Revista Brasileira de Cincias Farmacuticas Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences vol. 43, n. 2, abr./jun.

, 2007

Modelagem molecular aplicada ao desenvolvimento de molculas com atividade antioxidante visando ao uso cosmtico
Luciana Scotti1*, Marcus Tullius Scotti2, Carmen Cardoso3, Patrcia Pauletti3, Ian Castro-Gamboa3, Vanderlan da Silva Bolzani3, Maria Valria Robles Velasco1, Carla Maria de Souza Menezes1, Elizabeth Igne Ferreira1
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Departamento de Farmcia, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade de So Paulo, So Paulo-SP, Brasil, Instituto de Qumica, Universidade de So Paulo, So Paulo-SP, Brasil, 3Instituto de Qumica, Universidade Estadual Jlio de Mesquita Filho, Araraquara-SP, Brasil

*Correspondncia: L. Scotti Rua Laudelino de Abreu, 259 05367-030 - So Paulo - SP, Brasil Email - lscotti@dialdata.com.br

Vrias hipteses e constantes estudos so realizados com o intuito de elucidar o envelhecimento cutneo. Para prevenir e contornar este processo torna-se necessrio reforar nossas defesas naturais antioxidantes endgenas. Diversas substncias antioxidantes exgenas, como vitaminas, extratos vegetais, dentre outras, so utilizadas pela Cosmetologia nos produtos antienvelhecimento. O objetivo deste artigo apresentar de que forma a Modelagem Molecular pode ser uma ferramenta til na pesquisa por novas substncias cosmticas antioxidantes para combater o envelhecimento cutneo.

Unitermos Antioxidante Cosmtico Antienvelhecimento Modelagem molecular

INTRODUO
Os estudos das propriedades antienvelhecimento das substncias ativas vm despertando muito interesse de pesquisadores, considerando o aumento da expectativa de tempo de vida observado nas ltimas dcadas e a busca da qualidade de vida durante o processo de envelhecimento (IBGE - Instituto Brasileiro de Geografia E Estatstica, 2004). A diminuio da elasticidade do epitlio era associada rigidez protica da matriz extracelular, resultante da polimerizao do colgeno com a elastina. Porm, estudo recente in vitro recentemente realizado com o uso de microscopia atmica-AFM (Atomic Force Microscopy) atribuiu a rigidez excessiva das clulas epiteliais ao aumento da densidade das fibras do citoesqueleto com o decorrer da idade (Berdyyeva et al., 2005). Entretanto, um das principais razes apontadas pelos pesquisadores como responsvel pelo processo de envelhecimento o

desequilbrio do mecanismo de defesa antioxidante de nosso organismo (Magalhes, 2000). Antioxidantes referem-se a substncias que tm por caracterstica diminuir ou bloquear as reaes de oxidao induzidas pelos radicais livres. Naturalmente, nosso organismo possui substncias que tm por objetivo estabelecer um equilbrio harmnico entre a presena das molculas oxidantes, as antioxidantes e a pele. Esta ltima, por sua rea extensa e funo protetora do organismo ao meio, fica muito exposta ao ataque radicalar, sendo a defesa antioxidante constantemente requisitada. Desta forma, preocupao constante da Cosmetologia prevenir e atenuar o envelhecimento cutneo por meio da busca e do estudo de substncias antioxidantes eficazes, que so oferecidas em produtos cosmticos aos consumidores (Magalhes, 2000). Os dermatologistas procuram formas alternativas de promover fotoproteo efetiva aos seus pacientes, principalmente contra o neoplasma cutneo induzido pela ra-

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diao ultravioleta (UV). Novas substncias antioxidantes como polifenis do ch verde, alfa-MSH, genistena, oligonucleotdeos descodificados por NF-KB, vacinas pTpT e IL-12 encontram-se em pesquisa para este fim (Ting et al., 2003). Nesta pesquisa, a Modelagem Molecular foi associada a Cosmetologia como mtodo de pesquisa inovador, possibilitando estudos avanados na descoberta por novas molculas antioxidantes. A modelagem molecular constitui-se em ferramenta do planejamento racional envolvendo a compreenso da interao ao nvel molecular de uma substncia com seu receptor, sob os pontos de vista quali e quantitativo. Permite que se analise profundamente, no s a estrutura molecular compreendida em determinado sistema biolgico, como tambm fornece meios para prever a potencialidade de molculas candidatas a compostos bioativos. De forma simplificada, pode ser considerada como conjunto de tcnicas computadorizadas baseadas em mtodos de qumica terica e/ou dados experimentais (Cohen, 1996). Substncias antioxidantes cosmticas Uma das maiores causas do envelhecimento cutneo a desorganizao do mecanismo de defesa antioxidante, provocando doenas na pele, resultado das condies causadas por esse desequilbrio e que so conseqncias de danos a estruturas nela presentes, como lipdios, protenas e DNA. Estima-se que cerca de 80% dos sinais visveis causados no envelhecimento so provocados pelos raios ultravioletas e pelos radicais livres formados devido exposio a estes (Buchli, 2002). Os raios solares contm a radiao ultravioleta A, B e C. Os raios UVC incidem num comprimento de onda entre 180 nm e 29 0nm, os UVB entre 290 e 320 nm e os UVA entre 320 e 400 nm. A radiao UVC praticamente no atinge a superfcie terrestre, sendo retida pela camada de oznio, porm essa barreira natural est sendo destruda devido poluio e a emisso de clorofluorcarbono. As radiaes UVA e UVB estimulam a formao de radicais livres, ainda no se tem certeza qual das duas provoca mais o aparecimento destas molculas. Sabe-se que juntas so mais danosas que isoladamente e que o estresse oxidativo provocado por elas nas camadas da pele depende da penetrao dos raios, como exibido na Figura 1 (Shaath, 1997; Magalhes, 2000). A aplicao tpica de antioxidantes reduz os danos oxidativos induzidos pela radiao UV. Porm, essa proteo ser mais eficaz se ocorrer penetrao destas substncias antioxidantes em camadas mais profundas do estrato crneo. Dentre as substncias ativas utilizadas atual-

