Experimento1. Espectrofotometria: Conceitos e Aplicaes. 1.

Demonstrar os clculos para a obteno do reagente Biureto e das solues-padro de BSA;

Preparao do Biureto Clculo para a preparao de 100 ml de Biureto: CuSO4 0,15% ( m / v) = 0,15 g em 100 ml de soluo. Tartarato de sdio 0,6% (m/v) = 0,6 g em 100 NaOH 0,75 mol/L = 30g em L = 3g em 100 ml Calculo para o NaOH: M=(m/MMxV(L)) m = 0,75 mol/L * 40gr * 1L Clculo para a preparao de 100 ml das solues padro de BSA: Concentrao 0, 125 % = 0, 125(g) em 100 ml 0, 125 (g) _______________100 ml x (g) _______________ 1 ml x= 1,25*10^-3 (g) Concentrao 0, 25% = 0, 25 (g) em 100 ml 0, 25(g) _______________ 100 ml x (g) _______________ 1 ml x= 2, 5*10^-3 (g) Concentrao 0,50 % = 0,50 (g) em 100 ml 0,50(g)_______________ 100 ml x (g) _________________ 1 ml x = 5*10^-3 (g) Concentrao 0,75 % = 0,75 (g) em 100 ml 0,75(g) _______________ 100 ml x (g) ________________ 1 ml x = 7,5*10^-3 (g) Concentrao 1 % = 1 (g) em 100 ml 1 (g) _________________ 100 ml x (g) _________________ 1 ml x = 1*10^-2 (g) Concentrao 1,25 % = 1,25 (g) em 100 ml 1,25(g) ________________ 100 ml x (g) _________________ 1 ml

x = 1,25*10^ 2 (g) Concentrao 1,75 % = 1,75 (g) em 100 ml 1,75(g) __________________ 100 ml x (g) ___________________ 1 ml x = 1,75*10^ 2 (g)

2. Plotar a absorbncia da amostra do item 1 em funo do comprimento de onda, determinando o comprimento de onda de mxima absorbncia;

Na concentrao de 0,25%, obteve -se 0,109 de absorbncia.

3. Plotar as absorbncias das solues padro em funo da concentrao e calcular a absortividade;

C n ent (X) desconhecida da sol o: Como se sabe que sua absorbncia foi de 0,14, basta substituir na equao da reta: Y = 0,36x + 0 0,14 = 0,36x + 0 X = (0,14 0) / 0,36 X = 0, 388 (% (m/v))

Absortividade: Temos uma relao que frequentemente referida comoLei de Lambert-Beer: A = a.b.c Onde A = absorbncia, a = constante de proporcionalidade (absorti idade ou coeficiente de extino), b = caminho ptico (em centmetros) e c = concentrao.
Absorbncia (nm) 0,05 0,1 0,14 0,19 0,25 0,33 0,49 0,62 Concentrao 0,125 0,25 X 0,5 0,75 1 1,25 1,75 Caminho ptico 1 1 1 1 1 1 1 1 Absorti idade A=(a.b.c) 0,400 0,400 0,366 0,380 0,333 0,330 0,392 0,354

4. Escreva as equaes de equilbrio das espcies qumicas envolvidas nas titulaes (de todas as etapas).
A reao do biureto ocorre devido presena de ligaes peptdicas, dando positiva para protenas e peptdeos com trs ou mais resduos de aminocidos. As protenas e peptdeos do uma colorao violeta caracterstica quando tratadas por uma soluo diluda de sulfato de cobre, em meio alcalino.

Ao ocorrer reao do cobre (figura 2) com as cadeias polipeptdicas, pode -se observar uma colorao violeta caracterstica, que varia de acordo com a concentrao de albumina.

EXERCCIO. Descreva o principio do mtodo de Biureto para a dosagem de protenas relacionando suas vantagens e desvantagens, em relao a outros mtodos para dosagem de protena. O mtodo de Biureto se baseia na reao do reativo do biureto (mistura de cobre e hidrxido de sdio) com um complexante que estabiliza o cobre em soluo. O cobre, em meio alcalino, reage com protenas. O produto de reao apresenta duas bandas de absoro, uma em 270 nm e outra em 540 nm. A banda na regio de 540 nm a mais utilizada para fins analticos, porque diversas substncias, normalmente presentes na maioria dos meios analisados, absorvem na regio de 270 nm causando muita interferncia no mtodo. Tem como vantagens a diversidade de meios onde pode ser aplicado, ser rpido, utilizar reagentes de baixo custo e no ter muita variao de absortividade especfica para diferentes protenas. Porm tem como desvantagem no ser muito sensvel.