Exploration du bilan

hépatique
 GENERALITE
• Le foie possède de nombreuses fonctions qui peuvent être regroupées en trois
grandes fonctions principales :
- Fonction métabolique: maintien de la glycémie grâce à la néoglucogenèse
(particulièrement importante chez les ruminants), synthèse de nombreuses
protéines, métabolisme des acides gras et cétogenèse...
- Fonction de détoxification et d’épuration :capture et transformation de
l’ammoniac,
- Fonction excréto-biliaire : transformation des composés insolubles dans l’eau en
composés hydrosolubles pour leur excrétion dans la bile, excrétion de substances
toxiques...
 Bilan hépatique
• L'exploration du bilan hépatique correspond aux tests sanguins qui permettent d'évaluer
la qualité fonctionnelle du foie
• Il permet généralement du mesuré les paramètre suivant :
• Bilirubine totale (BILT)
• bilirubine direct (BILD)
• alanine aminotransférase (ALAT)
• aspartate aminotransférase (ASAT)
• Gamma glutamyl transférase (GGT)
• Phosphatases alcaline (PAL)
•
•
•
Les enzymes hépatiques
Les AMINOTRANSFERASES
 introduction
• les Aminotransferases (transaminases) sont des enzyme hépatique du nature
protéique et d’activité catalytique
• Ils catalysent du façon réversible, le transport d’un groupement (α aminé) d’un
acide aminé sur un (acide α-cétonique)
• Parmi ces enzymes il y a deux principaux enzyme : l’Aspartate Amino
Transférase et l’alanine Amino Transferase , qui fonctionnent dans la
catabolisme du acides aminés par échange du groupe amine sur le 2-
oxoglutarate qui participe dans le foie à la formation d’urée ou sur 2-oxo-
acide correspondant pour synthétisé un autre acide aminé
•
•
 • La présence de ces enzymes dans le plasma résulte de :
_ leur libération à partir des tissus témoignant du processus normal de
renouvellement cellulaire

_ d’une modification de la perméabilité membranaire des cellules

_ de leur nécrose à la suite d’une lésion.

•
•
 Condition du prelevement

• Prélèvement sur sérum, plasma (héparinate de lithium ou EDTA).

• Il faut éviter l’hémolyse (concentration érythrocytaire de l’ALAT est 20
fois plus élevée que celle du plasma, ASAT 3 fois).

• Le prélèvement doit être rapidement centrifugé pour éviter tout risque

d’hémolyse
 Principe du dosage
• Le dosage basée sur mesuré l'activité enzymatique sérique du ASAT ou ALAT à
l’aide de réactions couplées pour permettre l’utilisation du coenzyme NADH,
H+, dont on mesure la diminution de l’absorbance.
L-aspartate + 2 oxoglutarate -------(ASAT)--------> L-glutamate  + oxalo acétate  

Oxalo acétate + NADH + H+ -------(MDH)--------> L-malate + NAD+

 

MDH : malate deshydrogénase

•
L-Alanine + 2 oxoglutarate -------(ALAT)--------> L-glutamate + pyruvate
Pyruvate + NADH + H+ -------(LDH)--------> L-lactate + NAD +
 

LDH: lactate déshydrogénase

• La vitesse d’oxydation du NADH est proportionnelle à l’activité catalytique de l’ASAT ou de l’ALAT. Elle est déterminée par mesure de la diminution de
l’absorbance à 340 nm.
• Le calcul de l’activité catalytique du sérum est donné par l’équation suivante :
Activité enzymatique en UI/L = ∆A /min × F
Avec
F (facteur théorique) = (VT×1000) / (6.3×VE×L)
VT : volume total de la réaction en ml
VE : volume d’échantillons en ml
6.3 : coefficient d’extinction du NADH à 340 nm
L : longueur du trajet de la cuvette
•
 Les interférence
• Diminution en cas de bilirubine très élevée ou spécimen très lactescent.
•
• Augmentation en cas de spécimen fortement hémolysé (activité intra
érythrocytaire est plus élevée que l’activité sérique).
•
 Variation physiologique
• Les valeurs usuelle à 37°c sont pour ASAT (UI/L) :
la femme 11-38
L’homme 12-47
L’enfant 21-50
• Pour l’ALAT (UI/L):
la femme 7-45
L’homme 11-65
L’enfant 8-34
•
•
• L’ASAT est essentiellement présente dans le cœur, mais on la trouve aussi
dans le foie le rein et les muscles. Au niveau cellulaire elle est retrouvée
au niveau du cytoplasme.
L’ASAT augmente chez l’enfant de moins de 5 ans.
• L’ALAT est essentiellement présente dans le foie, mais on la trouve aussi
dans le cœur et le rein. Au niveau cellulaire elle est retrouvée au niveau
du cytoplasme ainsi qu’au niveau de la mitochondrie.
L’ALAT augmente chez le nouveau-né avec normalisation en 6 mois.
• Ils sont plus élevées chez l’homme que chez la femme et diminuent en cas
de grossesse
L’ALAT augmente chez le nouveau-né avec normalisation en 6 mois.

