Anlisis microbiolgico de una muestra de orina

El propsito del anlisis microbiolgico de una muestra de orina es en primer lugar determinar si existe una infeccin y, si existe, identificar el microorganismo que la produce. Para determinar si existe infeccin debemos hacer un recuento del nmero de microorganismos que hay por mL de orina. Si el nmero de microorganismos es:

IDENTIFICACIN Hacer una Tincin de Gram (a partir de una colonia crecida en agar CLED)

> 105 /mL <103/mL Entre 103 y 104/mL

hay infeccin no hay infeccin es dudoso. Repetir el anlisis

Si es una levadura o Sembrar en agar Sabouraud o Incubar a 28C o Realizar una Galera de Identificacin API C AUX Si es un Bacilo Gram Negativo o Sembrar en Agar Nutritivo y en Agar MacConkey o Incubar a 37C /24 horas

(Observar el crecimiento en Agar MacConkey y volver a comprobar si es un microorganismo Lactosa positivo o Lactosa negativo. Anotar el resultado) Hacer la prueba de la oxidasa (sobre la placa de agar Nutritivo)

Para determinar el microorganismo que produce la infeccin hay que hacer una identificacin del microorganismo que previamente hemos aislado. RECUENTO

Hacer una dilucin 1/50 de la muestra de orina Para ello depositar 0,5 mL de orina en un matraz que contiene 24,5 mL de diluyente estril. Sembrar 0,1 mL de la dilucin 1/50 en: o Agar CLED o Agar Sangre (Agar CLED= Agar Cistina Lactosa Deficiente en Electrolitos. Este agar se utiliza porque permite el crecimiento de la mayora de los patgenos urinarios y evita el crecimiento invasivo de Proteus. Agar Sangre, es un agar que permite el crecimiento de microorganismos difciles (Staphylococcus y Streptococcus) que no son capaces de crecer en otros medios como el agar CLED. ) Incubar a 37 C /24 horas (Observar el crecimiento en Agar CLED y anotar si es un microorganismo Lactosa positivo o Lactosa negativo) Contar todas las colonias que aparecen sobre una de las placas (elegir la placa que tenga ms colonias) Expresar el resultado como: nmero de colonias x 10 x 50= UFC /mL de orina Si el nmero de colonias en la placa es ms de 300 el resultado ser: > 300 x 10 x 50 UFC/mL de orina)

Si el microorganismo es Oxidasa negativo, sembrar una Galera de Identificacin API 20E. Incubar a 37C/24 horas y hacer la lectura de la galera. Si el microorganismo es Oxidasa positivo, sembrar una Galera de Identificacin API 20 NO E. Incubar a 37C/24 horas y hacer la lectura de la galera Si es un Coco Gram Positivo

Siembra en Agar Nutritivo yen Agar Manitol Salado Incubar a 37C/24 horas

(Observar el crecimiento en Agar Manitol Salado y comprobar si es Manitol positivo o Manitol negativo. Anotar el resultado) Hacer la prueba de la Catalasa (sobre la placa de agar Nutritivo)

Si el microorganismo es Catalasa negativo, sembrar una galera de identificacin API Strep. Incubar a 37C/24 horas y hacer la lectura de la galera Si el microorganismo es Catalasa positivo, sembrar una galera API Staph. Incubar a 37C/24 horas y hacer la lectura de la galera.

LECTURA DE ALGUNAS PRUEBAS BIOQUMICAS Agar CLED= Agar Cistina Lactosa Deficiente en Electrolitos

Prueba de la Oxidasa Aadir sobre las colonias de la placa de Agar Nutritivo unas gotas de Reactivo de la oxidasa (clorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina al 11% en agua)

Si crecen colonias amarillas el microorganismo es lactosa positivo Si crecen colonias azules el microorganismo es lactosa negativo

Fundamento: Este medio de cultivo tiene un indicador de pH que es Azul de Bromotimol Si el microorganismo fermenta la lactosa el pH del medio disminuye y el indicador vira a amarillo Agar MacConkey

Si aparece una coloracin azul-violeta el microorganismo es oxidasa positivo Si no aparece coloracin el microorganismo es oxidasa negativo

Si crecen colonias rosas-rojas el microorganismo es lactosa positivo Si crecen colonias incoloras el microorganismo es lactosa negativo

Fundamento: Si el microorganismo es oxidasa positivo es capaz de oxidar el reactivo volviendolo de color azul Prueba de la Catalasa Aadir sobre las colonias de la placa de Agar Nutritivo unas gotas de H202 10 vol.