FIGURA 1 - Representao de diferentes comprimentos de onda (nm) e a respectiva penetrao na pele humana: estrato crneo, epiderme e derme (Shaath, 1997). mente em produtos cosmticos com ao antienvelhecimento, citamos: Carotenides Os carotenides formam um grupo com mais de 600 compostos com aproximadamente 40 tomos de carbono (Fuchs, 1998; Csarini et al., 2003).

Seu mecanismo de ao antioxidante ocorre com a neutralizao do oxignio singlete e formao do carotenide triplete, reduzindo o estresse oxidativo. O oxignio singlete formado atravs da excitao do oxignio do ar pelos raios ultravioletas e d origem a outras espcies radicalares como o nion superxido e o radical hidroxila. O carotenide triplete perde a energia na forma de calor, retornando ao seu estado original (Fuchs, 1998; Csarini et al., 2003). Muitos estudos demonstram os efeitos benficos dos carotenides, principalmente do -caroteno, que um precursor da vitamina A. Atravs da sua ingesto oral

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ocorre reduo das leses celulares, aumentando a fotoproteo (Fuchs, 1998; Csarini et al., 2003). Vitamina C

um antioxidante hidrossolvel, potente agente redutor e atua em inmeras reaes de hidroxilao. capaz de reagir diretamente com os radicais perxidos e regenerar a vitamina E da membrana oxidada, o tocoferoxil em tocoferol, oxidando-se e formando a molcula de diidroascorbato. Os nveis de vitamina C na epiderme atingem at cinco vezes ao da derme. Em adio, o cido ascrbico possui a propriedade de estimular a sntese de colgeno (Fuchs, 1998). A peroxidao lipdica do estrato crneo provocada por radiao UV foi mensurada e a ao antioxidante do cido ascrbico inibitria desse processo foi detectada pelo desaparecimento de subprodutos por meio da espectroscopia de massa. Ocorreu diminuio da concentrao de radicais livres hidroxila na presena de cido ascrbico (Trommer et al., 2002). Glutationa Na Figura 2 observamos as formas oxidada e reduzida da glutationa, sob ao das enzimas glutationa peroxidase, redutase e oxidase. A Glutationa um agente redutor de numerosas enzimas, entre elas, a glutationa peroxidase e a fosfolipdio hidroperxido glutationa peroxidase. Como agente antioxidante, atua por inibio direta de espcies moleculares contendo oxignio reativo e age como doador de hidrognio a outros antioxidantes. A cistena, um dos substratos da -glutamilcistenasintetase, enzima que transforma este aminocido em glutationa (GSH), freqentemente o fator limitante neste processo (Jnior et al., 2001). A glutationa fracamente absorvida por via tpica,

FIGURA 2 Interconverso da glutationa nas formas oxidada e reduzida pela ao das enzimas glutationa peroxidase, redutase e oxidase (JNIOR et al., 2001). sendo que os melhores resultados em produtos cosmticos antioxidantes tm sido obtidos quando empregados derivados da GSH, como GSH-metilster, GSH-etilster e GSH-isopropilster (Okigami, 2001). Vitamina E Existem 4 ismeros da molcula do tocoferol, , , e , sendo que a forma de maior poder antioxidante a . Entretanto, esta no se encontra disponvel no mercado para a elaborao de produtos cosmticos e a forma utilizada o -tocoferol, que fotossensvel (Fuchs, 1998). Graas a sua cadeia isoprenide lateral, os fosfolipdeos se integram membrana celular, com uma face em contato com a gua e outra lipdica, e pode, dessa forma, captar o eltron excedente dos radicais livres, oxidando-se e protegendo a membrana celular. Com o objetivo de aumentar a estabilidade do -tocoferol, a molcula pode ser oxidada ou esterificada originando os derivados tocoferol-quinona e -tocoferol-succinato. Posteriormente, estes derivados so biotransformados no fgado, disponibilizando seu carter antioxidante e elevando a biodisponibilidade do -tocoferol in vivo. A ao anti-

