Ciclo de Krebs ou do cido ctrico; Rui Fontes

O ciclo de Krebs ou do cido ctrico

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Por aco das enzimas da gliclise a glicose , no citosol das clulas, parcialmente oxidada a piruvato. O piruvato entra para a mitocndria e, atravs da aco cataltica da desidrognase do piruvato (piruvato + NAD+ + CoA acetil-CoA + NADH + CO2), d origem a acetilCoA. No catabolismo dos aminocidos, dos cidos gordos e do etanol tambm se forma acetil-CoA. O ciclo de Krebs (do citrato ou dos cidos tricarboxlicos) uma via metablica central no metabolismo dos nutrientes pois permite a oxidao do grupo acetilo da acetilCoA (a CO2) com a concomitante reduo do NAD+ e do FAD a NADH e FADH2 que so intermedirios no processo de reduo do O2 (a H2O). Nas mitocndrias hepticas, as enzimas envolvidas nas reaces do ciclo de Krebs so: (1) a sntase do citrato (acetil-CoA + oxalacetato + H2O citrato + CoA), (2) a aconitase (citrato isocitrato), (3) a desidrognase do isocitrato (isocitrato + NAD+ -cetoglutarato + CO2 + NADH), (4) a desidrognase do -cetoglutarato (-cetoglutarato + NAD+ + CoA succinil-CoA + NADH + CO2), (5) a sinttase de succinil-CoA [succinil-CoA + GDP (ou ADP) + Pi succinato + CoA + GTP (ou ATP)], (6) a desidrognase do succinato (succinato + FAD fumarato + FADH2), (7) a fumrase (fumarato + H2O malato) e (8) a desidrognase do malato (malato + NAD+ oxalacetato + NADH). A sinttase de succinil-CoA existe na forma de duas isoenzimas sendo que uma delas tem maior especificidade para o ADP e a outra maior especificidade para o GDP. Embora a cnase dos nucleosdeos-difosfatos no seja, habitualmente, considerada uma enzima do ciclo de Krebs ela tem um papel importante neste contexto j que permite a transferncia do fosfato terminal do GTP (formado pela aco de uma das isoenzimas da cnase do succinato) para o ADP e a formao de ATP (GTP + ADP GDP + ATP). Por contraponto com a formao de ATP na fosforilao oxidativa esta fosforilao do ADP diz-se que ocorre ao nvel do substrato. A fase preparatria da oxidao do grupo acetilo da acetil-CoA a CO2 comea com a sua ligao ao oxalacetato por aco da sntase do citrato. Os passos oxidativos em que ocorre a reduo do NAD+ e do FAD so os catalisados pelas desidrognases do isocitrato, cetoglutarato, do malato (NAD+ reduzido a NADH) e do succinato (FAD reduzido a FADH2). As descarboxilaes (e consequente libertao de CO2) ocorrem durante as aces catalticas da desidrognase do isocitrato [isocitrato (6C) + NAD+ -cetoglutarato (5C) + CO2 + NADH] e da desidrognase do -cetoglutarato [-cetoglutarato (5C) + NAD+ + CoA succinil-CoA (4C-CoA) + NADH + CO2]. No ltimo passo do ciclo de Krebs ocorre a regenerao do oxalacetato. Uma viso global do processo permite compreender que se diga que o oxalacetato tem, no ciclo de Krebs, um papel cataltico. Tal como as enzimas (que em cada ciclo cataltico se ligam ao substrato e se regeneram como enzima livre aps a formao do produto) o oxalacetato reage com o acetil-CoA na primeira reaco do ciclo mas regenerado na ltima quando o malato oxidado. A equao que descreve o somatrio das reaces que constituem o ciclo de Krebs CH3CO-CoA + 2 H2O + 3 NAD+ + FAD + ADP + Pi 2 CO2 + CoA + 3 NADH + FADH2 + ATP mostra que, conceptualmente, este pode ser entendido como um somatrio de trs processos: (1) a hidrlise da acetil-CoA, (2) a oxidao do acetato a CO2 e (3) a sntese de ATP (a partir de ADP + Pi). CH3CO-CoA + H2O CoA + CH3COOH (1) + CH3COOH + 2H2O + 3NAD + FAD 2CO2 + 3 NADH + FADH2 (2) ADP + Pi ATP + H2O (3) Os processos (1) e (2) referidos acima so exergnicos enquanto o (3) endergnico e s ocorre porque est acoplado, via aco cataltica da sinttase do succinato e da cnase dos Pgina 1 de 3

