Cytotoxicity Analysis of Compound A.E. IV.3.4 Isolated From Laban Abang (Aglaia elliptica) Leaf.

Fery Azis Wijaya1,, Mila Trisnoviani2), Nurhadi 3), Dhian Wijaya 3),Prasetyawan Yunianto2,3,5)*, Bambang Srijanto 4),
1) Laboratorium of Cell culture LAPTIAB BPPT, Serpong, Indonesia 2) Laboratorium of chemistry Pharmacy LAPTIAB- BPPT, Serpong, Indonesia 3) Laboratorium of biology Pharmacy- LAPTIAB BPPT, Serpong, Indonesia 4) Central of Technology Pharmaceutical and Medical BPPT, Jakarta, Indonesia 5) Department of Chemistry University of Indonesia, Depok, Indonesia

ABSTRACT
A compound named A.E IV.3.4 was isolated by VLC and column chromatography from ethanolic extract of Laban Abang (Aglaia elliptica) leaf. The isolated compound was tested by by MTT cytotoxic assay using MCF-7 a breast cancer cell and CHO a normal cell, The result showed that A.E.IV.3.4 compound had IC50 of 73 ppm, while cisplatin an anticancer drug had IC50 of 18 ppm, In normal ovary cells A.E.IV.3.4 compound had IC50 of 92 ppm and cisplatin had IC50 of 138 ppm. This indicated that A.E.IV.3.4 compound had moderate toxicity effects in MCF-7 (cancer cell) and had a low toxic effect on CHO cells (normal cell). Cisplatin as a positive control which is commonly used as chemotherapy drugs, had a very toxic effect on MCF-7 cells bu,t not on normal cells. It was concluded that the toxic nature of A.E.IV.3.4 compound had a fairly selective mechanism against cancer cells and was safe in normal cells in similar to cisplatin.

Key word : Aglaia elliptica, chromatography techique, MTT cytotoxic assay. Pendahuluan

Genus Aglaia (Meliaceae) terdiri dari sekitar 130 spesies yang biasanya berbentuk pohon atau semak, tanaman ini tersebar di daerah tropis maupun sub tropis. Secara fitokimia, pada umumnya senyawa yang terkandung dalam Aglaia adalah senyawa Amida dan berdasarkan struktur senyawanya amida tersebut dikelompokkan dalam 2 golongan yaitu : bentuk cyclopenta-[bc] benzopyran (=golongan aglain) dan bentuk cyclopenta-[b]benzofuran (=golongan rocaglamide). Beberapa senyawa dari 2 golongan tersebut telah ditemukan dan telah diteliti mempunyai aktivitas sebagai toksisitas terhadap serangga dan anti jamur. Dari beberapa penelitian sebelumnya, dari buah Aglaia elliptica Bl telah diisolasi derivate Rocaglamid oleh Nugroho dkk (1997) sedang pada bagian batang buah telah diisolasi oleh Cui B. dkk (1997) berupa derivat rocaglamide dan dammaran pada bagian batang dan buahnya. Sedangkan Inada dkk (2001) telah mengisolasi dari bagain daun Aglaia elliptica Bl (laban abang) berupa 2 senyawa baru derivate aglaian berupa, 10-O-acetylaglain B (1) dan 4epiaglain A (2), dua diamides yang sudah diketahui yaitu aglain A (3) dan aminopyrrolidine*)

Correspondence : Laboratorium of Pharmaceutical and Medical BPPT, LAPTIAB Gedung 610 PUSPITEKTANGERANG SELATAN, Tlp 021-7560536, Fax 021-7560536 ext. 122. Email : pyunianto@gmail.com

diamide, odorine, (4), dan tiga senyawa lain yang sudah dikenal dari cycloartanes (5-7) serta Aglain B (8).