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oxidante do -tocoferol se d tanto por neutralizao das formas radicalares, inibindo a peroxidao lipdica, como por inibio direta da peroxidao lipdica (Okigami, 2001). O radical -tocoferoxil formado aps a neutralizao dos radicais livres pode, na presena de ubiquinol, se reconstituir sua forma fenlica e retornar ao seu potencial antioxidante. O ubiquinol, por sua vez, se transforma em sua forma oxidada, a ubiquinona. Do mesmo modo, a molcula de -tocoferoxil, na presena de selnio ou enxofre, pode reagir com o ascorbato, que se transforma no radical ascorbil, e recuperar a forma antioxidante. O -tocoferoxil pode tambm ser neutralizado ao reagir com outra espcie radicalar, resultando em molcula no reativa (Okigami, 2001). Dimetilaminoetanol (DMAE)

Encontrado em todas as clulas do organismo, o cido -lipico possui elevado poder antioxidante, sendo capaz de potencializar os efeitos antioxidantes de outras vitaminas, como o cido ascrbico. Ao antiinflamatria tambm registrada na literatura. O cido -lipico apresenta caractersticas hidro- e lipossolveis, influenciando o metabolismo celular na eliminao de resduos txicos. Auxilia na recuperao de leses, na absoro de nutrientes, na quelao de metais de transio e na inibio da ativao do fator NFk-B (Nuclear Factor Kappa Beta), que induz produo de citocinas e a quimiotaxia, inibindo a resposta inflamatria. Em adio, ainda impede e/ou reverte as reaes entre o colgeno e a glicose (Magalhes, 2000). Coenzima Q

O dimetilaminoetanol (DMAE) confere resistncia e estabilidade para a membrana das clulas plasmticas, influncia na sntese do cido aracdnico e dos mediadores pr-inflamatrios. Inicialmente, foi usado como um suplemento alimentcio (Cole et al., 2002). A ao do DMAE controversa. Alguns autores acreditam se relacionar produo de acetilcolina, a partir de colina e acetil-CoA por meio da ao da colina acetiltransferase. Com o aumento da produo e liberao de acetilcolina, acredita-se ocorrer aumento no tnus muscular. Na verdade, estudos devem ser realizados comprovando este efeito (Cole et al., 2002). Na atualidade, muitos produtos cosmticos oferecem ao consumidor uma formulao mista com aminocidos, cido carboxipirrolidnico, steres de vitamina C, cido -lipico. Promovem firmeza da pele, atenuao de rugas, aparncia jovial e suavidade (Cole et al., 2002). O aparecimento de leve irritao cutnea pode surgir durante as primeiras quatro semanas de uso tpico do DMAE (Cole et al., 2002). cido -lipico

A coenzima Q um derivado das quinonas, que apresentam natureza lipossolvel e possuem de 1 a 12 unidades isoprenides (n). A ubiquinona (quinona em que n=10)] ou coenzima-Q a mais comum em humanos e exerce sua atividade antioxidante atravs da transferncia de prtons da membrana mitocondrial, neutralizando radicais reativos de oxignio e prevenindo os danos nas biomolculas (Magalhes, 2000). Extratos Vegetais Os vegetais so ricos em substncias antioxidantes e atribui-se esta caracterstica ao processo evolutivo destas espcies como proteo natural aos radicais livres formados pela radiao UV necessria fotossntese. Diversos extratos vegetais quando aplicados em modelos animais ou cultura de clulas neutralizam a reatividade radicalar, diminuindo leses celulares, a protenas, lipdeos, cidos graxos. Alguns destes compostos encontrados e extrados de vegetais so os polifenis, os flavonides, os organosulfdeos e os indis. Os compostos fenlicos formam o maior grupo de antioxidante extrado de vegetais, neutralizando a reatividade radicalar atravs da doao de um tomo de hidrognio; mecanismo explicado com maiores detalhes na seo sobre estruturaatividade (FGuyer et al., 2003; Nikolic, 2006). Os compostos fenlicos so polares e encontram-se

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nos vegetais sob a forma de polmeros, na qual esto os taninos e as ligninas. Os taninos hidrolisveis contm um ncleo central de glicose ou um lcool polidrico, esterificado com cido glico ou elgico, e so prontamente hidrolisveis com cidos, bases ou enzimas. Os taninos condensados, presentes no vinho tinto, so precursores das procianidinas, formando posteriormente dmeros (Soares, 2002).