•
 VARIATIONS PATHOLOGIQUES :
Augmentation de l’activité 
1/ Affections cardiaques  : L’élévation de l’ASAT est plus importante en cas d’infarctus du myocarde. (Elle commence à
augmenter dès la 12éme heure, atteint son maximum vers la 24éme heure et retourne à la normale au bout de 5 à 6 jours.
Les taux retrouvés se situent entre 2,5 et 9 fois la normale. )
2/Affections hépatiques :   L’ALAT est considérée comme étant une enzyme plus spécifique du foie que l’ASAT ( le
marqueur le plus discriminent de la cytolyse hépatique), sa concentration étant 6 fois plus élevée dans le foie par
rapport au cœur.

• Une augmentation importante des transaminases est observée dans toutes les hépatites aigues, médicamenteuse, virale
(dans l’hépatite virale aigue, l’élévation des transaminases est de 15 à 150 fois la limite de référence ) , l’hépatite
chronique, ( une élévation de rapport du RITIS (ASAT/ALAT)qui est généralement > 1 est un signe d’évolution vers
la chronicité ) ou toxique ainsi que les ischémies hépatiques d’origine veineuse ou artérielle et l’obstruction de la voie
biliaire principale.
• Au cas de l’hépatite C, on peut observer une augmentation surtout de l’ALAT qui reste modérée mais prolongée (> à 6
mois après l’infection)
• Des augmentations modérées sont observées dans les tumeurs hépatiques et les
métastases, ainsi que dans la plus part des cholestases
• Dans les cirrhoses, l’augmentation des transaminases est modérée mais le
rapport est >1
Autres causes d’augmentation des transaminases :
- Rhabdomyolyse
- Myosite sévère
- Myocardite
- Maladie coeliaque
- Embolie pulmonaire
- Maladie de wilson
- Hémochromatose

•
Diminution de l’activité des transaminases:
• En cas de déficit en vit B6, dont le dérivé phosphorylé constitue le
coenzyme des aminotransférases.
• Insuffisance rénale chronique terminale
• Chez certains alcooliques
• Chez les hémodialysés
• Dans l’insuffisance hépatique
•
Les bilirubine
 Introduction
• La bilirubine est un pigment jaune produit par la dégradation enzymatique de
l’hémoglobine (Les érythrocytes sénescents sont phagocytés par les macrophages et
l’hémoglobine est dégradée en globine et hème) ou il transport à la foie par l’albimine
• au niveau du foie, la bilirubine libre est : captée par les hépatocytes conjuguée par l'UDP-glucuronyl-transférase avec formation de
bilirubine glycuro-conjuguée ou directe hydrosoluble. Après conjugaison, sécrétée au pôle biliaire dans la bile
• Une partie du bilirubine est réabsorbé et éliminer dans les urines sous forme d'urobiline mais la majorité transformer par la flore
bactérienne en stercobiline qui confère aux matières fécales leur coloration brune
• S’accumulation anormale dans le sang et les tissus détermine un ictère.
•
 Condition du prélèvement

• Prélèvement de sang veineux dans un tube qui contient un anticoagulant (héparinate de

lithium)
• Plasma ou sérum exempt d’hémolyse et de lipémie
• Il doit être conservé à l'abri de la lumière avant que le dosage ne soit effectué
• Pas indispensable d'être à jeun, et il faut indiquer une traitements ou médicaments
peuvent modifier les résultats.
 METHODE DE DOSAGE
Methode Colorimétrie après diazotation
• Dans la technique de Jendrassik et Groff, la coloration obtenue est bleue à pH alcalin et rouge à pH neutre ou
acide.
• La réaction est instantanée avec la bilirubine directe.
• Une solubilisation est nécessaire pour la bilirubine libre, donc on faire la reaction du diazotation en milieu
acidique grâce au méthanol
bilirubine + 3,5-DPD -----------------> azobilirubine
• L’intensité de la coloration est proportionnel à la concentration du bilirubine
L O du BILD:800 nm
L O du BILT : 600 nm
 Les interférences

• L’hémolyse et la lipémie peuvent interférer le dosage de la bilirubine

• Médicaments pouvant interférer dans le dosage :
Augmentation : diurétiques, rifampicine

Diminution : phénobarbital, fibrates, aspirine

•
 Variation physiologique
Bilirubine totale
Naissance : 14 - 45 µmol /l
1ière semaine : 45 - 210 µmol /l
2ième semaine : 17 - 190 µmol /l
3ième semaine : 10 - 50 µmol /l
4ième semaine : 5 - 25 µmol /l
>1 mois et adulte : 5 - 17 µmol /l
Bilirubine libre = indirecte
Adulte : 3 -12 µmol /l
Bilirubine conjuguée = directe
Adulte : 2 - 7 µmol / l

• Valeurs plus élevées chez l'homme et chez le nouveau-né

• Grossesse : diminution lors des deux premiers trimestres.

