1 FASE: GLICLISE

O processo completo do catabolismo aerbio da glucose compreende uma primeira fase , a gliclise, em que o oxignio no intervm. Tem lugar no citossol e conduz a produo de duas molculas de cido pirvico (trioses). A energia da oxidao da glucose recuperada n sntese de duas molculas de ATP a partir de ADP e de fosfato inorgnico, como se viu no captulo anterior C6H12O6 + 2ADP + 2Pi ------> 2 C3H4O3 + 2ATP + 4H+ + 4e-

Tambm como se viu, os electres e os protes resultantes da oxidao por desidrogenao f m captados por 2 NAD que no final da gliclise se encontram reduzidos a 2 NADH2 .

2 FASE: CICLO DE KREBS

A e m a

segunda fase do processo desenvolve-se j no interior da mitocndria. As molculas d cido pirvico penetram na matriz mitocondrial e so processadas, nomeadamente por u complexo enzimtico que compreende o conhecido Ciclo de Krebs. Basicamente, nest segunda fase, opera-se a ciso (oxidao) da molcula de triose em trs molculas de dix de carbono, com libertao de electres e de protes, que so temporariamente capturados por transportadores especficos: os NAD e os FAD.

De incio o cido pirvico sofre uma descarboxilao (com libertao de CO2), de onde resul a formao de aldedo actico. Com a participao de uma molcula complexa, designada por C zima A (CoA-SH) o aldedo actico sofre uma oxidao (por desidrogenao), da resultando a il-coenzima A, bem como a reduo de um NAD em NADH2. sob a forma de acetil-coenzima A que os dois carbonos restantes do cido pirvico, e ntram no ciclo de Krebs. Em presena de gua, forma-se cido ctrico e liberta-se o Co A -SH.

Esta a primeira etapa do Ciclo de Krebs, que a seguir se apresenta. No sendo rele vante, neste contexto, o estudo profundado do conjunto de reaes que compem o Ciclo, apenas nos interessa destatar: 1. partindo de uma molcula com 4 carbonos, o cido oxalo-actico, obtem-se, por adio co mo acetil-coenzima A, uma molcula com 6 carbonos, o cido ctrico; 2. aps uma "volta" completa, regressa-se de novo a uma molcula com 4 carbonos, o ci do oxalo-actico. Os dois carbonos foram "perdidos" sob a forma de CO2; 2. no contexto das diversas reaes que compem o Ciclo, ocorreram 4 oxidaes, das quais resultaram 3 NADH2 e 1 FADH2; 3. entre as diversas reaces do Ciclo, conta-se ainda com a fosforilao de um ADP em A TP.

Em concluso, se considerarmos o conjunto de reaces iniciadas com a gliclise e termin adas no Ciclo de Krebs ( e tendo em conta que por cada glucose o Ciclo d 2 "volta s", verifica-se que resultaram

Portanto: 4 ATP, 10 NADH2 e 2 FADH2

3 FASE: FOSFORILAO OXIDATIVA

Numa terceira fase, designada por fosforilao oxidativa, a membrana interna da mito cndria desempenha o papel principal. Como se viu, a mitocndria possui duas membranas limitantes: a membrana externa e a membrana interna. Esta ltima fortemente pregueada, pelo que a sua superfcie tota l muito superior da membrana externa. As referidas pregas so comumente designadas por cristas mitocondriais. Entre as duas subsiste um espao, designado por espao i ntermembranar. O interior da mitocndria encerra a matriz mitocondrial. precisamente na matriz mitocondrial que se situa o genona da mitocndria, herana da sua condio procaritica, ribossonas e, para alm de muitas outras substncias, os enzim as e os coenzimas que intervm nas reaces acima descritas, nomeadamente o Ciclo de K rebs. A membrana interna da mitocndria possui, como todas as membranas, protenas intrnsec as e extrnsecas. Aquelas que intervm na fosforilao oxidativa possuem a particularida de de serem susceptveis de captar e de ceder electres. Dada a mobilidade que lhes assiste, em virtude da fluidez da membrana, elas podem contactar umas com as out ras e operar as transferncias de electres segundo uma escala crescente de potencia is redox: a cadeia respiratria. Ao longo desta cadeia, os electres deslocam-se des de o NADH2 ou um FADH2, com potencial redox negativo at ao oxignio (aceitador fina l) que possui um potencial redox positivo, de tal forma que a transferncia de ele ctres do NADH2 ao oxignio se efectua com uma grande variao de energia livre: DG = - 5 2 Kcal.M-1. Essa energia utilizada para a sntese de ATP.

Os diferentes componentes da cadeia agrupam-se em 3 complexos, que operam sequen cialmente:

Complexo I O Complexo I constitudo por : a) a NADH-desidrogenase que actua conjugadamente com um coenzima, a Flavina Mono nucletido (FMN)

b) duas (ou trs) protenas Fe/S, isto , protenas que tm como grupo prosttico, associa e ferro e enxofre, com potenciais redox diferentes.

c) a Ubiquinona ou Coenzima Q, molcula lipfila, relativamente pequena, solvel na bi camada de fosfolpidos. A ubiquinona goza de grande mobilidade, podendo deslocar-s e de uma das faces da membrana, outra. Num primeiro tempo, a NADH-desidrogenase catalisa a oxidao dos NADH2 em NAD. Os 2 electres e os 2 protes da resultantes so captados pela FMN, que deste modo se v reduz ida em FMNH2. A seguir, as protenas de Fe/S, detentoras de potenciais redox superiores ao da FM NH2, captam os electres. Cada protena de Fe/S s fixa 1 electro de cada vez. A FMN, ao perder os seus dois electres a favor das protenas de Fe/S, perde igualme nte os dois protes, do lado oposto da membrana, isto , no espao intermembranar. Diz -se que os protes foram translocados da matriz para o espao intermembranar. A ubiquinona susceptvel de sofrer dois graus de reduo, passando pelos estados de qu inona, semi-quinona e hidroquinona, transportando assim dois electres que lhes so cedidos pelas protenas Fe/S, e dois protes capturados no meio matricial