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nucleosdeos-difosfatos, com os processos exergnicos de rotura da ligao tioster do succinil-CoA (catalisada pela sinttase de suucinil-CoA) e da ligao anidrido (-) do GTP (catalisada pela cnase dos nucleosdeos difosfatos).
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A oxidao do grupo acetilo da acetil-CoA implica a reduo do NAD+ a NADH2 e do FAD a FADH2. O processo s pode ocorrer em regime aerbio pois o nico mecanismo que, na mitocndria, permite a regenerao do NAD+ e do FAD a cadeia respiratria que consome O2. O O2 o oxidante ltimo que, na cadeia respiratria, se reduz a H2O possibilitando esta regenerao. O NAD+ e o FAD existem nas clulas em concentraes de ordem micromolar e tm de ser regenerados para permitir a oxidao da glicose, de cidos gordos, de etanol e de aminocidos que so ingeridos em quantidades de alguns moles por dia. As enzimas que catalisam reaces fisiologicamente irreversveis so as catalisadas pela sntase do citrato e pelas desidrognases do isocitrato e do -cetoglutarato. Estas enzimas so todas inibidas pelo ATP e estimuladas pelo ADP de tal forma que a velocidade com que ocorre a oxidao de acetil-CoA e a formao de CO2 aumenta quando aumenta a velocidade de hidrlise do ATP. As desidrognases do isocitrato e do -cetoglutarato tambm so inibidas por um dos produtos, o NADH; em condies metablicas (como, por exemplo, dficit de O2) em que a velocidade dos processos oxidativos da cadeia respiratria esto baixa ocorre acumulao de NADH que inibe a oxidao da acetil-CoA e a produo de CO2. Assim no processo evolutivo foram, nestas enzimas, positivamente seleccionas caractersticas que contribuem para a homeostasia e em particular para a manuteno de concentraes de ATP compatveis com a vida e o trabalho celular. de notar que a acetil-CoA no estimula a actividade das enzimas do ciclo de Krebs; ou seja, no de esperar que a ingesto aumentada de glicose leve por si s a um aumento da oxidao da acetil-CoA formada a partir desta. Os sistemas oxidativos e em particular o ciclo de Krebs funcionam mais ou menos lentamente em funo do gasto de ATP: s possvel aumentar a oxidao da acetil-CoA (e, em ltima anlise, a oxidao dos nutrientes) aumentado o consumo de ATP, ou seja, fazendo exerccio. O ciclo de Krebs tem caracter anfiblico: os intermedirios deste ciclo so intermedirios no catabolismo dos nutrientes mas tambm podem ser intermedirios em processos anablicos, como a sntese de cidos gordos a partir de glicose, a sntese de glicose a partir de muitos aminocidos ou a sntese de alguns aminocidos a partir de glicose. A acetil-CoA, reage com um intermedirio do ciclo de Krebs (o oxalacetato) formando citrato. Esta reaco pode ser interpretada como a converso de um intermedirio do ciclo de Krebs noutro intermedirio do ciclo de Krebs e no pode, por este motivo, aumentar a concentrao dos intermedirios do ciclo de Krebs entendidos como um todo. Pelo contrrio, alguns aminocidos (como, por exemplo, o glutamato, a metionina, a fenilalanina e o aspartato) geram, no seu catabolismo, intermedirios do ciclo de Krebs mas o processo no pode ser interpretado como a converso de um intermedirio noutro. Estes aminocidos dizem-se glicognicos porque aumentam a concentrao dos intermedirios do ciclo de Krebs podendo formar oxalacetato que pode converter-se em glicose. Ao conjunto dos processos que permite formar glicose a partir de compostos no glicdicos chama-se gliconeognese. A maioria dos cidos gordos contm um nmero par de carbonos. Estes cidos gordos geram, no seu catabolismo, apenas acetil-CoA e no podem, portanto, contribuir para a formao de glicose: no so glicognicos. Pelo contrrio, a glicose pode dar origem a cidos gordos cuja sntese ocorre no citosol partindo de acetil-CoA (lipognese). A acetilCoA que se forma a partir do piruvato e que, num determinado momento, est em excesso relativamente s necessidades energticas da clula no pode ser oxidada a CO2 sendo convertida em cidos gordos no citosol das clulas. A acetil-CoA no pode sair da Pgina 2 de 3

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mitocndria directamente porque no existe na membrana interna da mitocndria um transportador adequado para esta substncia. Contudo, existe um mecanismo complexo que permite o transporte de acetil-CoA para o citosol. Este mecanismo envolve as actividades catalticas da (1) sntase do citrato (oxalacetato + acetil-CoA + H2O citrato + CoA) dentro da mitocndria, (2) de um transportador para o citrato e, (3) j no citosol, da lase do citrato-ATP (ATP + citrato + CoA oxalacetato + ADP + Pi + acetil-CoA). O somatrio das aces combinadas das duas enzimas e do transportador de citrato mostra que o transporte de acetil-CoA ocorre custa do gasto de uma ligao rica em energia do ATP: acetil-CoA (mit.) + oxalacetato (mit.) + ATP + H2O acetil-CoA (cit.) + oxalacetato (cit.) + ADP + Pi.

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