Cours Exploration Du Diabéte Ecole de Santé

Le diabète sucré
partie I
ASMA BEN ABDELAZIZ
AHU EN BIOCHIMIE
CHU SAHLOUL
Introduction
❖Maladie chronique dont la prévalence est en croissance
rapide
❖Cause majeure de cécité, d’IR, d’AVC, d’accidents
cardiaques et d’amputation des membres inférieurs
❖Impact économique lourd pour le sujet diabétique et sa
famille mais aussi pour les systèmes de santé
www.diabetesatlas.org Introduction * Chiffre estimé
EN TUNISIE (2021 )*
A L’ÉCHELLE MONDIALE (2021)*
6868
869 400
décès
personnes
Attribué au
diabétique
( diabète
20-79ans)
( 20-79ans)
Ogurtsova, K., et al. (2022). "IDF diabetes Atlas: Global estimates of undiagnosed diabetes in adults for 2021." Diabetes Research and Clinical Practice 183: 109118
Objectifs
1. Définir le diabète sucré
2. Connaitre les différents types de diabètes sucrés
3. Comprendre les mécanismes physiopathologique du diabète
4. Identifier les paramètres d’exploration du diabète et connaitre leurs intérêts
5. Maitriser l’aspect pré-analytique et analytique des différents marqueurs

biologiques impliqués dans le diagnostic du DS.
6. Connaitre les critères du diagnostic du diabète

Définition du diabète
Augmentation anormale et chronique du taux de glucose
dans le sang liée à une déficience :
- soit de l'action de l'insuline (insulinorésistance)
- soit de la sécrétion d'insuline (insulinopénie)
- soit des deux
ADA / OMS 1999

Classification du diabète: OMS 2019
1- Le diabète de type 1
10 à 15%
Destruction des cellules bêta du pancréas conduisant à une carence absolue en
insuline
2 sous types: auto-immun (90%) idiopathique (10%)
Sujet jeune
Poids normal
Début brutal
2- Le diabète de type 2
80-85%
Associe, en proportion variable:
- déficit de la sécrétion de l'insuline
- et résistance à l'action de l'insuline
Début progressif
Age > 40 ans, en surpoids, ATCD familiaux
3- Hyperglycémie diagnostiqué au cours de la grossesse
Intolérance au glucose qui se manifeste ou qu’on dépiste pour la première fois
pendant la grossesse.
1. Diabète gestationnel
2. Diabètes diagnostiqués au cours de la grossesse
4- Les formes hybrides du diabète :
1. Le diabète auto-immun de développement lent
2. Diabète de type 2 cétosique
5-Autres types spécifiques du diabète et les formes non classés
Peu courants
Associés à l’usage de médicaments: corticoïdes, immunosuppresseurs,
neuroleptiques,…
Endocriniens / hypercorticisme, hyperthyroïdies…
Physiopathologie
Malgré que les entrées et sorties du glucose sont différentes à chaque instant, la
glycémie varie dans des limites relativement étroites chez le sujet normal grâce à
une régulation précise et efficace de la glycémie :
Insuline
Prédisposition génétique Facteurs déclenchants
Diabète type 1
Destruction des ilots de langerhans pancréatique
Insulinopénie
HYPERGLYCÉMIE Carence Intra

cellulaire en glucose
Mobilisation de la voie la
protéolyse/ Lipolyse +++
Prédisposition génétique Facteurs déclenchants
Diabète type 2
Obésité
Insulino résistance
HYPERGLYCÉMIE
À long terme Insulinopénie

Exploration du diabète
Pourquoi
Qui ?
Paramètres ?
Comment ?
Pourquoi
Qui ?
Paramètres ?
Comment ?
:Pourquoi
◦ Diagnostic précis
◦ Suivi de l’évolution du diabète au cours du temps
◦ Découverte précoce des complications du diabétes
◦ Femme enceinte : Prévention des complications du

diabète gestationnelle chez le nouveau né
(macrosomie, cardiomyopathie hypertrophique,
Hypoglycémie)
Pourquoi
Qui ?
Paramètres ?
Comment ?
Dépistage systématique du diabète
selon l’OMS
-Tout sujet de plus de 45 ans :une fois tous les 3 ans si tous les
résultats sont normaux
-Dès l’âge de 30 à 35 ans: Descendants de patients DT2
-Obésité
-HTA ou dyslipoprotéinémie
-Antécédent de diabète gestationnel ou d’enfant de poids de
naissance > à 4 kg
Dépistage du diabète chez la
femme enceinte
Pourquoi
Qui ?
Paramètres ?
Comment ?
Les paramètres de l’exploration du
diabète
1. Dosage de la glycémie
Glycémie = taux de glucose dans le sang (g/l ou mmol/l)
Analyse couramment prescrite dans le cadre d’un bilan systématique de:

