S38
respectivement de 0,5 ng/mL et 10 pg/mL pour le THC et le THC-
COOH. La méthode est linéaire pour le THC de la LOQ à 1000 ng/mL,
et pour le THC-COOH de la LOQ à 1000 pg/mL. La répétabilité et la
justesse de la méthode ont été déterminées avec trois niveaux de
contrôle, testés 4 fois pendant 3 jours. L’ensemble des résultats pré-
sente des écarts-type inférieurs à 10 % et des biais inférieurs à 15 %.
Conclusions Une méthode d’extraction simple et robuste utili-
sant des microplaques d’extraction a été développée pour l’analyse
de THC et THC-COOH dans la salive. La méthode ainsi développée
présente une sensibilité suffisante pour l’analyse de ces deux molé-
cules dans la salive, ainsi qu’une bonne performance en termes de
répétabilité et reproductibilité.
Déclaration de liens d’intérêts Tous les auteurs sont salariés de
la Société Thermo Fisher Scientific.
Référence
[1] Moore C, et al. Cannabinoids in oral fluid following passive expo-
sure to marijuana smoke. Forensic Sci Int 2011;212:227—30.
http://dx.doi.org/10.1016/j.toxac.2016.03.063
P10
Surveillance biologique de
l’exposition professionnelle au
5-fluoro-uracile, un médicament
anticancéreux
A. Dhersin 1,2 , B. Martinez 3 , C. Verdun-Esquer 2,4 , D. Ducint 1 ,
A. Morla 5 , K. Titier 1 , M. Molimard 1,3 , M. Canal-Raffin 1,2,∗
1 Laboratoire de pharmacologie clinique et toxicologie, CHU,
Bordeaux, France
2 Centre Inserm U1219—équipe épidémiologie des cancers,
environnement et exposition, université, Bordeaux, France
3 Centre Inserm, U1219—équipe pharmaco-épidémiologie et
évaluation de l’impact des produits de santé sur les populations,
université, Bordeaux, France
4 Service de médecine du travail et pathologie professionnelle,
CHU, Bordeaux, France
5 Société Sciex, France
∗ Auteur correspondant.
Adresse e-mail : mireille.canal-raffin@u-bordeaux.fr
(M. Canal-Raffin)
Objectif L’augmentation de l’incidence des cancers depuis
ces dernières années, et donc du nombre de médicaments
anticancéreux administrés, soulève la question de l’exposition pro-
fessionnelle à ces molécules inscrites sur la liste « des médicaments
dangereux à la manipulation » adressée par le NIOSH en 2004 du
fait de leur(s) potentiel(s) effet(s) mutagène et/ou cancérogène
et/ou toxique pour la reproduction [1]. Afin d’évaluer les niveaux
d’exposition chez les professionnels de santé, des outils analytiques
performants permettant une surveillance biologique de l’exposition
professionnelle (SBEP) doivent être développés. Le 5-fluorouracile
(5FU), médicament anticancéreux largement prescrit dans le trai-
tement des cancers du sein, digestifs et ovariens, est métabolisé
et éliminé dans les urines principalement sous la forme d’-fluoro-
␤-alanine (FBAL), biomarqueur spécifique de l’exposition au 5FU.
L’objectif de ce travail a été la mise au point d’une méthode de
haute sensibilité par CL—SM/SM pour la recherche et la quantifica-
tion de FBAL dans les urines de professionnels de santé exposés au
5FU.
Méthodes Le FBAL et son étalon interne FBAL-d4 sont dériva-
tisés en milieu alcalin par du 2,4-dinitrofluorobenzène, extraits
à l’aide d’une méthode solide—liquide (cartouche HLB Oasis® ,
Waters), puis analysés par CL—SM/SM (Shimadzu UFLCXR—Sciex
QTRAP® 5500 system) à l’aide d’une colonne analytique de type
HSS T3 (2,1 × 50 mm ; 1,8 ␮m, Acquity, Waters® ) à 50◦ C. La phase
mobile se compose d’un mélange tampon d’acétate d’ammonium
(5 mM)—méthanol, évoluant selon un gradient de concentration
avec un débit fixé à 0,6 mL/min. Après validation, cette méthode
Congrès SFTA 2016
a été appliquée dans le cadre d’une SBEP sur des urines de profes-
sionnels en contact avec du 5FU et/ou avec des patients traités.
