Brevet Le chlorite chimiquement stabilisé (MMS) contre le VIH :
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graphiques et la première page merci de
regarder le document original).
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RÉSUMÉ DU BREVET
La présente invention concerne l'utilisation
d'une matrice de chlorite chimiquement
stabilisée pour le traitement parentéral des
infections par le VIH. La matrice de chlorite
est une solution isotonique contenant 5 à
100 mMol CIO par litre de solution.
UTILISATION D'UNE MATRICE DE CHLORITE
CHIMIQUEMENT STABILISEE POUR LE
TRAITEMENT PARENTERE DES INFECTIONS VIH
CONTEXTE DE L'INVENTION
1. Domaine de l'invention
La présente invention concerne la nouvelle
utilisation d'une matrice de chlorite
chimiquement stabilisée pour le traitement
parentéral des infections à VIH.
2. Description de l'art apparenté Les infections
à VIH, parmi lesquelles il faut comprendre les
différentes formes subsidiaires du virus VIH,
sont en constante augmentation. Malgré les
efforts intensifs déployés pour lutter contre
les infections à VIH, il n'a pas été possible
jusqu'à présent de trouver un contre-agent
absolument efficace. Les agents connus
jusqu'à présent, par exemple l'AZT ou le DDI,
agissent en particulier sur les cellules infectées
par le virus, qui sont ainsi détruites, de sorte
que l'infection ne progresse pas. Mais ces
agents connus n'ont aucun effet sur les virus
libérés dans la circulation sanguine par la
désintégration de ces cellules, qui entraînent
la propagation et l'infection d'autres cellules.
Sarin et al, New England Journal of Medicine,
313, 1416/1985, divulgue un traitement de
cultures cellulaires de virus HTLV III-(HIV) in
vitro avec une solution diluée 200 fois de
0,23% de chlorite de sodium et 1,26% d'acide
lactique. Le traitement de Sarin et al. a
conduit à une inactivation des virus.
U.S. Pat. 5,019,402 divulgue une solution
contenant du dioxyde de chlore ou un
mélange libérant du dioxyde de chlore d'un
chlorite, d'un tampon faiblement acide et d'un
saccharide activé par la chaleur, qui peut être
utilisée pour la stérilisation des composants
sanguins stockés à l'exception de ceux qui
contiennent des globules rouges, c'est-à-dire
des leucocytes, des plaquettes sanguines, des
facteurs de coagulation et des globulines.
Dans le sang entier, une action désinfectante
correspondante ne se produit pas,
probablement parce que les globules rouges
sont attaqués plus rapidement par le dioxyde
de chlore que les micro-organismes étudiés.
Par conséquent, cet agent n'est pas non plus
adapté à une administration parentérale.
DE-OS 32 13 389, U.S. Pat. No. 4,507,285 et
U.S. Pat. No. 4,296,103, décrivent des
matrices de chlorite chimiquement stabilisées
qui conviennent à un usage thérapeutique
externe ou oral. Outre diverses infections
bactériennes, le traitement externe
d'infections virales, telles que l'herpès simplex
et le zona, est jugé possible de cette manière,
mais une administration intraveineuse pour le
traitement des infections par le VIH n'est pas
possible.
L'OEB 200 155 décrit en outre des solutions
d'une matrice de chlorite chimiquement
 Brevet Le chlorite chimiquement stabilisé (MMS) contre le VIH :
stabilisée pour une administration
intraveineuse et périopératoire. L'agent s'est
révélé efficace dans le traitement des
infections au Candida albicans. D'après EPO
200
157, il est connu d'utiliser de telles matrices
de chlorite stabilisées pour une administration
intraveineuse et/ou locale dans les cas d'états
infectieux provoqués par des parasites, des
champignons, des bactéries, des virus et/ou
des mycoplastes. L'action s'explique par une
stimulation des phagocytes qui est obtenue
par une seule administration efficace du
complexe de chlorite peu après l'infection. La
lutte contre les infections virales n'est pas
décrite dans cette publication et, en raison du
principe d'action, ne semble pas possible.
RÉSUMÉ DE L'INVENTION
L'objet de la présente invention est de fournir
un agent qui inactive les virus HIV dans le sang
sans avoir d'influence néfaste sur le sang et
sur le corps du patient.