- Dépistage
- Diagnostic d’un diabète
- Surveillance
Glycémie = paramètre d’urgence +++

1.1. Etape pré analytique
Conditions : Sujet à jeun depuis au moins 8h au repos
Nature du prélèvement :
Sang total Sang capillaire Plasma
Gaz du sang Glucomètre Origine veineuse

+++ ou artérielle
➢Glycémie : Plasma>sang total
➢ Artériel>capillaire>veineux
1.1. Etape pré analytique :
Glycémie sur plasma
Prélèvement sur tube spécial: mélange de
- Fluorure de Na+ (Inhibiteur enzymes glycolyse)
- Oxalate de potassium (anticoagulant)
Mélanger
immédiatement le
sang par retournement
1.1. Etape pré analytique :
Glycémie sur plasma :
En l’absence d’inhibiteur des enzymes de la glycolyse :
➢ Tube héparinate de lithium :
séparer le plasma dans la demi heure suivant le prélèvement

ou bien
garder le prélèvement dans la glace ( inhibition des enzymes )
1.2. Techniques de dosage
Techniques enzymatiques
➢ Méthode à la glucose oxydase
1 ère méthode : Par électrode de mesure de la consommation d’O2
Glucose oxydase
Glucose + H2O+ O2 Acide gluconique + H2O2
1.2. Techniques de dosage
Techniques enzymatiques
➢ Méthode à la glucose oxydase
Glucose oxydase
Glucose + H2O+ O2 Acide gluconique + H2O2
2éme méthode Par la mesure de la concentration de peroxyde d’hydrogène par

l’intermédiaire d’une réaction faisant intervenir une peroxydase et un
chromogène donneur d’hydrogène ( Réaction de Trinder)
➢ Méthode à la glucose déshydrogénase
Glucose déshydrogénase
Glucose + NAD+ Gluconolactone + NADH, H+
On suit la cinétique d’apparition du NADH, H+ à 340 nm qui rend compte de la

quantité de glucose présente dans l’échantillon
➢ Méthode à l’hexokinase
La plus spécifique = méthode de référence
Hexokinase
Glucose + ATP G6P + ADP

G6P déshydrogénase
G6P + NADP+ 6 phosphogluconate + NADPH, H+
On suit à 340 nm la cinétique d’apparition du NADPH, H+

1.3. Valeurs normales et variations physiologiques
10 à 60 ans: glycémie: 3,9 à 5,6 mmol/l (0,7 à 1 g/l)
Elle est de:

- moins de 20% de 1 mois à 4 ans
- moins de 5 à 10% de 4 à 10 ans
- plus de 10% après 60 ans
Plus élevée chez l’homme que chez la femme
Grossesse: baisse du glucose plasmatique parallèlement à l’augmentation de la

sécrétion d’insuline
Femme enceinte: glycémie doit être  5,1 mmol/l (0,92 g/l)
L’activité physique induit une  de la glycémie chez l’homme sain comme chez le
diabétique
Affections pancréatiques et endocriniennes
* Pancréatites aigues et chroniques
* Cancers du pancréas
* Hypercorticismes
* Hyperthyroïdies
Hyperglycémies iatrogènes
* Traitement par les corticoïdes
* Traitement par les immunosuppresseurs
* Traitement par les neuroleptiques
2. Glycosurie
= taux de glucose dans les urines (g/l ou g/24 h; mmol/l ou mmol/24h)
3.1. Indications
Dépistage de masse du diabète
Auto surveillance d’un diabétique pour contrôler le niveau de sa glycémie
Glycosurie: de + en + remplacée par glycémie capillaire

2. Glycosurie
3.2. Prélèvement
Sur échantillon: urines fraiches du 2ème jet (faux + si
stagnation des urines dans la vessie)
2. Glycosurie
3.3. Dosage
➢ Semi-quantitatif
Bandelettes réactives à la glucose oxydase/peroxydase
Les réactifs imprègnent une bandelette de papier filtre qu’il suffit de tremper
dans l’urine
Surveiller au bout de quelques secondes l’apparition de coloration
Comparer avec une échelle colorimétrique dépistage semi-quantitatif

