Acide actique. - Tanpom imidasole ph 7.4. - Imidasole - HCL N/10 - H2O D 1.72g. 90 ml. 100ml.

Mode Opratoire : Diluer le plasma tester au 1/10 et le plasma tmoin au 1/10 et 1/20, sachait que la 1er dilution du tmoin est considre correspondant 100%. Ractifs Plasma test et plasma tmoin streptokinase Substrat chromogne Acide actique
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Incubation 2 min 3 min 3 min

0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml

Mlanger, ajouter 105 ml H2O D, lire 405 nm.

La coloration est stable pendant plusieurs heures, la prise de la densit optique se fait contre un blan fait : - Acide actique - Tampon - Strptokinase
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0.1ml. 0.1ml. 0.1ml. 0.1ml. 1.5ml.

Substrat

- Eau distille
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Rsultats : mattre les D.O des diffrentes dilutions du plasma tmoin en ordonne et les concentration correspondants en abscisses , dune feuille millimtre , joindre les points.

- Pour obtenir une droite dtalonnage. - La concentration des plasma tester est obtenue par interpolation.
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Les valeurs normales sont comprises entre 80 et 100%.

D.O 405nm

50%

58% 100%