Conformément à la présente invention, il est
proposé une méthode d'utilisation d'une
matrice de chlorite chimiquement stabilisée
pour le traitement parentéral des infections à
VIH, consistant en une solution isotonique
contenant 5 à 100 mMol, et de préférence 50
à 80 mMol de CIO par litre de solution. La
solution peut être utilisée comme une
solution d'injection ou, après dilution, comme
une solution de perfusion.
Conformément à la présente invention, il
existe également une méthode de traitement
parentéral des infections par le VIH
comprenant l'administration d'une quantité
efficace d'inhibition d'une solution de matrice
de chlorite comprenant une solution
isotonique comprenant 5 à 100 mMol de CIO
par litre de solution. La méthode de la
présente invention provoque une inhibition de
l'infection des cellules non endommagées
ainsi qu'une stimulation des cellules T et des
cellules tueuses naturelles (NK). D'autres
objets, caractéristiques et avantages de la
présente invention apparaîtront dans la
description détaillée des modes de réalisation
préférés qui suivent.
BRÈVE DESCRIPTION DES DESSINS
Les figures 1 et 1a illustrent la relation entre la
concentration de la solution de matrice de
chlorite et l'infectivité du VIH-I ou du VIH-II lié
aux cellules.
Les figures 2 et 2a illustrent la relation entre
les concentrations de la solution de matrice de
chlorite et l'infectivité du VIH-I ou du VIH-II
non lié aux cellules.
La figure 3 illustre les résultats de l'exemple 3
dans lequel 4 patients infectés par le VIH-I ont
été traités avec des solutions de matrice de
chlorite sur une période de temps prolongée.
La figure 4 illustre les résultats de l'exemple 4
montrant la relation entre le nombre de
cellules T et la période de traitement avec les
solutions de matrice de chlorite de l'invention.
La FIG. 5 illustre les résultats de l'exemple 4
montrant la relation entre le nombre de
cellules NK et la période de traitement avec
une solution de matrice de chlorite de la
présente invention.
MODES DE RÉALISATION PRÉFÉRÉS
Les solutions de chlorite de sodium et de
potassium sont connues pour être
disproportionnées dans une solution acide
avec la formation de dioxyde de chlore et de
chlorure. Les chlorites et le dioxyde de chlore
formés sont connus pour être des
microbicides efficaces pour la stérilisation des
surfaces et des solutions. Cependant,
l'utilisation de solutions de chlorite pour
l'administration parentérale n'était
généralement pas considérée comme possible
en raison de leur extraordinaire toxicité.
Il est donc tout à fait inattendu qu'avec une
administration intraveineuse d'une matrice de
chlorite appropriée à la concentration
adéquate, les virus HIV puissent être
directement combattus dans le sang, comme
le démontre la diminution rapide et forte des
virus détectables dans le sang. Les solutions
de matrice de chlorite de la présente
invention ne présentent pas non plus d'effets
indésirables tels que des dommages
cytotoxiques sévères et autres, typiquement
associés aux produits chimiques hautement
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toxiques qui sont administrés par voie
intraveineuse. Les solutions de matrice de
chlorite de la présente invention sont en outre
capables d'inactiver le virus VIH pour inhiber
ainsi l'infection des cellules non
endommagées. La concentration du virus VIH
dans le sérum est typiquement déterminée de
manière connue par couplage avec des
anticorps contre l'antigène p24 spécifique du
virus. (S. Mihm et al., (1991) Aids 5, 497-503)
L'action inhibitrice du virus de la matrice de
chlorite semble dépendre de la concentration.
Une inhibition significative d'une nouvelle
infection est trouvée in Vitro même à des
concentrations de 5 umol/l, alors qu'une
concentration de 150 umol/l entraîne une
inhibition pratiquement complète. Cependant,
des concentrations supérieures à 100 umol/l
peuvent, sur une période prolongée, entraîner
des dommages cytotoxiques. Ainsi, des
concentrations de 10 à 100, de préférence
d'environ 40 à 80 et surtout de 50 umol/l sont
préférées.