Podemos ainda citar Ginkgoacea (Ginkgo biloba), Trifolium pretense, Allium sativum, Silybum marianum, entre outros (FGuyer et al., 2003). Ervas usadas na culinria como alecrim, organo, canela, slvia e tomilho tambm apresentam concentrao elevada de antioxidantes (Dragland et al., 2003). Determinao experimental da atividade antioxidante Vrios mtodos de anlise da atividade antioxidante foram desenvolvidos para avaliao do potencial antioxidante de alimentos, fluidos biolgicos e outros. So mtodos descritos na literatura, que necessitam de equipamentos e tcnicas especficas e que medem a atividade antiradicalar desenvolvida em contato com os radicais: 2,2-difenil-1-picrilidrazila (DPPH), nion superxido, radical hidroxila, perxido, dentre outros. O resultado da anlise depende da especificidade do radical pelos reagentes da reao de cada mtodo (Adom et al., 2002). Antioxidantes podem ser hidrossolveis, lipossolveis ou ambos; assim a escolha do mtodo de anlise deve ser feita conforme a natureza do composto investigado (Adom et al., 2002). A seguir segue a descrio dos mtodos mais utilizados na anlise da atividade antiradicalar: Quimioluminescncia - amplamente utilizada para avaliar a atividade antioxidante baseando-se nos reagentes da reao de Fenton. Por meio da reao do ferro e EDTA, adicionando-se perxido de hidrognio, luminol, KH2PO4 e NaOH a 25 C. Avalia-se o sinal CL (quimioluminescncia). A medio deve iniciar imediatamente aps o comeo da reao (Cheng et al., 2002; Cheng et al., 2003). TBARS (mtodo desoxirribose para avaliao da atividade antioxidante com tiobarbitrico) - a reao ocorre entre cloreto de ferro II, EDTA, perxido de hidrognio, desoxi-ribose, KH2PO4 e NaOH em pH

O ch verde ou preto extrado da espcie Camellia sinensis consistui um extrato vegetal rico em antioxidantes. Existe uma grande variao na sua composio, mas de forma geral apresentam catequinas (epigalocatequina, epigalocatequina-3-galato, epicatequina galato e galocatequina). Em adio, no ch tambm encontramos flavonides (quercetina, kaempferol, myricintina), cafena, teofilina, alcalides (teobromina), cido polifenlicos e cido glico (FGuyer et al., 2003). Estudo recente em ratos aps administrao oral de ch verde e submetidos radiao UV demonstrou reduo dos danos oxidativos e menor induo de metalonoproteinases (MMPs), prevenindo danos oxidativos provocados pela radiao UV (Vayalil et al., 2004). Muitas espcies vegetais so utilizadas na teraputica e possuem atividade comprovada cientificamente.

TABELA I Estruturas qumicas de catequinas encontradas no ch (Tasdemir et al., 2006). Nome (+)-catequina (2R,3S) (-)-catequina (2S,3R) (+)-epicatequina (2S,3S) (-)-epicatequina (2R,3R) (-)-galocatequina (2S,3R) (-)-epigalocatequina (2R,3R) (-)-epigalocatequingalato (2R,3R) R H H H H H H Galloyl Posio do OH 3,5,7,3,4 3,5,7,3,4 3,5,7,3,4 3,5,7,3,4 3,5,7,3,4,5 3,5,7,3,4,5 3,5,7,3,4,5

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7,4. A reao realizada a 25 C e, posteriormente, adiciona-se o cido tricloroactico e cido tiobarbitrico. A leitura do sinal de fluorescncia depende da extrao do cromforo. Aquece-se a 80 C por 15 minutos e efetua-se a leitura da absorvncia a 532 nm. A grande desvantagem deste mtodo reside na dependncia da oxidao do substrato, influenciada pela temperatura, presso, e outras caractersticas do meio (Cheng et al., 2003). Reao com DPPH - mtodo baseado na estabilizao do radical 2,2-difenil-1-picrilidrazila (DPPH), no necessitando extrao. Como apresentado na Figura 3, a reao determinada segundo mudana de cor de violeta ao amarelo (Zhang, 1999).

compostos hidroflicos ou lipoflicos. Este mtodo bastante utilizado em compostos fenlicos por apresentar propriedades eletrnicas do ction-radical em doar eltrons e formar ligaes de hidrognio.

FIGURA 4 - Reaes com ction radical ABTS (Pannala et al. 2001). A reao monitorada por ensaios espectrofotomtricos medindo a absorvncia a 734 nm, valor caracterstico para detectar a reao do composto em estudo com o ction ABTS (Pannala et al., 2001). O esquema das reaes envolvendo o ction radicalar ABTS est representado na Figura 4 (Pannala et al. 2001).

FIGURA 3 Reaes com DPPH (Cheng et al., 2003). O procedimento deste ensaio foi descrito por Mensor e colaboradores em que cada soluo amostra (2,5 mL) foi acondicionada com 1 mL de soluo de DPPH (0,03 mM) nas diferentes concentraes (250-5 g/mL). Aps o tempo de reao de 30 minutos, a absorvncia foi lida em 518 nm, segundo a Equao 1: Equao 1 %Inibio = [(AB AA) / AB] X 100

RELAO ESTRUTURA-ATIVIDADE (SAR)