Chaque participant a fourni 1 à 2 prélèvements (début de poste et
en fin de journée de travail). Tout prélèvement supérieur à la limite
de quantification (LQ) a été considéré comme positif.
Résultats La méthode validée présente une bonne linéarité (20
à 1000 pg/mL, r > 0,994) avec une LQ de 20 pg/mL. Trente sept
urines provenant de 25 personnels de santé exposés au 5FU ont été
recueillies. Au total, 4 personnes sur 25 (soit 16 % des sujets) sont
contaminées. Sur les 37 urines analysées, 4 sont positives avec des
niveaux de concentrations faibles, compris entre 44 et 301 pg/mL
(médiane à 87 pg/mL).
Conclusion L’utilisation d’outil analytique aussi performant en
termes de sensibilité et de spécificité est indispensable dans le
cadre de la SBEP aux médicaments anticancéreux. En effet, avec
une LQ de 20 pg/mL, inférieure à celles des méthodes publiées (40
et 1000 pg/mL [2,3]), cet outil permet d’améliorer la surveillance
de l’exposition.
Déclaration de liens d’intérêts A. Morla appartient à la société
Sciex. Tous les autres co-auteurs déclarent ne pas avoir de liens
d’intérêts.
Références
[1] NIOSCH; 2004. http://www.cdc.gov/niosh/docs/2014-138/pdfs/
2014-138 v3.pdf.
[2] Yoshida J, et al. Ann Occup Hyg 2013;57:251—60.
[3] Ndaw S, et al. J Chromatogr B 2010;878:2630—4.
http://dx.doi.org/10.1016/j.toxac.2016.03.064
P11
Évaluation des performances du test
de dépistage urinaire
immunochimique des cannabinoïdes
Syva® EMIT® II Plus sur Vista : impact
sur le diagnostic de consommation de
cannabinoïdes
S. Chevalier 1 , H. Eysseric 1,∗ , N. Allibe 2 , X. Fonrose 1 ,
J.-L. Quesada 3 , F. Stanke-Labesque 1
1 Laboratoire de pharmacologie-toxicologie, CHU Grenoble-Alpes,
France
2 Laboratoire de médecine légale, université Grenoble-Alpes,
France
3 Délégation recherche clinique et innovation, CHU
Grenoble-Alpes, France
∗ Auteur correspondant.
Adresse e-mail : HEysseric@chu-grenoble.fr (H. Eysseric)
Objectif Évaluer les performances d’un dépistage immunochi-
mique urinaire des cannabinoïdes dont le seuil de positivité
préconisé par le fournisseur est de 50 ␮g/L, afin d’augmenter sa
sensibilité tout en maîtrisant sa spécificité.
Méthode L’étude a porté sur des échantillons urinaires de
patients hospitalisés au CHU de Grenoble entre mai et octobre
2015 pour lesquels une recherche de cannabis a été prescrite. Le
dépistage a été réalisé par technique immunochimique Syva® EMIT®
II Plus sur deux automates Vista Siemens® . Un aliquot a été conservé
à −20◦ C lorsque le résultat en mode semi-quantitatif était négatif
(inférieur à la limite de quantification à 15 ␮g/L) ou bien entre 15 et
95 ␮g/L. Un dosage de confirmation de l’acide carboxylique 11-nor-
d9-THC-9 (THC-COOH) a été réalisé par chromatographie gazeuse
couplée à la spectrométrie de masse (CG—SM, étalonnage de 5 à
100 ␮g/L) sur tous les aliquots conservés avec repassage simultané
sur les 2 automates en miroir Vista 1 (V1) et Vista 2 (V2). Une
comparaison statistique des résultats immunochimiques a été réa-
lisée avec ceux de la méthode de référence par CG—SM par courbe
ROC (logiciel Stata IC version 13.1 software).