Les solutions matricielles de chlorite de la
présente invention sont dosées in vivo en
fonction du poids corporel, de sorte que, en
raison de la dégradation continue de la
matière active dans le sang, l'agent doit être
dosé en fonction du poids corporel. dans le
sang, l'agent doit être administré à nouveau à
intervalles réguliers. L'homme de l'art est
capable de faire varier les concentrations des
solutions inhibitrices de virus en fonction des
données in vitro disponibles et du poids
corporel. Ainsi, tout au long de la spécification
et des revendications, l'expression "une
quantité efficace pour l'inhibition" sera
connue de l'homme du métier pour signifier
une quantité de solution qui, lorsqu'elle est
administrée in vivo à des sujets de poids
variable, entraîne une inhibition du virus.
Typiquement, une quantité efficace
d'inhibition de la solution de matrice de
chlorite variera entre environ 0,1 ml/kg à
environ 1,5 ml/kg, de préférence, environ 0,5
ml/kg de poids corporel et à une
concentration d'environ 40 à environ 80 mMol
CIO par litre, de préférence environ 60 mMol
CIO par litre, respectivement.
Les exemples suivants servent à illustrer des
modes de réalisation particulièrement
préférés de la présente invention. L'homme
du métier reconnaît que diverses
modifications peuvent être apportées à la
description qui précède et aux exemples
suivants sans s'écarter de l'esprit et de la
portée de l'invention.
EXEMPLE 1.
La matrice de chlorite, désignée par WF10
dans les expériences suivantes, a été produite
conformément à l'exemple 1 du brevet U.S.
Pat. No. 4,507,285 qui est incorporé par
référence par l'oxydation d'une solution de
chlorite avec de l'hypochlorite, la réaction
avec du perborate ou du percarbonate et
dilution avec une solution isotonique de
chlorure de sodium ou un milieu nutritif
approprié aux concentrations données dans
les exemples suivants.
Expériences in vitro
Afin d'étudier l'efficacité de WF10 sur la
multiplication du VIH dans des lignées
cellulaires humaines, l'infectiosité (TCID50),
l'activité de la transcriptase inverse (RT) et la
formation de l'antigène p24 du VIH ont été
étudiées.
Des cellules de lymphome T humain molt-4,
clone-8 ("molt 4/8 cells") (disponibles auprès
de l'ATCC, Rockville, U.S.A.) infectées en
permanence par le VIH-1 ont été cultivées
dans un milieu RPMI-1640 (disponible auprès
de Gibco Ltd., GB) mélangé à du sérum de
veau fœtal à 10%, de l'acide L-glutamique et
des antibiotiques. La lignée cellulaire de
monocytes macrophages humains U937
(disponible auprès de l'ATCC, Rockville, U.S.A.)
et les cellules sanguines mononucléaires
primaires (PWMC), qui ont été infectées de
façon permanente par le VIH-1, ont été
étudiées de la même manière.
Pour mesurer l'activité de la transcriptase
inverse du VIH, 1 ml du surnageant de la
culture a été analysé à l'aide d'un système
standard de recherche enzymatique qui
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repose sur l'incorporation de nucléotides
marqués par radioactivité. Cette
détermination a donné une indication de
l'effet possible de la substance sur la
propagation de l'infection par le VIH.
été réalisé, mais les cellules molles 4/8 ont été
infectées par le VIH-II. Les résultats sont
présentés dans les FIGS.
1 et 1a.

La concentration de l'antigène p24 du noyau

du VIH a été étudiée dans le surnageant par
des techniques Elisa avec un kit disponible
dans le commerce (Abbot Labs, Chicago,
U.S.A.) qui contient un standard interne. Les
concentrations indiquées dans les tableaux
suivants sont en ng/ml de liquide de culture.
Dans le test, aucune différenciation n'a été
faite entre l'antigène p24 et les virus VIH
infectieux ou inactivés.