Complexo II

O complexo II, ou complexo b-c1, constitudo pelos citocrmios b , c1e c.Os citocrmio s so protenas que possuem como grupo prosttico, um heme, isto , uma estrutura molecu lar tetraporfrica (como se encontra na hemoglobina) que encerra um io ferro, o qua l se pode encontrar alternativamente no estado ferroso Fe2+ ou no estado frrico F e3+, consoante se encontre reduzido ou oxidado. Fe++ <===> Fe+++ + e-

O citocrmio b uma protena intrnseca com um potencial redox superior ao da hidroquin ona. Consequentemente, o citocrmio b capaz de "roubar" um electro hidroquinona. Ne ste acto, o proto correspondente translocado para o espao intermembranar.

O citocrmio c1, por sua vez, sendo detentor de um potencial redox superior ao do citocrmio b, est em condies de oxidar este ltimo. Finalmente o citocrmio c, que uma otena extrnseca, oxida o citocrmio c1. Note-se que, como os citocrmios s transportam um electro de cada vez, ser necessrio q ue cada um sofra duas oxido-redues para que a ubiquinona seja "descarregada" dos s eus 2 electres e 2 protes.

Complexo III O complexo III, ou complexo citocrmio-oxidase, constituido pelos citocrmios a e a3 . O citocrmio a3, em lugar de ferro, tem cobre e , de todos, o que possui maior po der redox. Os electres transitam do citocrmio c, para o citocrmio a e, finalmente, para o cito crmio a3.

Desconhece-se o mecanismo pelo qual o complexo III, pela passagem de e electres, transloca 2 protes para o espao intermembranar. Tal facto poder estar relacionado c om alteraes alostricas ao nvel das protenas dos citocrmios.

Por ltimo, o citocrmio a3 cede os electres ao oxignio, havendo ento lugar formao d

No esquema seguinte, procura-se inserir o fluxo electrnico na escala dos potencia is redox dos diferentes intervenientes na cadeia respiratria. Verifica-se igualme nte que a sequncia de reaces de oxido-reduo da cadeia respiratria, libertam-se, aprox madamente, 52 Kcal M-1.

Como se viu, uma parte desta energia foi empregue na translocao de protes, da matri z para o espao intermembranar (protes extrados dos NADH2 e FADH2 e protes provenient es da fase aquosa da matriz). A oxidao de um NADH2 traduz-se na translocao de 6 prote s; da oxidao de um FADH2 resulta a translocao de 4 protes. Sendo a membrana mitocondrial interna, impermevel aos ies, a contnua translocao de pr otes para o espao intermembranar, gera uma desigualdade de concentrao e, consequente mente, um gradiente de cargas elctricas ao qual corresponde um potencial de membr ana de 150 mV. A energia libertada pelo transporte de electres , assim, convertida num gradiente electroqumico ou fora protomotriz (designao obtida por analogia com a fora hidromotriz das barragens hidroelctricas). Os protes regressam matriz atravs de estruturas proteicas integradas na membrana, os ATPsomas, em cuja constituio se encontram ATPases, isto , enzimas que catalisam a fosforilao de ADP em ATP. Atravs dos ATPsomas, a energia inerente ao gradiente ini co convertida em ligaes fosfato. Os ATPsomas funcionam assim (em analogia com as b arragens hidroelctricas) como turbinas produtoras de ATP. ADP + Pi <--------------------> ATP DG = - 8 Kcal M-1

Verifica-se ser suficiente a fora protomotriz associada a 2 protes translocados pa ra se sintetizar 1 ATP. Portanto, por cada NADH2 oxidado, formam-se 3 ATP. Difer entemente, a oxidao dos FADH2, apenas transloca 4 protes, da resultando, consequente mente, 2 ATP. Tendo em conta que a sntese de 1 ATP a partir de ADP e de fosfato inorgnico consom e 8 Kcal Mol-1, a produo de 3 ATP dever consumir 24 Kcal Mol-1 . Podemos agora calc ular o rendimento inerente oxidao de 1 NADH2: 24.000 / 52.000 x 100 = 46%

O transporte de electres inibido especificamente por certas substncias que actuam em pontos precisos da cadeia respiratria. Os mais conhecidos so a rotenona (insect

icida) e o amital (barbitrico), que bloqueiam o transporte entre o NAD e a ubiqui nona (CoQ), a antimicina (antibitico) que bloqueia o transporte entre os citocrmio s b e c1, e o cianeto e o nonxido de carbono (CO) que bloqueiam o transporte entr e o Complexo III e o oxignio.

Em resumo, os 10 NADH2 e os 2 FADH2 resultantes dos catabolismos ocorridos quer no citosssol (gliclise), quer na mitocndria, so "regenerados" pela cadeia respiratri a. A sua oxidao liberta electres e protes. O transporte dos electres atravs de uma ca eia de componentes membranares de potenciais redox crescentes, liberta energia q ue, em parte, utilizada na acumulao de protes no espao intermembranar. A energia ine rente ao gradiente electroqumico assim gerado, utilizada ao nvel dos ATPsomas, par a a sntese de ATP. Deduz-se consequentemente que que o processo completo de respi rao aerbica, gera 38 ATP por molcula de glucose, sendo que 4 provm da gliclise e do C clo de Krebs e 34, da cadeia respiratria (fosforilao oxidativa). _________________________________________________________________________