Résultats Soixante-sept échantillons ont été analysés dans cette
étude dont 43 (64,2 %) ont présenté une concentration de
Congrès SFTA 2016 S39

THC-COOH supérieure à 5 ␮g/L. Le Tableau 1 suivant présente les Résultats Le temps de rétention de la metformine et de l’étalon
paramètres nécessaires à l’estimation des performances des dépis- interne est de 2,10 min. Les transitions choisies en mode MRM
tages immunochimiques sur les deux automates. (multiple reaction monitoring) sont respectivement m/z 13071 pour
Conclusion Le seuil de positivité à 50 ␮g/L présente une spécifi- la metformine, et m/z 13677 pour l’étalon interne deutéré. La
cité de 100 % mais une sensibilité faible inférieure à 44,2 ou 51,4 % linéarité de la méthode est validée sur une amplitude allant
selon l’automate. Grâce à cette étude, nous avons décidé d’abaisser de 50 à 5000 ␮g/L. Les courbes de calibration, établies à l’aide
le seuil de positivité à 20 ␮g/L (avec mention d’un risque de 5 % de d’une régression pondérée (1/C), ont affiché des coefficients de
faux positifs) et de rendre tout résultat semi-quantitatif entre 20 et régression linéaire toujours supérieurs à 0,999. À trois niveaux de
35 ␮g/L comme « faiblement positif ». concentrations, le rendement d’extraction moyen ainsi que l’effet
matrice pour la metformine et son deutéré sont respectivement
Tableau 1 Résultats. de 91 % et 101 %, avec un taux de recouvrement total de 92 %
pour la metformine et de 89 % pour son étalon interne deutéré.
V1/CPG-SM Sensibilité (%) Spécificité (%) Surface ROC (%) L’inexactitude moyenne est comprise entre 4,2 % et 5,2 %, avec une
≥ 19 ␮g/L 97,7 95,8 97,6 précision maximale de 2,0 % pour la répétabilité, et entre 5,5 % et
≥ 32 ␮g/L 69,8 100 97,6 6,3 % avec une précision maximale de 2,1 % pour la reproductibilité.
≥ 49 ␮g/L 44,2 100 La dilution au 1/10 est validée avec une précision de 0,6 % et une
inexactitude moyenne de 3,4 %.
V2/CPG—SM Sensibilité (%) Spécificité (%) Surface ROC (%) Conclusion La méthode développée et validée est rapide grâce
à une préparation simple de l’échantillon (précipitation) et un
≥ 17 ␮g/L 97,3 95,7 97,5 temps d’analyse très court (3 min). Les phases stationnaires HILIC
≥ 36 ␮g/L 70,3 100 97,5 apparaissent les plus pertinentes pour séparer des composés aussi
polaires que la metformine. La méthode ici présentée permet de
≥ 47 ␮g/L 51,4 100 confirmer biologiquement un diagnostic d’acidose lactique à la met-
formine pour permettre la prise en charge rapide du patient. La
Déclaration de liens d’intérêts Les auteurs déclarent ne pas avoir linéarité de la technique jusqu’à 5000 ␮g/L et la validation de dilu-
de liens d’intérêts. tion au 1/10 sont adaptées aux dosages en situation d’intoxication.
Déclaration de liens d’intérêts Les auteurs déclarent ne pas avoir
http://dx.doi.org/10.1016/j.toxac.2016.03.065 de liens d’intérêts.
http://dx.doi.org/10.1016/j.toxac.2016.03.066
P12
Dosage de la metformine par
P13
chromatographie liquide d’interaction Décès médicamenteux impliquant le
hydrophile couplée à la spectrométrie propofol et le cistracurium, deux
de masse molécules utilisées en anesthésiologie
F. Fraissinet ∗ , P. Seraissol , S. Nassar , M. Lavit , P. Gandia
F. Fraissinet ∗ , M. Lavit , M.-C. Céré , S. Nassar , P. Seraissol ,
Laboratoire de pharmacocinétique et de toxicologie, CHU,
P. Gandia
Toulouse, France
∗ Auteur correspondant. Laboratoire de pharmacocinétique et de toxicologie, CHU,
Toulouse, France
Adresse e-mail : fraissinet.f@chu-toulouse.fr (F. Fraissinet) ∗ Auteur correspondant.