O estudo das relaes estrutura-atividade de um composto-prottipo e seus anlogos auxilia na determinao de quais partes da molcula so responsveis pela atividade biolgica, ou seja, o grupo farmacforo (Thomas, 2000). As relaes estrutura-atividade geralmente so elaboradas alterando-se parte da estrutura qumica do prottipo e observando-se qual influncia na atividade sob o ponto de vista quali e quantitativo. Pode-se alterar a dimenso e a conformao do esqueleto de carbono, a natureza e o grau de substituio, ou ainda a estereoqumica (Thomas, 2000). A atividade antioxidante est altamente relacionada capacidade de doao de eltrons. A etapa de transferncia do hidrognio tem se destacado, mas a atividade antioxidante no depende apenas fora de energia da ligao O-H. A estabilizao das espcies ction-radicalar e radicalar formadas tambm deve ser considerada (Equao 2) (Wright et al., 2001; Cao et al., 2005). Equao 2 Ar-OH + RO2 [Ar-OH+....RO2-] [Ar-O...ROOH] [Ar-O + ROOH]

onde: AB absorvncia da amostra-branco (t = 0 min); AA absorvncia do extrato pesquisado (t = 30 min). Um controle negativo com 2,5 mL de etanol e 1 mL de DPPH e um branco foi realizado para o extrato (2,5 mL) e 1 mL de etanol, foram feitos para todas as concentraes. Os testes foram realizados em triplicata. Os valores das IC50 foram calculados por regresso linear e se obteve o grfico no qual a abscissa representa a concentrao do extrato testado e a ordenada proporo da porcentagem da atividade antioxidante (Mensor et al., 2001). Reao com o ction radicalar ABTS - outro mtodo espectrofotomtrico muito aplicado para analisar

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Muitos fatores influenciam a atividade antioxidante dos compostos de natureza fenlica, em especial a posio de substituio e o nmero de grupos hidroxila (OH), as propriedades de outros grupos substituintes e a possibilidade de formao de ligaes de hidrognio. A posio de substituio da hidroxila no anel fenlico, considerada em relao a uma posio fixa, influencia diretamente a atividade antioxidante. Compostos contendo a hidroxila em para (posio 4) so mais ativos do que aqueles substitudos em orto ou meta (posies 1 e 2, respectivamente) (Pannala et al. 2001; Cheng et al., 2002, 2003). Os flavonides so os compostos de maior interesse cientfico entre os fenlicos. A seguir, est representada a frmula estrutural do um flavonide, o flavon-3-ol, com a numerao nos carbonos e nomenclatura dos anis.

antioxidante comprovada por apresentarem heterotomo oxignio em orto (Zhang, 1999; Pannala et al., 2001):

FIGURA 6 Ligaes de hidrognio na espcie neutra de substncias contendo oxignio em grupo substituinte (Zhang, 1999). As ligaes de hidrognio no composto na forma neutra no aumentam a atividade antioxidante, mas aps a abstrao do hidrognio fenlico, estabilizam o radical, favorecendo a ao. A baixa atividade antioxidante na wogonina, molcula representada na Figura 7, que possui um OH resorcinlico, se deve estabilizao do composto que se encontra em equilbrio qumico estabelecido entre os anis cromanide conjugado e anel resorcinlico. De forma anloga, encontramos o equilbrio entre os grupos OCH3 e OH (Zhang, 1999; Cheng et al., 2002, 2003).

Compostos com dois (mais comum) ou trs substituintes grupos hidroxilas no anel benznico possuem maior atividade antioxidante do que os monohidroxilados, de acordo com a relao apresentada na Figura 5 (Pannala et al. 2001; Cheng et al., 2002, 2003).

FIGURA 5 Relao da atividade antioxidante de acordo com o nmero e posies dos grupos hidroxilas (Cheng et al., 2002). Na presena de grupo hidroxila substitudo em posio orto e/ou para em anel contendo heterotomo nitrognio ou oxignio, a atividade antioxidante potencializada por efeito de ressonncia entre o par de eltrons do tipo p do heterotomo e o radical fenxi formado. As molculas apresentadas na Figura 6 possuem atividade

FIGURA 7 Estrutura qumica da wogonina e suas relaes intramoleculares (Cheng et al., 2003). Em 2001, por meio de estudo cintico, Pannala e colaboradores (Pannala et al., 2001) avaliaram a capacidade antioxidante de substncias derivadas de flavonides, verificando as seguintes caractersticas estruturais em relao estrutura prottipo apresentada na Figura 8. A posio do grupo hidroxila no anel B tem papel importante na presena da atividade antioxidante. Assim,

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a posio para (C4) favorece essa ao, sendo que ser reduzida ou ausente quando o grupo hidroxila estiver em posies orto e meta. A presena de um segundo grupo hidroxila no anel B potencializa a atividade antioxidante; A presena de dissubstituio o-diidroxi no anel B e da dupla ligao C2-C3, conjugada ao grupo 4-oxo (C4), no anel C (como observado nas flavonas) essencial atividade antioxidante; A presena de grupo hidroxila na posio 3 do anel heterocclico C (C3) contribui na atividade antioxidante; Grupos hidroxila nas posies 5 e 7 do anel A so de menor importncia; Compostos diidroxilados possuem maior atividade quando comparados com outros compostos monoidroxilados estudados, mostrando maior conjugao entre o grupo hidroxila da posio 4 e o presente na posio 3 do anel C;