2. Glycosurie
3.1. Dosage
➢ Semi-quantitatif
Faux positifs: dakin, eau de javel
Faux négatifs: contaminants bactériens

2. Glycosurie
3.1. Dosage
➢ Quantitatif
Si glycosurie positive à la bandelette
Glycémie  10 mmol/l (1,8 g/l)
Il est nécessaire de quantifier la glycosurie
Mêmes méthodes de dosage que pour la glycémie

2. Glycosurie
3.4. Interprétation
Normalement glycosurie nulle
Présence de glycosurie
glycémie  10 mmol/l (1,8 g/l)
Diabète mal équilibré
Le traitement demande une adaptation

2. Glycosurie
3.5. Causes d’erreurs
L’interprétation se heurte parfois à quelques difficultés:
En cas de seuil rénal bas (glycosurie + et glycémie N)
*Transitoire: grossesse
*Permanent: diabète rénal
En cas de seuil rénal élevé (glycosurie – et glycémie 2g/l)
*Sujet âgé
*Insuffisance rénale
3- Les tests dynamiques
Epreuves dynamiques: Epreuves d’hyperglycémie provoquée:
Glycémie Post prandiale
Hyperglycémie provoquée par voie orale HGPO
Glycémie post prandiale GPP
Dosage de la glycémie pratiqué 2 heures après un
repas ordinaire ou un repas d’épreuve
spécialement riche en glucides.
Renseigne sur l’adaptation de l’organisme à l’apport

glucidique dans les conditions physiologiques.
Sujet normal: GPP < 1,40 g/l (8 mmoles/l)

Hyperglycémie provoquée par
voie orale: HGPO
Apprécier la tolérance glucidique en suivant les variations

de la glycémie après une charge de glucose administrée par
voie orale
HGPO
Précautions:
- à jeun
- apport alimentaire et activité physique normaux les 3
jours qui précèdent.
- absence de maladie aiguë les 2 semaines
précédentes,
- arrêt des médicaments qui influencent la tolérance au
glucose depuis au moins 3 jours (corticoïdes,…)
HGPO
Déroulement de l’épreuve:
L’OMS a définit plusieurs critères afin d’en assurer sa
standardisation:
1- Doser la glycémie avant la charge T0
2 - Administrer en moins de 5mn une charge de glucose
de 75 g dissoute dans 200 à 300 ml d’eau (1,75 g/kg: enfant
sans dépasser 75 g)
3- Doser la glycémie 2h après
4-HBA1C
Résulte de la glycation= fixation non enzymatique d’un
résidu glucidique sur les fractions N terminal de la chaîne
béta de l’Hb.
HbA1c est la fraction où l’Hb est liée au glucose.
Sujet sain: HbA1c <5,7% de l’Hb totale

Plus le taux de sucre dans le sang plus la formation
de l’hémoglobine glyquée
Index rétrospectif et cumulatif de l'équilibre
glycémique au cours des 6 à 8 semaines précédant
le prélèvement
4-HBA1C
oConditions du prélèvement :
o Jeune non exigé => aucune influence de l’état prandiale
o Important à signaler :
o Changement de traitement
o Tout état physiopathologique modifiant la durée de vie des
globules rouges :
o Présence d’une hémoglobinose
o Présence d’une atteinte des globules rouges (exp: sphérocytose)
o Présence d’une anémie sévère
o Présence d’un antécédant récent d’hémorragie ou de transfusion
o Nature du prélèvement :
o Sang total sur anti coagulant EDTA,K3 => meilleur stabilité
4-HBA1C
Les dosages d’HbA1c:
Méthodes chromatographiques : chromatographie liquide haute
pression échangeuse d’ions ou d’affinité
Méthode électrophorétique : Capillarys Sebia
Méthodes immunochimiques : immuno-turbidimétrie
Une hémolyse des GR doit est réalisée avant le dosage (manuelle

ou automatisée)
Expression du résultat: standardisé soit en mmol/mol ( SI)

ou en (%) (IFCC)
4-HBA1C
Attention: situations cliniques particulières
Pourquoi
Qui ?
Paramètres ?
Comment ?
Comment ?
Glycémie HGPO GPP
HBA1C Glucosurie
Diagnostic ? / Suivi ? ………

Critères du diagnostic du diabète
vérifiée
à2
reprises
gestationnel
Le diabète sucré
partie II
ASMA BEN ABDELAZIZ
AHU EN BIOCHIMIE
CHU SAHLOUL
Objectifs
1. Identifier les paramètres du suivi du diabète , connaitre leurs intérêts et la
fréquence de leurs prescriptions
2. Maitriser l’aspect pré-analytique et analytique des différents marqueurs

biologiques impliqués dans le suivi du DS.
3. Connaitre les complications aigues et chroniques du diabète

Surveillance du diabète sucré
Surveillance du Surveillance des

traitement complications
• HbA1C
• Protéines
glyquées
• HbA1C
• Protéines
glyquées
Surveillance du traitement:
HbA1c
Pourquoi
A quelle fréquence?
Quelle est la valeur cible ?