Objectif Développer une méthode rapide de dosage de la met- Adresse e-mail : fraissinet.f@chu-toulouse.fr (F. Fraissinet)
formine dans le sérum par chromatographie liquide couplée à la
Objectif Description clinique et analytique d’un cas de décès
spectrométrie de masse en tandem (CL—SM/SM) afin de poser un
après administration intraveineuse de propofol et de cistracurium.
diagnostic biologique rapide des surdosages par la metformine.
Introduction Nous rapportons le cas de Mme X, 47 ans, sans
Introduction La metformine est un médicament antidiabétique
antécédent particulier, infirmière en milieu hospitalier, qui est
oral largement prescrit dans le traitement du diabète de type 2. Son
découverte inconsciente à son domicile. Une perfusion par voie
effet indésirable le plus grave, bien que rare, est l’acidose lactique.
intraveineuse de propofol (anesthésie général) et de cistracurium
Elle fait suite dans la majorité des cas à un surdosage accidentel lors
(curarisant), molécules utilisées en milieu hospitalier, est retrouvée
d’un traitement chronique dans un contexte d’insuffisance rénale,
sur place. À l’arrivée dans le service de réanimation, la patiente
hépatique, pulmonaire ou cardiaque favorisant l’acidose lactique.
présente une défaillance circulatoire majeure et un état de choc.
La CL—SM/SM permet une préparation d’échantillon simplifiée par
Le bilan biologique d’entrée est : pH = 6,93, lactates = 17,1 mmol/L,
précipitation et un temps d’analyse plus court qu’en CL—UV/BD.
Na+ = 154 mmol/L et K+ = 4,6 mmol/L. Elle décède dans les heures
Méthodes Les échantillons sont extraits par simple précipita-
suivant son admission en réanimation suite à un arrêt cardio-
tion avec du méthanol, avec la metformine-d6 comme étalon
respiratoire prolongé. Des prélèvements sanguins réalisés juste
interne deutéré. La prise d’essai est de 40 ␮L d’échantillon. La
avant le décès ainsi que les dispositifs de perfusion (flacons de pro-
metformine est dosée par CL—SM/SM en mode électrospray (TQ
pofol, poche, seringue, raccord de perfusion), placés sous scellés,
4500—ABSCIEX® ). La séparation chromatographique a été réalisée
sont adressés au laboratoire dans un but médico-légal.
en mode HILIC au moyen d’une phase stationnaire zwiterrionique
Méthodes Le dosage du propofol dans le sang et le liquide de
adaptée à la séparation des composés polaires (Nucleodur HILIC
perfusion est réalisé en CLHP avec détection fluorimétrique après
(150 × 2 mm—5 ␮m — Macherey-Nagel® , Germany). La phase mobile
extraction liquide—liquide par le dichlorométhane sur une prise
est constituée d’un mélange d’acétonitrile à 0,1 % d’acide formique
d’essai de 1 mL d’échantillon. Le dosage du cistracurium est réalisé
(80 %) et d’un tampon formate d’ammonium 2 mM ajusté à un pH
en CLHP—BD sur le sang et le liquide de perfusion après extrac-
3 avec de l’acide formique (20 %). Le débit de la pompe est réglé
tion liquide—liquide par l’éther de pétrole en milieu basique sur
à 0,4 mL/min avec une température d’élution à 45◦ C et une durée
une prise d’essai de 1 mL d’échantillon. Les dosages d’alcool en
d’acquisition de 3 min. La méthode a été validée selon les recom-
CG—DIF, de stupéfiants en CG—SM, la recherche de psychotropes en
mandations du COFRAC en étudiant les critères suivants : linéarité,
CL—SM/SM et d’antidépresseurs en CLHP—BD ainsi qu’un screening
dilution, taux de recouvrement, spécificité, stabilité, effet matrice,
toxicologique large en CG—SM sont également réalisés.
répétabilité et reproductibilité.