Compostos com trs grupos hidroxilas so mais ativos que os diidroxilados. Cheng e colaboradores em trabalho que analisou comparativamente a atividade potencial antioxidante de 15 molculas, por modelagem molecular, observaram a reatividade do cido glico e pirogalol (Figura 9). Entretanto, ressaltaram tambm a elevada atividade proxidante em solues de pirogalol e cido glico devido pr-oxidao em espcies quinides, como mostrado no Figura 10 (Pannala et al., 2001; Cheng et al., 2003). Reportaram a reduo do Fe III ao Fe II provocada por estes compostos em incubao, influindo na reao de Fenton (Equao 3) e formao de radicais OH. Ocorre, tambm, auto-oxidao, produo de H2O2, aumentando a concentrao de radicais hidroxila segundo a reao de Fenton e ciclo Haber-Weiss (Equao 4): Equao 3 Equao 4 Fe2+ + H2O2 Fe3+ + OH- + OH Fe3+ + O2 Fe2+ + O2

s propriedades eletrnicas soma-se a lipofilicidade (Cheng et al., 2002; Ghose et al., 1988), que representa a

Legenda: Em azul -Substituintes menos importantes atividade antioxidante; Em vermelho - Substituintes importantes atividade antioxidante.

FIGURA 8 Relao estrutura-atividade de flavonol e flavona (Lien et al.; 1999; Pannala et al., 2001).

FIGURA 9 Estruturas qumicas do cido glico e pirogalol (Cheng et al., 2002).

FIGURA 10 - Reaes de oxidao que geram espcies quinides (Cheng et al., 2003).

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afinidade de uma molcula ou de um fragmento por ambiente lipoflico (Ghose et al., 1988; Leach, 2001). O clculo de propriedade lipoflica adicional aos processos de clculos de energia e anlise conformacional. Esta propriedade est relacionada ao coeficiente de partio (LogP). Quanto maior o coeficiente de partio, maior a afinidade da substncia pela fase orgnica e, conseqentemente, a lipofilicidade do composto. O coeficiente de partio definido pela razo entre a concentrao da substncia na fase orgnica e sua concentrao na fase aquosa em um sistema de dois compartimentos sob condies de equilbrio, podendo ser obtido por mtodo experimental, como por determinao por shake-flasK, ou ainda por mtodo terico, como o desenvolvido por Ghose-Pritchett-Crippe, disponvel nos programas de Modelagem Molecular (Ghose et al., 1988). A Modelagem Molecular pode ser utilizada como ferramenta, calculando propriedades fsico-qumicas de compostos em estudo, como a lipofilicidade, entalpia de formao, dentre outras. Assim, pode-se empregar programas de Modelagem para obteno terica do parmetro de lipofilicidade de substncias. A aplicao tpica de antioxidantes reduz os danos oxidativos induzidos pela radiao UV. Em um estudo realizado, solues aquosas de cidos cafico e ferrlico, em pH 3 e 7,2 foram testadas topicamente e foi observada a permeao cutnea. A lipofilicidade do cido ferrlico maior que do cido cafico e atribuiu-se este fato sua maior penetrao atravs do estrato crneo, reduzindo o eritema induzido pelos raios UV (Saija et al., 2000). A quercetina um excelente antioxidante e diminui a peroxidao lipdica induzida pelos raios UV. Porm, grande insolubilidade em meio aquoso dificulta sua biodisponibilidade e limita sua ao como agente fotoprotetor. Por meio de esterificao da hidroxila da posio 3 da molcula da quercetina com alcois de cadeias alifticas de diferentes tamanhos foram obtidos os steres acetato (Q-ac), proprionato (Q-pr) e palmitato (Qpal) de 3-O-quercetina, que se apresentaram como eficazes agentes fotoprotetores (Saija et al., 2003).

MODELAGEM MOLECULAR
A Modelagem Molecular envolve clculos de parmetros selecionados para determinada molcula, fornecendo informaes sobre suas propriedades (Cohen, 1996). Os mtodos de estimativa ou clculo de propriedades moleculares podem ser divididos em (Cohen, 1996): Interpolao: a correlao encontrada entre a propriedade ou caracterstica desejada e outras propriedades ou caractersticas moleculares; Extrapolao: a correlao no inclui a molcula de interesse, mas extrapolando a correlao possvel estimar a propriedade desejada. Clculos computacionais: clculos das propriedades moleculares realizadas por computador, com nveis diversos de variveis, que podem substituir as medidas experimentais quando o procedimento necessrio muito elaborado ou de difcil realizao (Cohen, 1996). Algumas propriedades como: energia de formao, energia de ativao, momento de dipolo, caractersticas de orbitais moleculares, eletrnicas, atmicas, de ligaes, polarizabilidade, carter hidrofbico, e outras como coeficiente de partio (logP) e refratividade molar (MR) podem ser originados por atravs de clculos computacionais que incluem mecnica molecular, mtodos semiempricos, clculos ab initio e outros mtodos empricos (Cohen, 1996; SantAnna, 2002). Os trs principais mtodos tericos para clculos computacionais de propriedades podem ser classificados em mtodos empricos (mecnica molecular), mtodos semi-empricos e clculos ab initio (Cohen, 1996). Mecnica molecular e mtodos semi-empricos envolvem clculos por meio de parametrizaes e clculos ab initio reproduzem um experimento sem utilizar parmetros. Os melhores resultados obtidos nos dois primeiros mtodos so aplicados em interpolaes com dados experimentais (Cohen, 1996; Leach, 2001). Clculos semi-empricos so baseados em mecnica quntica, envolvendo funes de onda que incluem orbitais de Slater (STO) e de Gaussian (GTO). Mtodos semi-empricos tratam linearmente combinaes dos orbitais interagindo computacionalmente com um campo de fora estvel (SCF) e permitindo a minimizao de energia do sistema (Cohen, 1996). Os mtodos semi-empricos diferem entre si pelas aproximaes ao considerar a repulso dos eltrons de diferentes orbitais. Estas aproximaes so realizadas com valores de parametrizao correspondentes aos obtidos por clculos ab initio e/ou experimentais. Os mtodos recentes usam parametrizaes oriundas de clculos ab