L'infectivité du VIH (TCID50) a été déterminée
en mettant en contact la solution contenant le D'après les figures 1 et 1a des dessins
VIH avec les cellules MT4 hautement sensibles annexés, on peut déduire que, pour les
(American Tissue Collection Rockville, U.S.A.) concentrations étudiées de 5,7 à 53 umol, la
qui sont tuées en peu de temps par le VIH-1 TCID50/ml n'est pas significativement
infectieux (S. G. Norley, 1990) I. Immunol. 145, différente du témoin. Par conséquent, WF10 a
1700-1705). L'infectivité a été démontrée par peu ou pas d'effet marqué sur le VIH-I ou le
la croissance restante de la colonie cellulaire. VIH-II lié aux cellules.
De plus, l'effet cytopathique peut être
déterminé par le taux d'incorporation de EXEMPLE 2
l’H-thymidine puisque les cellules tuées ne
peuvent plus incorporer de thymidine dans Infectivité du VIH non lié après incubation
leur ADN. Ainsi, à partir de la force de avec WF10 Afin d'étudier la possible
l'incorporation de la thymidine ou de la inactivation par WF10 des particules de VIH
radioactivité ainsi provoquée par l'ADN libres, les dilutions de WF10 et les solutions de
cellulaire séparé de la solution, on peut contrôle indiquées dans le tableau 2 suivant
déduire la quantité de cellules survivantes. ont été incubées avec une solution mère de
VIH correspondante pendant les temps
Les personnes compétentes dans ce domaine indiqués. Les résultats obtenus sont présentés
connaissent bien ces techniques et les dans les figures 2 et 2a des dessins
méthodes employées ci-dessus pour mesurer d'accompagnement. Il est démontré que le
l'infectivité, la concentration de l'antigène p24 WF10 inhibe efficacement les virus VIH à la
et l'activité de la transcriptase inverse du VIH concentration étudiée.
sont décrites de manière adéquate dans la
littérature scientifique.

Multiplication du VIH en présence de WF10.

Environ 2x10 cellules molt 4/8 infectées en

permanence par le VIH-I ont été incubées sur
une plaque de culture de 24 tasses dans 2 ml
de milieu de culture pendant 24 heures en
présence de différentes concentrations de
WF10, avec et sans ajout d'hémoglobine (voir
le tableau 1 ci-dessous). Le même protocole a
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EXEMPLE 3
Nouvelle infection de cellules par le VIH en
présence de WF10
Dans une autre expérience, on a déterminé le
degré de propagation du virus dans des
cultures cellulaires après infection par le VIH.
Des cultures de molt 4/8 ont été infectées
avec la solution mère de VIH-I en diverses
dilutions. Dans chaque cas, le milieu de
culture a été changé après deux jours et
l'infectivité a été déterminée dans le
surnageant avec des cellules MT4 comme
décrit ci-dessus dans l'exemple 1. Dans la
mesure où la solution contenait un matériau
actif (WF10, AZT ou des combinaisons de DDI),
ceux-ci ont été, dans le cas de l'échange, à
chaque fois de nouveau ajoutés au milieu de
culture à la concentration appropriée.
Expériences in vivo
Les agents utilisés selon la présente invention
ont été testés sur un petit groupe de patients
atteints d'une infection aiguë par le VIH. A cet
effet, environ 0,5 ml/kg de poids corporel de
WF10 avec une concentration de 60 mMol/l
de CIO a été injecté aux patients, dans chaque
cas pendant cinq jours successifs d'une
semaine, suivis d'une pause de deux
semaines. La concentration d'antigène p24 a
ensuite été déterminée et le traitement a été
poursuivi une à trois fois dans la même
semaine. poursuivi une à trois fois dans le
même cycle. Les résultats obtenus sont
reproduits dans le tableau 3 suivant.
L'influence sur le niveau sérique de l'antigène
p24 dans le cas de 4 patients infectés par le
VIH-I qui ont été traités de manière
correspondante avec WF10 est indiquée dans
le tableau 3 suivant, ainsi que dans la figure 3
des dessins d'accompagnement, par rapport à
la valeur avant le traitement, qui est
considérée comme étant de 100%. Ces
patients sont étiquetés LS, DA, HB et CR, LS
étant le seul patient à avoir présenté une
augmentation de l'antigène p24. On constate
que, dans tous les autres cas, une diminution
très rapide et forte est observée, qui se
poursuit également pendant la période
relativement longue du traitement. Le patient
LS est une exception : à l'origine, ce patient
avait un titre très bas d'AG p24, le titre a
d'abord augmenté et seulement après le
30ème jour, il a de nouveau diminué de
manière significative. Comme le titre de
l'antigène p24 est une mesure de la
concentration des virus dans le sérum, on
peut supposer, à partir de ce résultat, que
WF10 attaque et inactive directement les virus
non liés et qu'il est donc capable d'inhiber la
nouvelle infection des cellules non encore
endommagées.