HbA1c
Pourquoi

Pourquoi
? HbA1c: Un marqueur de suivi de diabète
2008
Etude ADAG
507 Sujets diabétiques
Corrélation entre les

chiffres de HbA1c et la
glycémie moyenne*
Glycémie moyenne (mg/dl) =28.7X HbA1c-46.7 (
R2 0.84, P 0.0001)
*Glycémie moyenne= Glycémie obtenue à partir d ‘une combinaison d’un suivi continue de la glycémie et les résultats d ‘automesure
HbA1c
Pourquoi

A quelle
fréquence?
HbA1c: Un marqueur de suivi dediabète
2fois/an 4fois/an
• diabétique •Diabétique
équilibré non équilibré
• Changement
du
traitement
HbA1c
Pourquoi

HbA1c
La valeur cible chez la majorité des diabétiques
HbA1c <=7%
4-HBA1C (limites)
Attention: situations cliniques particulières
• HbA1C
• Protéines
glyquées
Protéines glyquées: fructosamines
La condensation du glucose avec les groupements aminés

des protéines se fait selon un mécanisme identique à
celui de l’hémoglobine ( glycosylation non enzymatique ).
La glycation des protéines est une réaction générale
affectant toutes les protéines de l’organisme.
Elle est directement proportionnelle à la quantité
du glucose circulant
Protéines glyquées: fructosamines
Situations qui peuvent influencer le dosage de l’HbA1c.
=> Fructosamines : équilibre glycémique les 2 à 3 semaines précédentes.
chez la femme enceinte diabétique chez qui une adaptation du traitement
doit être rapide
Le dosage est effectué sur sérum ou plasma et réalisé par méthodes

spectrophotométriques (colorimétriques) ou enzymatiques.
Valeurs de référence: 165 – 285 µmol/l

objectif : < 350 µmol/l
• HbA1C • Aigues
• Protéines • Chroniques
glyquées
Les complications du diabète
❖Les complications aigues :
• Hyperglycémie : (traitement ne répondant pas aux besoins du patient)
avec acido cétose : état de cétose
sans acido cétose « coma hyperosmolaire »
• Hypoglycémie : (excès de traitement )
❖Les complications chroniques :

▪ Microangiopathies : athérosclérose , Infarctus du myocarde
▪ Microangiopathies : néphropathie diabétique , rétinopathie diabétique

▪ Microangiopathies : athérosclérose , Infarctus du myocarde
Les diabétiques types 1 satisfaisant au moins un de ces conditions :
• Nouvellement diagnostiqué
• Non observant ( ne prenant pas l’insuline)
• infection sévère
Insulinopénie
HYPERGLYCÉMIE Carence Intra

cellulaire en glucose
État de acido cétose :
présence des corps
cétoniques dans le sang
Recherche de corps cétoniques
Corps cétoniques :
◦ Acétoacétate
◦ Acétone
◦ β-hydroxybutyrate
- Bandelette urinaire :
Principe :
Des bandelettes de papier chargées de nitroprussiate et d’ammonium :
Cette méthode révèle uniquement la présence d’ acétoacétate et d’acétone
Attention patients de réanimation en état de choc :
Sous l’effet de l’hypoxie l’acétoacétate est réduit en β-hydroxybutyrate
=> faux négatif

▪ Macroangiopathies : athérosclérose , Infarctus du myocarde
Coma hyperosmolaire
•Diabétique type 2
•Hyperglycémie importante : 35-50 mmol/L
•Signes de déshydratation
•Osmolarité augmentée

Hypoglycémie
Glycémie <3,3 mmol/L

Macro angiopathie :
bilan lipidique : une fois par an ( minimum )
Valeurs cibles : (ADA)
LDL cholesterol < 2.60 mmol/l
HDL cholesterol >1.02 mmol/l
Triglyceride <1.7 mmol/l

Néphropathie diabétique
Altération de la paroi glomérulaire ou des pressions intra-glomérulaire
Début insidieux, d’où l’importance du dépistage et du contrôle régulier