•
 Variation pathologique
• L’elevation du BILT ou BILD ou les deux détermine un ictère
Dans les hyperbilirubinémie quand la BT est
§ < 25mg/l : pas de signes cutanéo-muqueux.
§ entre 25 et 40mg/l : un subictère.
§ > 40mg/l : ictère avec coloration jaunâtre de la muqueuse.
L’augmentation du bilirubine non conjuguë (>40 mg/L)
Ictères par excès d'apport
• Syndromes hémolytiques : les plus fréquents
• Ictères par dérivation :la bilirubine se forme à partir de précurseurs de l'hème non incorporée dans les G.R.
• Symptôme biologique : plasma : augmentation exclusive de la bilirubine non conjuguée
urines : augmentation de l'urobilinogène urinaire
•
•
Ictères par déficit de l'UDP-glucuronyl transférase

• Ictère du nouveau-né : déficit transitoire de l'enzyme

• Déficits congénitaux :

a) Maladie de GILBERT : hétérozygote; bénigne

b) Maladie de CRIGLER-NAJJAR : homozygote; maladie grave avec risque d'ictère

nucléaire
• Symptôme biologique : plasma : augmentation exclusive de la bilirubine non conjuguée
urines : augmentation de l'urobilinogène urinaire

•
L’augmentation du bilirubine conjugué (>40 mg/L)

Ictères à bilirubine conjuguée :

• Cholestase: principales causes : obstructions biliaires intra ou extra hépatiques

Symptôme biologique :plasma : augmentation exclusive de la bilirubine conjuguée

urines : urobilinogène : 0 ; ↑↑ bilirubine

selles : décolorées par absence des métabolites de la bilirubine.

L’augmentation du bilirubine conjugué et non conjugué (>40 mg/L)

Ictères à bilirubine mixte :
• Hépatites aiguës , anomalies du transport, de la conjugaison et de l'excrétion hépatocytaire
• Cirrhoses
• Maladie de DUBIN-JOHNSON : maladie congénitale rare et relativement bénigne comportant un défaut d'excrétion de la bilirubine conjuguée.

• Symptôme biologique : plasma : proportions variables de bilirubine conjuguée et non conjuguée

urines : ↑ bilirubine

•
Les phosphatases
PHOSPHATASES
alcalines
 Introduction
• Les phosphatases sont des phospomonestérases qui coupent la liaison
ester phosphorique par hydrolyse en libérant de l’acide phosphorique
• Le pH optimum de ces phosphatases varie selon l’origine organique de
l’enzyme.
• Les phosphatases alcalines (PAL) sont représentées par un groupe
hétérogène d’iso enzymes qui catalysent le transfert d’un groupement
phosphate, à pH alcalin.
• Activité optimale : pH 7,5 – pH 9,6
•
 Condition du prélèvement
Sérum et plasma
• le seul anticoagulant utilisable est l’héparine.

• Éviter les anticoagulants complexants tel que le citrate ou l’EDTA. (Étant
donné qu’ils sont inhibiteurs de l’activité de la PAL).
•
Méthode du dosage du BESSY ET COLE
• L’activité de la PAL peut être dosée par la mesure du p-nitro-4-phénol libéré à
partir du p-nitro-4-phénylphosphate selon Bessy et Coll.
 Le substrat est rapidement hydrolysé par la PAL et la vitesse de cette réaction peut être augmentée par
l’utilisation d’un tampon à base d’aminoalcool (par exemple le tampon diéthanolamine).