EXEMPLE 4
La concentration des cellules T et des cellules
NK, qui est importante pour le système de
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défense immunitaire du corps, a été
déterminée pendant le traitement des 4
patients ci-dessus dans l'exemple 3 avec
WF10. Il a été constaté que le nombre de
cellules importantes pour la défense
immunitaire commence à augmenter après
une période de traitement de neuf semaines.
Par conséquent, une immunisation à long
terme peut être stimulée par le traitement
avec WF10. La baisse à court terme de la
concentration de l'antigène p24 observée
dans le cas de l'administration de WF10 ne
peut cependant pas être expliquée sur la base
de ce mécanisme, ce qui est une indication
supplémentaire de l'existence d'une action
d'échange directe de WF10 avec les virus
libres, non liés. Les résultats expérimentaux
obtenus sont donnés aux FIGS. 4 et 5 des
dessins joints. Ces résultats montrent que les
cellules T et NK ont été stimulées après un
traitement prolongé avec la solution de
matrice de chlorite de la présente invention.
Ce qui est revendiqué est :
1. Procédé de traitement par voie parentérale
des infections à VIH, comprenant
l'administration à un sujet nécessitant un tel
traitement d'une quantité efficace du point de
vue de l'inhibition d'une matrice de chlorite
chimiquement stabilisée comprenant une
solution isotonique contenant environ 5 à
environ 100 mMol de CIO par litre de solution
isotonique.
2. Procédé selon la revendication 1, dans
lequel la solution contient environ 50 à
environ 80 mMol CIO par litre de solution
isotonique.
3. Méthode selon la revendication 1, dans
laquelle la matrice de chlorite chimiquement
stabilisée est administrée sous forme de
solution d'injection ou de solution de
perfusion après dilution avec de l'Eau.
4. Méthode selon la revendication 2, dans
laquelle la matrice de chlorite chimiquement
stabilisée est administrée comme une solution
d'injection ou une solution de perfusion après
dilution avec de l'eau.
5. Procédé selon la revendication 1, dans
lequel ladite matrice de chlorite est produite
par oxydation d'une solution de chlorite avec
de l'hypochlorite et réaction avec du
perborate.
6. Méthode selon la revendication 2, dans
laquelle ladite matrice de chlorite est produite
par oxydation d'une solution de chlorite avec
de l'hypochlorite et réaction avec du
percarbonate.
7. Procédé selon la revendication 1, dans
lequel la solution contient environ 50 mMol
CIO par litre de solution isotonique.
8. Méthode selon la revendication 1, dans
laquelle ladite matrice de chlorite est
administrée en une quantité d'environ 0,1 à
environ 1,5
ml/kg de poids corporel avec une
concentration d'environ 40 à environ 80 mMol
ClO par litre de solution isotonique.
9. Procédé selon la revendication 8, dans
lequel ladite matrice de chlorite est
administrée en une quantité d'environ 0,5
ml/kg de poids corporel avec une
concentration d'environ 60 mMol ClO par litre
de solution isotonique.
10. Méthode selon la revendication 1, dans
laquelle le virus VIH non lié présent chez le
sujet est inactivé par le traitement, inhibant
ainsi l'infection des cellules non
endommagées.
11. Méthode selon la revendication 1, dans
laquelle la concentration des cellules T et des
cellules NK est augmentée après
l'administration de la matrice de chlorite de
sodium.
12. Méthode selon la revendication 5, dans
laquelle après réaction avec le perborate, la
solution est diluée avec une solution
isotonique de chlorure de sodium.
13. Méthode selon la revendication 6, dans
laquelle après la réaction avec le
 Brevet Le chlorite chimiquement stabilisé (MMS) contre le VIH :

percarbonate, la solution est diluée avec une

solution isotonique de chlorure de sodium.

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