Microalbuminurie
Microalbuminurie : dosage de l’albumine au niveau des urines
Prélèvement :
•Urine de 24H
•Echantillon ( dosage simultané de la créatinine urinaire )
Dosage :
• Dosage réalisé par des méthodes immunologiques: immuno-turbidimétrie,
néphélémétrie…
Microalbuminurie
•Valeurs usuelles :
Microalbuminurie < 30 mg/24h
ou
Microalbuminurie/ Créatininurie <3mg/mmol
•Microalbuminurie modérée :
Microalbuminurie 30-300 mg/24h
ou
Microalbuminurie/ Créatininurie 3 – 30mg/mmol
•Microalbuminurie sévère :
Microalbuminurie >300 mg/24h
ou
Microalbuminurie/ Créatininurie >30mg/mmol
Microalbuminurie
Quand rechercher ?
Une fois par an :
◦ Diabète de type 1 depuis ≥ 5 ans
◦ diabète de type 2
Deux fois par an :
◦ Diabète avec microalbuminurie > 300 mg/24h
◦ => suivi de traitement
Merci pour votre attention

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Le diabète sucré

5. Maitriser l’aspect pré-analytique et analytique des différents marqueurs

6. Connaitre les critères du diagnostic du diabète

dans le sang liée à une déficience :

- soit de l'action de l'insuline (insulinorésistance)

- soit de la sécrétion d'insuline (insulinopénie)

- soit des deux

ADA / OMS 1999

une régulation précise et efficace de la glycémie :

HYPERGLYCÉMIE Carence Intra

À long terme Insulinopénie

◦ Suivi de l’évolution du diabète au cours du temps

◦ Découverte précoce des complications du diabétes

◦ Femme enceinte : Prévention des complications du

Analyse couramment prescrite dans le cadre d’un bilan systématique de:

Glycémie = paramètre d’urgence +++

Sang total Sang capillaire Plasma

Gaz du sang Glucomètre Origine veineuse

séparer le plasma dans la demi heure suivant le prélèvement

1 ère méthode : Par électrode de mesure de la consommation d’O2

2éme méthode Par la mesure de la concentration de peroxyde d’hydrogène par

On suit la cinétique d’apparition du NADH, H+ à 340 nm qui rend compte de la

Glucose + ATP G6P + ADP

On suit à 340 nm la cinétique d’apparition du NADPH, H+

10 à 60 ans: glycémie: 3,9 à 5,6 mmol/l (0,7 à 1 g/l)

Elle est de:

Grossesse: baisse du glucose plasmatique parallèlement à l’augmentation de la

Femme enceinte: glycémie doit être  5,1 mmol/l (0,92 g/l)

Auto surveillance d’un diabétique pour contrôler le niveau de sa glycémie

Glycosurie: de + en + remplacée par glycémie capillaire

Surveiller au bout de quelques secondes l’apparition de coloration

Comparer avec une échelle colorimétrique dépistage semi-quantitatif

Faux positifs: dakin, eau de javel

Faux négatifs: contaminants bactériens

Glycémie  10 mmol/l (1,8 g/l)

Il est nécessaire de quantifier la glycosurie

Mêmes méthodes de dosage que pour la glycémie

glycémie  10 mmol/l (1,8 g/l)

Diabète mal équilibré

Le traitement demande une adaptation

Renseigne sur l’adaptation de l’organisme à l’apport

Sujet normal: GPP < 1,40 g/l (8 mmoles/l)

Apprécier la tolérance glucidique en suivant les variations

Sujet sain: HbA1c <5,7% de l’Hb totale

Une hémolyse des GR doit est réalisée avant le dosage (manuelle

Expression du résultat: standardisé soit en mmol/mol ( SI)

Diagnostic ? / Suivi ? ………

2. Maitriser l’aspect pré-analytique et analytique des différents marqueurs

3. Connaitre les complications aigues et chroniques du diabète

Surveillance du Surveillance des

Quelle est la valeur cible ?

Quelle est la valeur cible ?

507 Sujets diabétiques

Corrélation entre les

Quelle est la valeur cible ?

HbA1c: Un marqueur de suivi dediabète

Quelle est la valeur cible ?

La condensation du glucose avec les groupements aminés

Le dosage est effectué sur sérum ou plasma et réalisé par méthodes

Valeurs de référence: 165 – 285 µmol/l

❖Les complications chroniques :

❖Les complications chroniques :

HYPERGLYCÉMIE Carence Intra

❖Les complications chroniques :

❖Les complications chroniques :