PAL (PH10)
Nitro-4-phénylphosphate --------------------> nitro-4phénol+phosphate ( Jaune )
• Le nitro-4-phénol développe en milieu alcalin une coloration jaune ; ainsi la
cinétique de la réaction peut être suivie directement à 405 nm au
spectrophotomètre
 Les interférences
Interférences :
• Interférence de la bilirubine à partir de 500 mol/l
• Interférence de l’hémolyse à partir d’une concentration en hémoglobine de 180
mol/l.
• Les échantillons peuvent rester stables pendant :
* 2 jours à +25 °c ;
* 7 jours à +4°c
* 1 mois à – 20°c.
•
 Variation physiologique
• Enfant : < 650 UI/l à 37°C (méthode cinétique à 405 nm)
• Adulte : <300 UI/l à 37°C
L’âge :
• Diminuée chez le nouveau né
• Augmente rapidement jusqu’au 2éme mois pour atteindre une valeur stable jusqu’à l’age de 2
ans.
La grossesse :
• L’activité de la PAL augmente chez la femme en fin de grossesse et pendant l’allaitement (du
fait de l’exagération de la production de certaines hormones et enzymes par le placenta et
les glandes mammaires).
La ménaupose :
• L’activité de la PAL diminue chez la femme ménopausée à cause de la diminution de l’activité
ostéoblastique. (l’ostéoblaste sont les  jeune cellule osseuse)
•
•
 Variation pathologique
L’augmentation du PAL (>300 UI/L)
Les affections hépatiques :
• La PAL est un marqueur de la cholestase
• Ictères par obstruction des voies biliaires
• cancers métastatiques du foie
• Calculs des voies biliaires
•
Rq:
Tout ictère avec un taux de PAL normal doit faire penser à une cirrhose, hépatite, ou hémolyse.
•
•
• Les affections osseuses :
• maladie de paget : les valeurs peuvent être 20 à 30 fois plus que la normale.
• rachitisme (signe très précoce d’avitaminose D) et ostéomalacie.
• remaniement osseux (tumeurs osseuses malignes…)
• Autres affections :
• Mononucléose infectieuse
• La maladie de Hodgkin
• Les leucémies
• La tuberculose évolutive
• L’hyperfonctionnement hypophysaire : acromégalie
La diminution du PAL (<50UI/L)
• Les hypophosphatémies congénitales
• L’hypoparathyroidie
• L’ictère hémolytique
•

•
Gamma G Transférase
 Introduction
• La GGT circulante est d’origine hépatique, c’est enzyme membranaire
contenue dans de nombreux organes : rein, pancréas, foie, rate, poumon …
• La GGT transfère un groupement gamma glutamyl d’un substrat donneur sur
un composé accepteur.

• Elle intervient dans le métabolisme des acides aminés. Sa détermination de

son activité complète l’exploration hépatique de première intention
 Méthode du dosage
Test colorimétrique enzymatique

L-- glutamyl-3-carboxy-4-nitranilide + glycylglycine -----(GGT)----> - glutamyl glycylglycine + 5-amino-2-

nitrobenzoate.
•
• Initialement incolore, le milieu réactionnel produit une coloration jaune due à l’amino-
nitrobenzoate dont la cinétique de développement est proportionnelle à l’activité de la
GT dans l’échantillon.
• Il mesuré à 405 nm
 Conditionnement et prélèvement
• Prélèvement et préparation des échantillons :
* Sérum ou plasma hépariné.
* Éviter l’hémolyse.

• Stabilité des échantillons :

* 3 jours à +25°c
* 7 jours à +4°c
* 1mois à -20°c
 Interférence positive de l’hémolyse à partir d’une concentration en hémoglobine de 120 mol/l
 Interférences médicamenteuses : phénobarbital, imipramine, contraceptifs oraux
 L’alcool interfère aussi avec l’activité de la GGT. ( l’augmentation du GGT seulement est signe du d’alcoolism)

•
 Variation physiologique
• La valeur usuelle est < 40UI/L
Le sexe :
• Le taux est plus élevé chez l’homme que chez la femme.
L’âge :
• L’activité augmente jusqu’à 50 ans et diminue par la suite
La surcharge pondérale :
• L’activité augmente avec le poids.
La grossesse :
• L’activité augmente pendant la grossesse.
L’exercice physique :
• L’activité augmente avec l’exercice physique
•
 Variation pathologique
L’augmentation du GGT
Les affections hépatiques : 
• Hépatite virale
• Cirrhose hépatique
• Hépatopathie cholestatique
• cancers du foie (cancers primitifs et cancers avec métastase hépatique).
L’alcoolisme : Son augmentation est un signe fiable d’intoxication alcoolique. (elle n'augmente pas
en cas d'intoxication aiguë, il faut en moyenne 3 semaines d'intoxication pour voir le taux augmenter)
Prise médicamenteuse : Certains médicaments inducteurs enzymatiques : anticoagulants,
antiépileptiques, neuroleptique, certains contraceptifs oraux…
Autre causes d’augmentation du GGT :
• Hyperthyroïdie (du fait du rôle inducteur enzymatiques des hormones
thyroïdiennes)
• Thyroïdite auto-immune (attribué à la liaison de la GGT aux Ig circulantes)
• Polyarthrite rhumatoïde

L’activité de la GGT diminue :

• Quand il existe un déficit congénital en cet enzyme
• En cas d’hypothyroïdie

•
Merci pour votre attention