Fundamento: Este medio de cultivo tiene un indicador de pH que es Rojo Neutro. Si el microorganismo fermenta la lactosa el pH del medio disminuye y el indicador vira a rosa-rojo. Agar Manitol Salado

Si aparecen burbujas de gas el microorganismo es catalasa positivo Si no paracen burbujas de gas el microorganismo es catalasa negativo

Fundamento: La catalasa es un enzima que desdobla el H2O2 liberando 02.

Si crecen colonias amarillas el microorganismo es manitol positivo Si crecen colonias incoloras el microorganismo es manitol negativo

Fundamento: Este medio de cultivo tiene un indicador de pH que es Rojo Fenol. Si el microorganismo fermenta el manitol el pH del medio disminuye y el indicador vira a amarillo.

. Tabla de lectura API 20E PRUEBA ONPG ADH LDC ODC CIT SUBSTRATOS REACCIONES/ENZIMAS RESULTADOS NEGATIVOS POSITIVOS incoloro amarillo (1) VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA piruvato sdico gelatina de Kohn glucosa manitol inositol sorbitol ramnosa sacarosa melibiosa amigdalina arabinosa produccin de acetona (Voges-Proskauer) gelatinasa fermentacin/oxidacin glucosa (4) fermentacin/oxidacin manitol (4) fermentacin/oxidacin inositol (4) fermentacin/oxidacin sorbitol (4) fermentacin/oxidacin ramnosa (4) fermentacin/oxidacin sacarosa (4) fermentacin/oxidacin melobiosa (4) fermentacin/oxidacin amigdalina (4) fermentacin/oxidacin arabinosa (4) de de de de de de de de de VP 1 + VP 2/10 min (5) incoloro rosa/rojo difusin de no hay difusin de pigmento pigmento negro negro azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso azul/azul verdoso amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo

orto-nitro-fenol-!-Dbeta-galactosidasa galactopiranosido arginina lisina omitina citrato sdico

H2S URE TDA

tiosulfato sdico urea triptofano

IND

triptofano

rojo o arginina deshidrolasa amarillo naranja (2) rojo o lisina descarboxilasa amarillo naranja (2) rojo o omitina descarboxilasa amarillo naranja azulverde utilizacin del citrato verde/azul plido/amarillo (3) depsito produccin de H2S incoloro/grisaceo negro/lnea sutil ureasa amarillo rojo/naranja marrn triptfano desaminasa amarillo oscuro TDA/inmediat incoloro produccin de indol rosa verde plido/amarillo

OX NO3 NO2 MOB McC OFF-F OFF.O

sobre papelde filtro citocromo oxidasa producin NO2 tubo GLU reducin a gas N2 Api M medium o microscopia medio MacConkey glucosa (API OF Medium) movilidad crecimiento Cerado: fermentacin Abierto: oxidacin

OX/1-2 min incoloro violeta NIT 1 + NIT 2 /2-3 min amarillo rojo Zn/5 min rojo amarillo inmvil ausencia verde verde mvil presencia amarillo amarillo

(1) Un amarillo my plido debe considerarse como amarillo (2) Un color naranja despus de 18-24 horas debe considerarse como negativo (3) La lectura debe hacerse en la cpula (zona de aerobiosis) (4) La fermentacin empieza en la parte inferior de los tubos, la oxidacin empieza en la cpula (5) La aparicin de una coloracin rosa plido despus de 10 minutos de considerarse como negativa .

.Tabla de lectura API STAPH PRUEBA 0 GLU FRU MNE MAL LAC TRE MAN XLT MEL NIT PAL VP RAF XYL SAC MDG NAG ADH URE SUBSTRATOS ninguno D-Glucosa D-Fructosa D- Manosa Maltosa Lactosa D- Trehalosa D-Manitol Xilitol D- Melibiosa Nitrato potasio -naftil fosfato Piruvato de sodio Rafinosa Xilosa Sacarosa -metil-D-glucosa N-acetil-glucosa Arginina Urea REACCIONES/ENZIMAS Testigo negativo (Testigo positivo) RESULTADOS NEGATIVOS POSITIVOS rojo -

Acidificacin a partir de carbohidrato

rojo

amarillo

Reduccin de nitatros a nitritos Fosfatasa alcalina Produccin de acetil-metil-carbinol

NIT 1 + NIT 2 /10 min incolora-rosa rojo plido ZYM A + ZYM B /10 min amarillo violeta VP 1 + VP 2 /10 min incolora violeta-rosa

Acidificacin a partir de carbohidrato Arginina Dihrosilasa Ureasa

rojo

amarillo

amarillo amarillo

naranja-rojo rojo-violeta

Los test de acidificacin deben leerse por comparacin a los testigos negativo (0) y positivo (GLU) Los test MNE y XLT pueden verse naranjas cuando los test que los rodean o preceden son positivos. En este caso se les debe dar como negativos.