PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 10.7 2.6.8.

Pyrogènes

01/2020:20608 à examiner peut être dissous ou dilué dans une solution

corrigé 10.7 apyrogène de chlorure de sodium R à 9 g/L ou autre liquide
prescrit. Injectez lentement la solution dans la veine marginale
de l’oreille du lapin, la durée de l’injection ne dépassant pas
4 min sauf autre indication dans la monographie. La quantité
à injecter varie suivant le produit à examiner et est indiquée
2.6.8. PYROGÈNES dans la monographie. Cette quantité n’est pas inférieure à
0,5 mL, ni supérieure à 10 mL par kilogramme de masse
L’essai consiste à mesurer l’élévation de température corporelle de l’animal.
provoquée chez le lapin par l’injection intraveineuse d’une Détermination des températures initiale et maximale. La
solution stérile du produit à examiner. « température initiale » de chaque lapin est la moyenne de
Sélection des animaux. L’essai est pratiqué sur des lapins 2 valeurs déterminées à un intervalle de 30 min dans les
adultes, en bonne santé, mâles ou femelles, dont la masse n’est 40 min précédant l’injection de la solution à examiner ; la
pas inférieure à 1,5 kg, nourris suivant un régime complet, « température maximale » est la température la plus élevée
équilibré et exempt d’antibiotiques, et dont la masse corporelle notée dans les 3 h suivant l’injection de la solution à examiner.
n’a subi aucune diminution au cours de la semaine précédant Mesurez la température de chaque lapin à des intervalles
l’essai. Ne retenez pas les lapins : réguliers d’au maximum 30 min à partir d’au moins 90 min
a) qui ont été utilisés dans une recherche négative de pyrogènes avant l’injection de la solution à examiner et pendant les
pendant les 3 jours précédents, ou 3 h qui suivent. La réponse de l’animal est définie par la
b) qui ont été utilisés dans les 3 semaines précédentes dans un différence entre la température maximale et la température
essai ayant révélé la présence de pyrogènes. initiale moyenne de chaque lapin. Lorsque cette différence
de température est négative, le résultat doit être considéré
Stabulation des animaux. Maintenez les lapins comme étant zéro.
individuellement dans un lieu tranquille à une température
uniforme appropriée. Privez les lapins de nourriture pendant Excluez de l’essai les lapins accusant une variation de
la nuit précédant l’essai et jusqu’à la fin de celui-ci ; privez-les température dépassant 0,2 °C entre 2 lectures successives
également d’eau pendant l’essai. Effectuez l’essai dans un dans la détermination de la température initiale et utilisez
lieu tranquille où aucune perturbation ne risque d’exciter les seulement les lapins dont les températures initiales ne
animaux et dont la température ambiante ne s’écarte pas de s’écartent pas les unes des autres de plus de 1 °C. Tout lapin
plus de 3 °C de celle de la pièce où les lapins ont séjourné dont la température initiale est supérieure à 39,8 °C ou
pendant au moins les 18 h qui précèdent l’essai. inférieure à 38,0 °C doit être exclu de l’essai.
Appareillage. La verrerie, les seringues et les aiguilles utilisées Interprétation des résultats. Selon les résultats obtenus,
dans l’essai sont lavées soigneusement avec de l’eau pour l’essai effectué d’abord sur un groupe de 3 lapins peut être
préparations injectables et stérilisées dans un four à air chaud répété sur d’autres groupes de 3 lapins jusqu’à concurrence
à 250 °C pendant 30 min ou à 200 °C pendant 1 h. de 4 groupes. La substance satisfait à l’essai si la somme
des réponses du 1er groupe n’est pas supérieure à la valeur
Dispositif de fixation. Les lapins, dont la température est indiquée dans la 2e colonne du tableau 2.6.8.-1 ci-après. Si la
mesurée au moyen d’un appareil électrique, sont placés dans somme des réponses se situe au-delà de la valeur indiquée
des boîtes munies d’un dispositif qui maintient l’animal par dans la 2e colonne mais en-deçà de la valeur indiquée dans la
la nuque à l’aide d’un collier spécial non serré. Ce dispositif 3e colonne du tableau, répétez l’essai comme indiqué ci-dessus.
laissant libre le reste du corps du lapin, lui permet de garder Si la somme des réponses est supérieure à la valeur donnée
une position normale. Les animaux ne sont pas immobilisés dans la 3e colonne, le produit ne satisfait pas à l’essai.
par des courroies ou par des moyens analogues, susceptibles
de présenter un danger pour eux. Ils sont placés dans les boîtes Tableau 2.6.8.-1
au moins 1 h avant le 1er enregistrement de la température et y
Nombre de Le produit satisfait à l’essai Le produit ne satisfait pas
restent jusqu’à ce que l’essai soit achevé. lapins si la somme des réponses à l’essai si la somme des
Thermomètres. Le thermomètre ou le dispositif électrique n’est pas supérieure à : réponses est supérieure à :
utilisé indique la température avec une résolution de 0,1 °C. Il 3 1,15 °C 2,65 °C
est introduit dans le rectum du lapin à une profondeur de 5 cm 6 2,80 °C 4,30 °C
environ, cette profondeur restant constante pour chaque lapin
dans un essai donné. S’il s’agit d’un dispositif électrique, il peut 9 4,45 °C 5,95 °C
être maintenu en position pendant toute la durée de l’essai. 12 6,60 °C 6,60 °C
Essai préliminaire. 1-3 jours avant l’essai du produit, traitez,
parmi les animaux sélectionnés au préalable, ceux qui n’ont Les animaux utilisés dans un essai des pyrogènes où
pas été utilisés pendant les 2 dernières semaines, en leur l’augmentation moyenne de la température est supérieure à
injectant par voie intraveineuse et par kilogramme de masse 1,2 °C sont éliminés définitivement.
corporelle, 10 mL d’une solution apyrogène de chlorure de
Conformément aux dispositions de la Convention européenne
sodium R à 9 g/L chauffée à une température voisine de
sur la protection des animaux vertébrés utilisés à des fins
38 °C. Mesurez la température de chaque lapin à partir d’au
expérimentales ou à d’autres fins scientifiques, les essais
moins 90 min avant l’injection et pendant les 3 h qui suivent.
doivent être réalisés de façon à utiliser le moins d’animaux
L’animal accusant une variation de température supérieure à
possible et à entraîner le moins de douleur, souffrance, détresse
0,6 °C n’est pas utilisé.
ou nuisance durable possible. Chaque fois que possible
Essai définitif. Effectuez l’essai sur un groupe de 3 lapins. et après validation spécifique pour le produit considéré,
Préparation et inoculation de l’échantillon. Chauffez au l’essai des pyrogènes est remplacé par l’essai d’activation des
préalable les liquides à examiner à environ 38 °C. L’échantillon monocytes (2.6.30).

Les Prescriptions Générales (1) s’appliquent à toutes les monographies et autres textes 6741