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initio baseados na teoria de Huckel estendida e no programa CNDO (Complete Neglet of Differential Overlap), que auxiliam nos clculos de orbitais e cargas. A fim de obter dados mais seguros quanto energia, mtodos semiempricos aperfeioados foram introduzidos como MINDO-3 (Modified Intermediate Neglect of Differential Overlap), MNDO (Modified Neglect of Diatomic Overlap) e AM1 (Austin Model 1) (Cohen, 1996; SantAnna, 2002). Baseando-se nestas propriedades e em estudos prvios que correlacionam a estrutura qumica com a atividade biolgica e o pesquisador em modelagem molecular analisa a srie de molculas para as quais efetuou os clculos computacionais e pode predizer a atividade esperada. As anlises experimentais sero necessrias para a validao da hiptese aventada. Atividade antioxidante e parmetros fsico-qumicos A atividade antioxidante encontra-se diretamente relacionada s propriedades eletrnicas das substncias, que podem ser representadas nos estudos de modelagem molecular, por meio de clculos de parmetros, mencionados a seguir: Hf: diferena de energia de entalpia entre as espcies radicalar (obtida aps a abstrao do hidrognio) e neutra (fenlica). Representa a fora de ligao hidroxila (Zhang, 1999; Cheng et al., 2002, 2003); Hox ou Ea: diferena de energia de entalpia entre as espcies catinica e neutra. A espcie catinica seria gerada a partir da transferncia de um nico eltron da espcie neutra (Cheng et al., 2002, 2003); EHOMO: energia do orbital molecular ocupado de maior energia (HOMO - Highest Occupied Molecular Orbital). Parmetro representativo da capacidade de doar eltrons (Zhang, 1999; Cheng et al., 2002, 2003); ELUMO, parmetro relacionado capacidade de receber eltrons de uma molcula, representada pela energia do orbital molecular desocupado de menor energia, (LUMO- Lowest Unoccupied Molecular Orbital) (Zhang, 1999; Cheng et al., 2002, 2003); (H-L)Gap, que representa a reatividade do composto. Quanto mais reativo, menor o intervalo (Gap). obtido pela diferena de energia entre os orbitais HOMO e LUMO (Cheng et al., 2003); Distribuio de spin: quanto maior a capacidade de hiper-conjugao de spin no anel aromtico da espcie radicalar intermediria formada, maior sua estabilizao e maior seu efeito anti-radicalar (Cheng et al., 2003). Na literatura disponvel sobre o estudo da atividade antioxidante empregando modelagem molecular encon-