Gambar 1. Struktur senyawa hasil isolasi dari daun Aglaia elliptica Bl (laban abang), 10O-acetylaglain B (1), 4-epiaglain A (2), aglain A (3), aminopyrrolidine-diamide, odorine, (4), cycloartanes (5-7), Aglain B (8). Agung Eru (2009) telah melakukan isoalsi dari daun Aglaia elliptica Bl (laban abang) setelah dilakukan proses ektraksi dengan metode maserasi menggunakan etanol, dan pemurnian senyawa menggunakan teknik kromatografi (VLC, kromatografi kolom) dan HPLC preparative dihasilkan senyawa penanda berupa aminopyrrolidinediamide (odorine). Senyawa penanda tersebut dilakukan uji in vitro sitotoksisitas mengunakan metode MTT dengan sel MCF-7, diperoleh hasil daya hambat IC50 terhadap sel MCF-7 sebesar 153.32 ppm. Pada penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas sitotoksisitas dari isolate senyawa dari daun Aglaia elliptica Bl (laban abang), dengan membandingkan aktivitas isolate tarhadap viabilitas sel kanker (MCF-7) dengan sel normal (CHO).
Materials and Methods

Material : leaf of Aglaia elliptica Bl from Bogor Botanical Garden, solvent for ectraxtion : etanol, ethyl acetate, methanol, dichlormetan, isopropanol were destiled from technical grade, Methanol for HPLC (E-Merck), Silica gel 60 (dia 0,040 - 0,063) (E-Merck), Sphadex LH 20 (Sigma).

100

120

140

160

180

-20 80

20

40

60



 

 

Methods:

 

K -2800 [1] P g g

etanol+air

.1 2 7 1 7 8 8 5 8

.7 7 0 1 0 2 1 2 8

4 .2 6 2 1 0 7 1 7 5 4 .6 7 5 1 4 4 8 4 .8 2 7 1 6 0 4 5 4 .9 7 0 2 9 6 1 5 .1 7 5 2 8 7 6 9

A.E.IV.3.

etanol

Result and Discussion

5 .6 0 1 1 1 7 85 5 .8 8 5

6 .7 0 8 8 7 4 9 7 .1 7 7 2 6 9 7 .5 2 2 5 0 1 7 .8 1 2 1 8

9 .2 8 2 2 6 0 9 .5 9 5 1 6 6 9 .7 1 5 2 6 4 9 .8 9 8 7 7

A.E.IV.3

1 0 .9 5 5 1 8 7

mU A

Elusidasi : UV spectrum, MS-TOF

1 2 .0 2 0 1 8 1 0 1 2 .2 2 2 1 2 7
1000 1200 200 400 600 800 0 200 210 220 220

20

1 2 .9 4 5 7 8 1 . 27616 1 .4 4 2 2

240 250 250



0 .5 9 2 2 1 7 8 0 .8 7 7 2 5 7 1 1 .0 4 1 .1 1 0 1 4 0 8 9 1 .2 4 1 9 4 0 8 1869 1. 80 26244 1 .6 4 7 7 0 9 0 1 .9 1 2 5 62 5 9 0 7 1 2 .0 1 8 5 5 42 2 2 .16 7 4 0 4 9 2..28 021 4 7 29 6 2



N R t r ti

Ti

Sphadex column (mobile phase CH3OH)

8
260 270 280 290

10

12

14

1 4 .0 0 8 5 9 5 14. 50656

Partisi

A E IV 3.4


10

A.E.I . A.E.IVA.E.VIII




20

Spektrum UV is A IV 3.4 menit ke 22.613 -V E

Vacuum Liquid Chromatography (VLC)


60

Silica column (mobile phase = 95 % CH2Cl2 : 5 % 2-C3H7OH)

Etil asetat Pemekatan/rotavapor Fraksi etil asetat laban abang


80 86

  
90 91 98 0 200 400 600 800 1000 1200

 

Ekstrak etanol laban abang

1 4 .9 1 1 6 0 1 1 5 .1 0 1 9 9 7 15. 781520 1 5 .8 1 0 4 0 1 5 .9 4 7 7 4 4 1 1 6 .1 6 0 2 1 9 2 1 6 .4 1 7 8 8 2 1 6 .5 8 7 1 2 0 1 6 .8 6 0 5 6 4 5 1 7 .0 4 9 7 0 1 7 .4 8 0 2 5 8 1 7 .8 0 0 9 4 6 1 8 .0 7 7 2 18. 261 1 8 .6 7 2 2 2 6 1 8 1 8 .9 7 8 8 7 9 8 9 1 9 . 9 06 2 6 0 9 1 9 .7 1 5 2 9 2 6 8 1 9 .9 0 8 5 9 9 1 2 0 .2 2 7 1 5 7 1 1 1 2 0 .5 6 5 5 8 4 1 2 0 .6 8 7 5 8 6 5 1 2 0 .7 9 5 5 7 2 1 .0 1 6 4 1


