PROCÉDURE DE REALISATION Pages :

CERIMED ANALYSES DE L’Ac HCV Applicable le :

BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1 Sign val :

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Nom JOFACK BERTHOL MBEP Christian Dr ATEBA Ghislaine

Date
Signatures

1. OBJECTIFS ET PORTÉE
a. Objectif

La réalisation du test de l’anticorps HCV permet de déterminer si le système immunitaire d’un patient
développe les anticorps spécifiques aux antigènes du virus de l’hépatite C
b. Personnes concernées
Personnel de l’unité des ELISA
2. Domaine d’application

Unité des ELISA

3. RÉFÉRENCES

Fiche d’utilisation du réactif Ac anti-HCV (HUMAN)

4. TACHES, AUTORISATIONS ET RESPONSABILITÉS

Tâches Personnes autorisées Responsables

Réalisation du test Personnels de l’unité des ELISA JOFACK BERTHOL

Validation du test Personnels de l’unité des ELISA MBEP Christian

et le responsable technique
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5. PRINCIPE
Le principe du dosage de l’anticorps HCV repose sur la réaction entre l’antigène du HCV fixé au font des
puits et l’anticorps spécifique à celui-ci s’il est présent dans le sérum du patient après une période
d’incubation les éléments non fixés sont retirer par lavage et l’ajout du conjugué est faite un second lavage
est effectué puis ajout du substrat (TMB) et en fin une solution stop est ajouté pour l’arrêt de la réaction avec
formation d’une coloration jaune. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration des
anticorps présent dans le sérum.
6. PROTOCOL DE REALISATION DU TEST
 PREPARATION DE LA SOLUTION DE LAVAGE
Elle se fait en diluant la solution Wash buffer avec de l’eau distillée fraichement préparée : 1+19
Multiplier la concentration du Wash buffer avec le volume total du flacon pour avoir le volume total d’eau
distillée à utiliser pour un flacon de Wash.
NB : Ramener les réactifs à température ambiante au moins 30min avant utilisation
 MODE OPERATOIRE
- Distribuer 100ul du CN, CP, et l’échantillon dans les puits recouvrir d’un feuillet adhésif et
incuber 60 min à 37 ͦ c ;
- Laver 08 fois avec la solution de lavage (régler le combis Wash à 350ul de solution par
puits) ;
- Dilué le conjugué au 1+20 distribuer 100ul dans les puits recouvrir d’un feuillet adhésif et
incuber 30 min à 37 ͦ c ;
- Laver 08 fois avec la solution de lavage ;
- Mélanger à parts égale substrat A et B dans un tube stérile, ajouter 100ul du mélange dans
tous les puits et recouvrir d’un feuillet adhésif incuber 15 min à 37 ͦ c à l’abri de la lumière ;
- Ajouter 100ul du Stop ;
- Lire à 450nm de densité optique dans les 15 min qui suivent l’ajout du stop.
Si les puits sont doublés ou triplé toujours faire la moyenne des DO pour avoir la DO finale.
Le teste est valable si DO blanc < 0,100 ; MCN ≤ 0,200 ; MCP ≥ 0.600, MCN-MCP ≥ 0.400
Interprétation des résultats qualitatifs
Valeur seuil (VS) = MCN+0.100
DO échantillon
Index seuil =
VS

- Si Index seuil > 1.1 → NEGATIF pour anti-HBc (non-réactif)

- Si Index seuil < 0.9 → POSITIF pour anti-HBc

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7. MATERIELS UTILISES

 Micropipette
 Plaque pour les puits
 Puits pour le test
 Réactif
 Gants
 Embouts
 Chronomètre
 Fiche de paillasse
 Combi Wash
 Huma Reader

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ATTESTATION DE LECTURE
Je reconnais avoir lu et compris la Procédure de Rédaction des Procédures

Ref : CERIMED SOP 001, version 1 11