tramos controvrsias: parmetros representando a capacidade de doar eltron (EHOMO) indicam boa predio da atividade antioxidante em tocoferis, mas que pode ser incorreta quando aplicada aos flavonides, resultado atribudo formao de ligaes de hidrognio intramoleculares nestes ltimos. Assim, EHOMO pode indicar relativa predio de atividade em molculas de estruturas qumicas diferentes/diversas, com e sem grupos metila em meta. Este fato no foi observado para o Hf, justificando o fato de alguns autores defenderem a predio da atividade somente pelo parmetro Hf afirmando ser o HOMO de capacidade superficial (Zhang, 1999; Cheng et al., 2003). De modo geral, tem-se observado em estudos de modelagem molecular que o aumento da cintica da reao entre os compostos fenlicos e radicais hidroxila aumenta com a capacidade de doar eltrons (E HOMO) e a entalpia de transferncia de um nico eltron (Ea), mas inversamente proporcional ao valor da energia de dissociao da ligao O-H (Hf) e distribuio de spin aps a abstrao do H (Dsr) (Cheng et al., 2003). Scotti (2006) realizou estudo de Modelagem Molecular onde os parmetros fsico-qumicos descritos acima foram calculados de compostos fenlicos com potencial antioxidante pertencentes espcie Chimarrhis turbinata e Arrabidea samydoides (Figuras 11 e 12). Utilizou-se o programa HyperChem 6.0, otimizao da geometria foi feita, adotando-se o mtodo semi-emprico AM1 (Austin Model 1) (Dewar et al., 1985). As estruturas otimizadas das espcies neutras foram submetidas anlise conformacional e o confrmero de energia mnima no estado gasoso foi selecionado e utilizado para prosseguir no clculo de parmetros fsico-qumicos. Posteriormente foram submetidos regresso linear, utilizando os programas BILIN e BuildQsar. A matriz de correlao apresentada na Tabela II. Preferencialmente usaram-se na mesma equao coeficientes de correlao 0,5. A presena de duas ou mais variveis na mesma equao no mostra acrscimo do valor de F, como esperado quando aumenta o nmero de variveis independentes. Levando em conta a definio do valor de F, conclumos que a somatria do resduo no diminuiu suficientemente com relao aos graus de liberdade. As equaes que correlacionam a atividade antioxidante com apenas uma varivel foram mais significativas nessa anlise. A anlise quantitativa, aps o ajuste de pontos no plano valores preditos versus observados, indicou a remoo dos outliers (Mol 1, 3, 6 e 10f). Nestas molculas existem caractersticas que no so explicadas pelo modelo encontrado. A grande diversidade estrutural na srie de compostos estudados pode ser um dos motivos para serem outliers, sendo

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FIGURA 11 - Substncias antioxidantes isoladas da espcie Chimarrhis turbinata. HOX, como podemos observar nas equaes que seguem: Equao 5 pIC50 = +1,065 (0,42) EHOMO +14,24(3,78) (n=09; r=0,91; r 2=0,83; s=0,09; F=33,71; Q 2=0,19; SPRESS=0,25) Equao 6 pIC50 = +0,52(0,23) ELUMO +5,11(0,19) (n=09; r=0,89; r 2=0,79; s=0,10; F=26,20; Q 2=0,54; SPRESS=0,16) Equao 7 pIC50 = -0,01(0,01) DHOX +7,41(2,05) (n=09; r=0,57; r 2 =0,32; s=0,15; F=9,14; Q 2 =0,18; SPRESS=0,25) As melhores equaes representam os parmetros EHOMO e, posteriormente, ELUMO. Isto indica a estreita ligao entre atividade antioxidante exercida pelo composto e suas caractersticas eletrnicas calculadas por modelagem molecular. A capacidade de doar eltrons est direta-

FIGURA 12 - Substncias antioxidantes isoladas da espcie Arrabidea samydoides. muito difcil obter um modelo que explique caractersticas de toda srie. Aps a retirada destas molculas obteve-se correlao significativa com EHOMO e com ELUMO e menor com

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TABELA II Matriz de correlao CLogP CLogP (H-L)GAP Hf HOX ELUMO EHOMO 1 (H-L)GAP 0,094 1 Hf 0,049 0,227 1 HOX 0,024 0,027 0,171 1 ELUMO 0,289 0,22 0,034 0,249 1 EHOMO 0,113 0,042 0,156 0,685 0,31 1

mente ligada reatividade da molcula na neutralizao de radicais livres. A ELUMO, representando a facilidade do composto de receber eltrons, tambm influi, mas em menor proporo. Pelas equaes encontradas, notamos que tanto a EHOMO quanto a ELUMO contribuem, embora em propores diferentes, em relao diretamente proporcional com a atividade antioxidante. Essas observaes realizadas por meio da aplicao do modelo clssico de QSAR so concordantes com o raciocnio de que a atividade antiradicalar de um composto mais complexa que a abstrao do hidrognio do grupo hidroxila, aqui representado pelo parmetro Hf.

strengthen our endogenous antioxidant natural defenses. Diverse exogenous antioxidant substances, as vitamins, vegetal extracts and others, have been used by the Cosmetology in antiaging products. The objective of this paper is to show how the Molecular Modeling can be an useful tool in the research for new antioxidant cosmetic substances to face the cutaneous aging. UNITERMS: Antioxidant. Cosmetic. Antiaging. Molecular modeling.

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4. CONCLUSO
Por meio de clculos dos parmetros e do estudo das relaes estrutura-atividade das molculas potencialmente antioxidantes, pode-se determinar o grupo farmacofrico necessrio atividade e, posteriormente, seleo dos compostos de interesse dentro da srie em questo. A Modelagem Molecular ferramenta inovadora que pode ser utilizada na rea de Cosmetologia, possibilitando a identificao de molculas antioxidantes prottipos, com vistas aplicao na rea antienvelhecimento. importante ressaltar a importncia da Modelagem Molecular como planejamento racional da pesquisa, no substituindo ensaios de avaliao de eficcia cosmetolgica, mas sim alcanando resultados com menor intervalo de tempo e custo.

ABSTRACT
Molecular modeling applied to the development of molecules with antioxidant activity for cosmetic use Some hypotheses and constants studies are made with intention to elucidate the aging process. To prevent and to attenuate the cutaneous aging it becomes necessary to

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