50 70 400


40

2 1 .5 1 7 2 9 8 4 8 8 2 1 .7 5 0 1 1 0 2 1 .9 7 8 1 2 2 0 5 2 2 .0 7 7 8 4 6 6 4 6 2 2 .2 1 8 1 5 6 4 2 8 2 2 .6 1 2 2 1 4 5 7

2 .4 2 0 1 0 0 8 6

2 5 .0 6 8 2 1 7 7 9 8 2 5 .4 2 2 4 7 8 1 1 2 5 .7 2 7 1 4 4 6 7 4 2 6 .0 2 4 9 6 4 2 6 .4 4 5 5 7 8 0

Chromatogram HPLC of A.E.IV.3.1 with retention time 22.613 min and spectrum UV = 218, 284 nm

00 nm 0

2 7 .2 6 2 1 0 4 0 0 2 7 .5 4 8 5 4 8 4 0 2 7 .8 1 0 8 4 2 1

Toxicicity assay by MTT methods (cell line : MCF- and CHO)

2 8 .4 9 5 4 8 9 2 4

2 9 .2 7 2 2 7 9 2 4 2 9 .6 4 7 8 7 7
80 100 120 140 160 180

26

24

22 .1 06 7 2 2 77 0 0 4 .9 5 2 2 5

t s
mU A

Mi

16

18

Heksan

20

22

28

20

40

60

-20

Data TOF MS ES+ of A.E.IV.3. with mw about 3

g/mol.

Dari data elusidasi terhadap isolate senyawa A.E.IV.3.1 mempunyai spectrum UV = 218, 284
nm, sedangkan berat molekul sekitar 344 g/mol tapi masih perlu dikomfrimasi lagi, karena isolate belum murni dan perlu dielusidasi dengan NMR. Untuk uji Toksisitas pada MCF-7 dan CHO dapat dilihat pada Tabel berikut :

Sample A.E.IV.3.1 compound Cisplatin (a breast cancer drug)

IC50 Cell Line MCF-7 (breast cancer cell) 73 18 CHO (normal cell) 92 138

This indicated that A.E.IV.3.4 compound had moderate toxicity effects in MCF-7 (cancer cell) and had a low toxic effect on CHO cells (normal cell). Cisplatin as a positive control which is commonly used as chemotherapy drugs, had a very toxic effect on MCF-7 cells bu,t not on normal cells Conclusion The toxic nature of A.E.IV.3.4 compound had a fairly selective mechanism against cancer cells and was safe in normal cells in similar to cisplatin References
i. A un Eru Wibowo, Karakterisasi Senyawa Utama Ekstrak Daun Aglaia elliptica Blume dan Uji Sitotoksisitas pada Sel Kanker Payudara, http://mru.fk.ui.ac.id/index.php?uPage=profil.profil_detail&smod=profil&sp=public&id penelitian= rasetyawan Yunianto, unpblished, Tehnical eport Of Standardized extract ,

ii.

Program Assement and Aplied Technology of Production Herbal Drug - PTFM, BPPT, 2010

iii. iv. v. vi. vii. viii.

Nu roho B. W., Edrada R. A., Gssre en B., Wray V., Witte L., roksch Phytochemistry, 44, 14551461 (1997). Nu roho B. W., Gssre en B., Wray V., Witte L., Brin mann G., roksch Phytochemistry, 45, 15791585 (1997).

., .,

Cui B., Chai H., Santisuk T., Reutrakul V., Farnworth N. R., Cordell G.A., ezzuto J. M., Kin horn A. D., Tetrahedron, 53, 1762517632 (1997). Inada A., Shono K., Murata H., Inatomi Y., Darnaedi D., Nakanishi T.,Phytochemistry, 53, 10911095 (2000). Christopher G,Herbert, Johnstone Robert A.W, Mass Spectroscopy Basics, C C Press. 2003 Robert E. Ardrey, Liquid Chromatography Mass Spectrometry: An Introduction, John Wiley & Sons, Ltd., 2003